【正文】 測定中的特殊問題 ? 對內(nèi)標的純度要求：從實際應用角度出發(fā)，不苛求內(nèi)標具有高純度與 高含量，只要求在同一次測定中，標準曲線和樣品各管內(nèi)內(nèi)標加入量 相等。 給藥劑量： 生物樣品取樣： 藥代動力學參數(shù)計算： 研究過程標準化與規(guī)范化： 靶向給藥系統(tǒng)： 靶組織分布：活性成分 透皮給藥系統(tǒng)： 藥物透過皮膚吸收進入血液循環(huán)從而治療疾病的新型給藥系統(tǒng)，其特點是可以避免口服給藥可能發(fā)生的肝臟首過效應及胃腸滅活效應，克服藥物口服生物利用度不高的問題，可以維持恒定的血藥濃度或藥理效應、延長作用時間、減少毒副作用、增強用藥順應性等。 若藥物吸收速度與臨床療效無關 ,吸收程度相同但吸收速度不同的藥物也可能達到治療等效。 相對生物利用度： 以其他非靜脈途徑給藥的制劑為參比獲得的藥物活性成分吸收進入體循環(huán)的相對量。 4. 臨床前藥物代謝動力學技術平臺 建設目標 （ 略） 建設內(nèi)容： ? 天然產(chǎn)物活性成分及中藥藥物代謝動力學研究； ? 天然藥物多成分藥代動力學行為與血清藥理學、血清化學及多成分相 互作用的整合評價研究； ? 藥物代謝動力學與代謝組學整合研究； ? 細胞分子水平的體外藥代動力學高通量篩選與評價技術研究； ? 代謝產(chǎn)物的快速鑒定、活性預測及活性代謝物的藥代動力學研究； ? 藥物代謝相互作用的整體和離體研究，臨床藥物相互作用預測； ? 生物技術藥物及基因治療藥物的藥代動力學研究； ? 難溶（不溶）藥物和新型藥物釋放系統(tǒng)的體內(nèi)外代謝動力學研究； ? 藥代動力學理論模型等方面的研究。 3. 達到實現(xiàn)安全、有效、穩(wěn)定、可控和用藥方便 “重大新藥創(chuàng)制 ” 科技重大專項 “ 十一五 ” 計劃課題申報指南 依據(jù) 《 國家中長期科學和技術發(fā)展規(guī)劃綱要（ 2006－ 2020年） 》 的部 署，國務院決定組織實施 “ 重大新藥創(chuàng)制 ” 科技重大專項（以下簡稱專 項）。 絕對生物利用度： 以靜脈制劑為參比獲得的藥物活性成分吸收進入體內(nèi)循環(huán)的相對量。 若兩制劑中所用輔料本身并不會導致有效性和安全性問題，生物等效性研究是證實兩制劑治療等效性最合適的辦法。 實驗設計與操作 自身交叉對照： 清洗期（ Washout Period）： 受試動物選擇： 例數(shù)： 分組： 動物福利： 參比制劑 ( Reference Product , R )： 受試制劑 ( Test Product， T )： 參比制劑和受試制劑含量差別不能超過 5%；參比和受試制劑均應注明研制單位、批號、規(guī)格、保存條件、有效期。 ? 內(nèi)標濃度的選擇 ：一般內(nèi)標加入量應控制在使標準曲線中段的藥物與 內(nèi)標物響應值（注意不是濃度）比近似為 1 。 ? 衍生化方法： 藥物 （不能直接測定或可測性差） 藥物衍生物 （新化合物直接測定） 衍生化反應；定量形成新的化合物 ? 化學反應方法： 底物 產(chǎn)物 在被測 藥物 的作用下 （產(chǎn)物是依賴于被測組分定量形成的） （產(chǎn)物是可測的） ? 生物反應（效應）方法： 生物效應變化 在被測 藥物 的作用下 生物效應的變化是定量的； 生物效應是定量可測的； （注意：生物效應的變化范圍） 4. 方法學確認（評價、確證、考評、 validation ） “生物樣品測定的關鍵是方法學的確證。 分析批： 包括待測樣品 、 適當數(shù)目的標準樣品和 QC樣品的完整系列 。 質(zhì)控樣品： 即 QC樣品 ， 系指在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的 樣品 ， 用于監(jiān)測生物分析方法的重復性和評價每一分析 批中未知樣品分析結果的完整性和正確性 。 體內(nèi)藥物分析方法的評價內(nèi)容： （ 1） Selectivity: （ 2） Linear Range and Response Factor： （ 3） InterDay Precision and Accuracy: （ 4） IntraDay Precision and Accuracy: （ 5） Dilution Integrity: （ 6） Sensitivity: （ 7） Recovery (Extraction Efficiency)： （ 8） Matrix Effects: （ 9） Carryover Evaluation： （ 10） Stability: （ 11） Relative Retention: 受試驗藥物標準樣品的色譜圖 正常生物樣品（空白）色譜圖 （ 6個不同來源的受試個體） 正常生物樣品外加受試藥物色譜圖 （ 6個不同來源的受試個體：血漿種屬；血漿外加藥物濃度；內(nèi)標濃度） 給藥后生物樣品色譜圖 （受試種屬；給藥途徑、劑量；生物樣品采集時間點） Selectivity: 被測組分與內(nèi)源性物質(zhì)、試劑中雜質(zhì)、代謝產(chǎn)物以及其它干擾物質(zhì)有良好的分離 。 建立標準曲線時應隨行空白生物樣品，但計算時不包括該點。（ nominal concentration ） 100) Precision and Accuracy Dilution Integrity: 目的是為解決在樣品測定過程中，出現(xiàn)超過最高定量上限的樣品的測定問題?；|(zhì)因子 ): peak area (fortified samples) / peak area (analytical samples 含有生物基質(zhì)、已知濃度樣品 不含有生物基質(zhì)、已知濃度樣品 IS adjusted Matrix Factor (內(nèi)標校正的基質(zhì)因子 ): [ratios of peak area(Drug/IS)] (fortified samples) [ratio of peak area (Drug/IS)] (analytical samples) 含有生物基質(zhì)、已知藥物和內(nèi)標濃度樣品 不含有生物基質(zhì)、已知藥物和內(nèi)標濃度樣品 Carryover試驗 ： Run Code 藥物 LLOQ（信號） 內(nèi)標（信號） 雙空白生物樣品 1 B1 A1 一般是在分析測定標準曲線的定量上限濃度的樣品之后，立即測定 一個空白樣品（最好是雙空白生物樣品）。 藥物制劑中的穩(wěn)定化性， 提高生物利用度問題， 延長體內(nèi)時間， 體內(nèi)、外評價問題。 影響與血漿蛋白的結合： ? 大多數(shù)藥物吸收后，在不同程度上可與血漿蛋白結合； ? 結合型與游離型藥物保持一定的動態(tài)平衡； ? 游離型藥物可轉(zhuǎn)運、保持活性； ? 結合型藥物一般沒有藥理活性； ? 當游離型藥物的濃度降低時，被結合的藥物又能再分離出來；這種機 制有利于避免血藥濃度瞬間過高，也可以延長藥物的治療作用時間。當兩種酸性藥物（或堿性藥物）合用時，可相互競爭酸性（或堿性）載體，競爭力弱的由腎小管分泌途徑排出的就少，可以引起一些不良反應。 Pgp對 藥物外排作用主要有 4大特點： ( 1 ) 底物廣泛： ( 2 ) ATP 依賴性： ( 3 ) 飽和性： ( 4 ) 競爭性： 當兩種親和力不同的底物同時存在時，親和力大的底物易與 Pgp結合而被泵到細胞外，親和力小的底物與 Pgp結合少， 易在細胞內(nèi)蓄積 Pgp 的轉(zhuǎn)運作用存在著飽和性，只有一部分藥物以小劑量給予時，才會受到 Pgp 主動排泄對生物利用度的影響。 制劑輔料 某些制劑輔料也能夠調(diào)節(jié) Pgp 的活性： 例如： 吐溫 80 普郎尼克 P85 tritonX2100 cremophor EL PEG 300 PEG 400 (2 ,6二甲基 β環(huán)糊精 ) TPGS 等 首過代謝： 難溶性藥物： 藥物釋放時間： 妨礙吸收的多種類型反應能降低生物利用度。 0 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 7205101520253035404550 首 次 A 末 次 A濃度(ng/ml)時 間(h)首次和末次口服復方后氨氯地平 0 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72010203040506070 首 次 T 末 次 T濃度(ng/ml)時 間(h)首次和末次口服復方后特拉唑嗪 復方： A：首次：低； 末次：高； T：首次： 末次： 相近； 復方多次連續(xù)用藥后， A血藥升高，表明 T抑制了代謝 A的藥酶。這些 實驗結果可為先導化合物評選和結構優(yōu)化提供依據(jù)。 七 .體內(nèi)藥物（代謝產(chǎn)物）檢測技術： ? 液相色譜 離子阱質(zhì)譜多級離子檢測； ? 液相色譜 單極與三級串聯(lián)質(zhì)譜正、負離子與大氣化學離 子檢測； ? 氣相色譜 質(zhì)譜檢測； ? 氣相色譜氫火焰、氮磷及電子俘獲檢測； ? 高效液相色譜紫外、熒光、電化學及化學發(fā)光檢測； ? 氘或碳 14 標記藥物的液體閃爍計數(shù)測量； ? 動物整體放射自顯影研究藥物組織分布； ? 蛋白多肽的同位素碘標記及計數(shù)測量； ? 免疫法測定蛋白質(zhì)藥物濃度； ? 生物學活性法測定蛋白藥物濃度； ? 毛細管電泳分離測定核酸藥物堿基； ? 定量 PCR 測定基因藥物的組織分布；