05版藥典微生物限度檢查法操作要點(diǎn)(更新版)
【正文】 稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的均值報告菌數(shù)；若比值大于2但不超過5時，以低稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)；當(dāng)出現(xiàn)比值大于5，或高稀釋級的菌落數(shù)大于或等于低稀釋級的菌落數(shù)等異常情況時，應(yīng)查明原因再行檢查，必要時，應(yīng)進(jìn)行方法的重新驗證。若同稀釋級兩個平板的菌落平均數(shù)不小于15，則兩個平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。采用平皿法進(jìn)行菌數(shù)測定時，應(yīng)取適宜的連續(xù)2～3個稀釋級的供試液。方法同試驗組，驗證大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌檢查法時的陰性對照菌采用金黃色葡萄球菌；驗證銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌檢查法時的陰性對照菌采用大腸埃希菌。（5個試驗組和2個本底菌）（二）控制菌檢查方法的驗證 驗證時，依各品種項下微生物限度標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢查的控制菌選擇相應(yīng)驗證的菌株，驗證大腸菌群檢查法時，應(yīng)采用大腸埃希菌作為驗證菌株。 共80個本底菌組：10個細(xì)菌計數(shù)，10個霉菌和酵母菌計數(shù)。細(xì)菌計數(shù)驗證所用的平皿共14個，其中6個用于試驗組計數(shù)，6個用于菌液組計數(shù)，2個用于細(xì)菌本底菌計數(shù)，傾倒?fàn)I養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；霉菌和酵母菌計數(shù)所用的平皿共10個，其中4個用于試驗組計數(shù)，4個用于菌液組計數(shù)，2個用于霉菌本底菌計數(shù)，傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（虎紅瓊脂培養(yǎng)基）。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5~7天，加入3~5ml ％無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。05版藥典微生物限度檢查法操作要點(diǎn)林麗英05版藥典微生物限度檢查法與以往藥典的最大不同就是多了方法驗證。％無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為50～l00cfu的菌懸液。 共24個本底菌組：2個細(xì)菌計數(shù)，2個霉菌和酵母菌計數(shù)。用該法做一個樣品的細(xì)菌、霉菌和酵母菌計數(shù)驗證試驗，需要多少個平皿呢？試驗組：510=50個，即每個菌株做2ml共需50個；菌液組：52=10個，即每個菌株的加菌量，每株2個皿。即每個驗證樣品至少制備7個膜。（2）陰性菌對照組 設(shè)立陰性菌對照組是為了驗證該控制菌檢查方法的專屬性。供試液通過離心沉淀以后也可用平皿法檢查。點(diǎn)計菌落數(shù)后，計算各稀釋級供試液的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報告規(guī)則報告菌數(shù)。(2)當(dāng)同時有2個稀釋級的菌落數(shù)符合上述規(guī)定時，視兩者比值(比值為高稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值除以低稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值)而定。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。陽性對照試驗應(yīng)檢出相應(yīng)的控制菌。表2 大腸菌群菌落形態(tài)特征培養(yǎng)基菌落形態(tài)曙紅亞甲藍(lán)瓊脂呈紫黑色、淺紫色、紅色或粉紅色，圓形，扁平或稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤麥康凱瓊脂鮮桃紅色或粉紅色，圓形，扁平或稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤 確證試驗 從上述分離平板上挑選4～5個疑似菌落，分別接種于乳糖發(fā)酵管中，培養(yǎng)24～48小時。若平板上無菌落生長，判供試品未檢出梭菌；若平板上有菌落生長，應(yīng)挑選2～3個菌落分別進(jìn)行革蘭染色和過氧化氫
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