【正文】 S 在 NHL 病人自身骨髓移植中的應(yīng)用也作了研究。兩例病人移植順利并無(wú)并發(fā)癥。則神經(jīng)母細(xì) 胞瘤細(xì)胞被滯留，“干凈”的骨髓自然流下。而 IMMS 凈化骨髓不需要特異的 ISOTYPE 抗體，也不受正常骨髓中抗補(bǔ)體因子的影響，可以清除低水平抗 245 原表達(dá)的腫瘤細(xì)胞。分析碳疽桿菌芽孢時(shí)，可檢測(cè)到 l00 個(gè)芽孢。另外，凍存過(guò)的樣品中可能包含死菌，不適合 培養(yǎng)，而應(yīng)用 PCR 則可以很好地進(jìn)行檢測(cè)。最低檢測(cè)限可達(dá) l05/mL 樣品。另外，磁珠還用于單鏈 DNA 探針的標(biāo)記和 genomic Walking 等。 (3) DNA 序列分析 將親和磁珠和 PCR 結(jié)合起來(lái)可以進(jìn)行 DNA 測(cè)序。親和素一生物素之間的結(jié)合力非常強(qiáng)（ Kd＝ l015），有利于操作。但要經(jīng)過(guò)多次的洗滌步驟，特異性也會(huì)有所降低。由于它能特異性地與靶物質(zhì)結(jié)合并使之具有磁響應(yīng)性，因此將免疫磁性微球與含有靶物質(zhì)（欲分離的物質(zhì)）的復(fù)雜混合物共同培養(yǎng)，則免疫磁性微球可以通過(guò)抗原抗體反應(yīng)選擇性地與靶物質(zhì)結(jié)合，當(dāng)此混合物通過(guò)一個(gè)磁場(chǎng)裝置時(shí)，與免疫磁性微球結(jié)合的靶物質(zhì)就會(huì)被磁場(chǎng)滯留，從而與其它復(fù)雜 物質(zhì)分離開(kāi)來(lái)。其中磁性脂質(zhì)體較早地應(yīng)用于臨床診斷學(xué)的 MRI 造影增強(qiáng)技術(shù)中 [30]。同樣，由于 AMI227 血漿半衰期長(zhǎng)，一次增強(qiáng)可作多種成像，也可增加扭曲血管或血流速度較慢血管的信號(hào)強(qiáng)度，因此 AMI227 可能是一種優(yōu)良的 MRA 對(duì)比劑。 (2) 肝硬化、肝炎等疾病的診斷 正常肝組織在 T2WI 上表現(xiàn)為均勻的明顯的信號(hào)降低；而肝硬化部位（增生的纖維間隔和再生結(jié)節(jié)）由于缺乏吞噬細(xì)胞，表現(xiàn)為不均勻性的信號(hào)降低，且信號(hào)降低程度低于正常肝組織；活動(dòng)性肝炎由于吞噬細(xì)胞的功能受損，可表現(xiàn)為均勻的輕度信號(hào)降低；利用這些差別，應(yīng)用超順磁性氧化鐵納米粒可提高 MRI 對(duì)于肝硬化、肝炎等肝臟疾病檢出的靈敏度。 241 USPIOs 由于粒徑較小，血漿半衰期較長(zhǎng)，可誘導(dǎo)顯著的 T1 縮短效應(yīng)，在縮短 T2 值的同時(shí)引起了明顯的T1 值縮短，在使 T1WI 上組織信號(hào)增高的同時(shí)，使 T2WI 上組織信號(hào)降低。AMI227 也未見(jiàn)嚴(yán)重副反應(yīng)的發(fā)生。超順磁性氧化鐵的毒副作用主要取決于鐵的含量。所以超順磁性氧化鐵是一種網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對(duì)比劑，可用于肝、脾、淋巴結(jié)、骨髓等富含網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞的組織和器官的 MR 增強(qiáng)。它是由 Fe3O4 和 Fe2O3 組成，外包碳氧葡聚糖，氧化鐵核心由若干個(gè)單晶體構(gòu)成，每個(gè)單一的晶體的直徑約為 ，整個(gè)親水性納米粒的直徑約為 62nm。磁性納米粒在臨床磁共振成像（ Magic Resonance Imaging， MRI）中的應(yīng)用，主要就是指納米尺度的超順磁性氧化鐵（ SPIO）粒子在MRI 中的應(yīng)用。這種治療方式有望減低化療藥物的劑量、降低化療的毒副作用、減輕病人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，增強(qiáng)腫瘤治療的安全指數(shù)。藥物的劑量從 5 mg/m2 增加到 100mg/m2，在體外腫瘤部位應(yīng)用磁場(chǎng) 60min~120min。結(jié)果與不給藥組和耳靜脈給藥組相比，股骨動(dòng)脈給與米托蒽琨磁性納米粒之后，腫瘤出現(xiàn)完全的和永久性的緩解（ p），而沒(méi)有觀察到任何毒副作用。由于磁場(chǎng)聚焦的難題尚未解決，因而對(duì)于深部腫瘤的治療受到較大限制。 磁性納米載體遞藥體系包括磁性微球、磁性納米粒和磁性納米脂質(zhì)體等。如對(duì)于溫敏磁性脂質(zhì)體，還要測(cè)定脂質(zhì)轉(zhuǎn)化溫度；對(duì)于磁性免疫納米粒要測(cè)定樣品表面抗體的濃度和活性、與細(xì)胞表面結(jié)合的玫瑰花環(huán)試驗(yàn)等。 穩(wěn)定性考察 該項(xiàng)指針對(duì)磁性脂質(zhì)體等不穩(wěn)定體系而言尤為重要。 30 分鐘后將小鼠拉脫頸椎處死，解剖取出左右腎，分別測(cè)定其中的藥物濃度，從而對(duì)比體內(nèi)磁導(dǎo)向定位效果?？梢栽O(shè)計(jì)平行多口裝置，用來(lái)考察靶部位離磁場(chǎng)距離的不同對(duì)磁性制劑定位的影響。原子吸收分光光度計(jì)的測(cè)定條件為：波長(zhǎng)為 ，狹縫為 ，燈電流為 5mA，能量補(bǔ)償為 70%，阻尼為 2，助燃?xì)?400Pa，乙炔為 。同時(shí)可以采用多分散指數(shù)來(lái)作為參數(shù)判斷磁性納米粒的分布范圍。交聯(lián)聚苯乙烯微球強(qiáng)度高，表面易進(jìn)行化學(xué)修飾，是比較理想的制備免疫磁性微球的骨架材料。 ③ 首先在堿性溶液中沉淀 Fe2+和 Fe3+使成超順磁氧化鐵，然后用硅烷包衣成為微球。其中的高分子材料包括聚苯乙烯、硅烷、聚乙烯、聚丙烯酸、淀粉、葡聚糖、明膠、白蛋白、乙基纖維素等。 1986 年 Hiroshi 等 [7]對(duì)磁性脂質(zhì)體作為藥物靶向載體進(jìn)行了研究，采用的制備方法是脂膜水化法。如 黃芪多糖脂質(zhì)體是用本法制備的。此法尤適用于過(guò)熱不穩(wěn)定的藥 物。國(guó)外的報(bào)道較多，而國(guó)內(nèi)對(duì)這個(gè)領(lǐng)域中的研究還不夠深入。 CDM MNPs 和 Dextran MNPs 相比，粒子表面的羧甲基較羥基而言具有更好的親水性 能，而通過(guò)羧甲基化處理，磁性納米粒表面帶有一定的負(fù)電性，有利于抑制血液組分對(duì)它的調(diào)理作用，從而減少RES 的被動(dòng)靶向作用，因而作為磁導(dǎo)向藥物載體，具有更好的表面性能。其制備工藝流程如下：取人血清白蛋白 125mg， Fe3O4（顆粒直徑在10nm~20nm 之間） 36mg，純化鹽酸阿霉素 10mg，加入 蒸餾水充分混勻，然后將這三種物質(zhì)的混合液加入 30mL 棉籽油中，在 125w 的功率， 4℃條件下超聲混合 2min。 ④ 遞送體系應(yīng)該具有最大的生物兼容性（ Biopatibility）和最小的抗原性（ Antigenicity）。目前一些磁性納米粒和免疫磁性微球已經(jīng)成為產(chǎn)品。 磁性納米粒經(jīng)過(guò)表面處理后，可以直接用于臨床的磁共振成像；磁性納米粒也可作為磁性介質(zhì)，與各種載體材料結(jié)合，制備成各種不同的磁導(dǎo)向給藥系統(tǒng)，如磁性微球（ Magic microspheres）、磁性微囊 (Magic capsules)、磁性納米球 (Magic nanospheres)、磁性納米粒 (Magic nanoparticles)、磁性脂質(zhì)體 (Magic liposomes)、磁性微乳 (Magic emulsions)等。 下面對(duì)磁性納米粒、磁性納米載體（如磁性納米粒、磁性脂質(zhì)體等）的制備方法、質(zhì)量評(píng)價(jià)及其在醫(yī)藥領(lǐng)域 的應(yīng)用等進(jìn)行介紹。 ⑥ 給藥途徑和劑型設(shè)計(jì)要合理，并且盡量避免網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（ RES）的清除作用。 3．共沉淀法 石可瑜和常津等 [4， 5]采用共沉淀法制備葡聚糖磁性納米粒（ Dextran MNPs）。 ② 乳化聚合法（ Emulsion polymerization method）：就是將含有葡聚糖或表面活性劑的酸性溶液中，機(jī)械攪拌下加入水不溶性單體如氰基丙烯酸烷烴酯（ Cyanoacrylate）而制得，其聚合機(jī)理是水中OH— 與氰基丙烯酸烷烴酯發(fā)生親核反應(yīng)而聚合。 2．注入法：將磷脂與膽固醇等類脂質(zhì)及脂溶性藥物溶入有機(jī)溶劑中（多用乙醚），該溶液經(jīng)注射器緩緩注入加熱至 50℃（并用磁力攪拌）的磷酸鹽緩沖溶液（或含水溶性藥物）中，不斷攪拌至乙醚除盡為止，即得大多孔脂質(zhì)體。 6．逆相蒸發(fā)法：將磷脂等膜材溶于有機(jī)溶劑如氯仿、乙醚等，加入待包封藥物的水溶液進(jìn)行短時(shí)超聲，直至形成穩(wěn)定的 W/O 型乳劑。另外，本法通過(guò)控制除去表面活性劑的操作條件，可以改變粒徑， 233 并可獲得高度均一粒徑的脂質(zhì)體。 由于前述磁性介質(zhì)引入方法的改進(jìn)，磁性納米脂質(zhì)體的制備工藝有了較大的提高。 制備磁性微球的方法可分為一步法和二步法：一步法是在成球前即加入磁性納米粒，成球時(shí)聚合物將其包裹于其中；二步法是先制備非磁性小球，然后通過(guò)處理使磁性材料進(jìn)入其中 , 最后磁性納米粒以分散的形式存在于微球的骨架材料中。 234 聚合反應(yīng)是由從磁鐵礦顆粒中擴(kuò)散出來(lái)并通過(guò)對(duì)過(guò)硫酸的還原而成為自由基的鐵離子引發(fā)的。這樣，對(duì)于表面比較平整的微球，就要通過(guò)對(duì)其表面進(jìn)行處理來(lái)提高它的抗體結(jié)合力，以保證 IMMS表面有足夠量的抗 體 [12]。磁性納米粒一般要經(jīng)過(guò)預(yù)處理，如磁性脂質(zhì)體要先用適量的 Triton 溶液（ 5%）破壞脂質(zhì)體，釋放出磁性 235 物質(zhì)，用濃鹽酸將 Fe3O4 離子化后再進(jìn)行操作；由高分子材料制備的磁性納米粒則要經(jīng)高溫處理，如將磁 性納米粒放在坩堝中，于煤氣燈上加蓋灼燒 30min，再置于馬弗爐中于 600℃下灼燒 2h，冷卻后加 的 6mol/L 鹽酸溶液，微熱使充分溶解后備用。一般用磁強(qiáng)計(jì)進(jìn)行測(cè)定。 還可以采用離體腎模型磁定位實(shí)驗(yàn)來(lái)考察制劑的磁導(dǎo)向定位性能。此方法可用于對(duì)不同條件和手段所制備的磁性納米粒的結(jié)構(gòu)類型進(jìn)行分析。在這里面要考慮溫度、脂質(zhì)體類型、抗氧劑、金屬離子、輻射和電離輻射等因素對(duì)氧化反應(yīng)的影響，以及脂質(zhì)體膜材的水解反應(yīng)。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的研究，科學(xué)家們提供了許多種方法來(lái)實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，其中磁導(dǎo)向給藥系統(tǒng)就占有了很大比重 。磁性納米粒對(duì)治療離表皮較近的癌癥如乳腺癌、食管癌、膀胱癌、皮膚癌等已經(jīng)表現(xiàn)出了較大的優(yōu)勢(shì)。磁性納米粒的加入未增加 NP 的毒性。 Lubbe 等人 [21]試驗(yàn)了大鼠和裸小鼠對(duì)空白及載藥磁性納米粒的耐受性，以及載藥磁性納米粒的藥效。表阿霉素磁性納米粒的人體試驗(yàn)研究表明，用磁性納米粒介導(dǎo)抗癌藥物具有較好的應(yīng)用前 景。因此氧化鐵納米粒又被稱為超順磁性氧化鐵（ superparamagic iron oxide， SPIO）納米粒。 SPIO 的粒度大小不同將影響 到其體內(nèi)分布特異性和磁化特性。另外還有 Nyed 公司開(kāi)發(fā)的 MSM 和 NSP430 等。如 Feridex 的血漿半衰期小于 10min，靜注后數(shù)分鐘內(nèi)， 83%分布于肝臟， 6%~10%分布于脾臟。超順磁性氧化鐵在常規(guī)的臨床劑量之下，如 果緩慢注射給藥，副作用是極小的。 4．超順磁性氧化鐵對(duì)比劑的增強(qiáng)原理 超順磁性氧化鐵也能增強(qiáng)質(zhì)子弛豫，但其增強(qiáng)的原理與順磁性 MR 對(duì)比劑有所不同。對(duì)超順磁性氧化鐵納米粒在肝腫瘤檢出效率的臨床研究發(fā)現(xiàn)， SPIOs 不僅可以明顯提高腫瘤與正常組織的對(duì)比度噪聲比（ CNR），而且在不同場(chǎng)強(qiáng)下，經(jīng)過(guò)對(duì)比劑增 強(qiáng)后均能檢出更多的病灶組織 [28]。 Stark等人 [27]給動(dòng)物靜脈注射 3 種劑量的 SHU 555A，然后進(jìn)行增強(qiáng)前后門脈系統(tǒng)成像的比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，靜注超順磁性氧化鐵納米粒明顯改善了門脈系統(tǒng)的顯示。 作為理想的 MRA 對(duì)比劑，超順磁性氧化鐵納米粒應(yīng)該具有一個(gè)較長(zhǎng)的血漿半衰期，使得在成像過(guò)程中血中的對(duì)比劑濃度盡量保持不變。 免疫磁性納米粒和免疫磁性微球在生物醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用 表面連接有特異性抗體的免疫磁性納米?？蓱?yīng)用于清除骨髓中癌細(xì)胞；也可以作為雙重靶向藥物遞送系統(tǒng)應(yīng)用于人體，進(jìn)一步提高靶向給藥的精度；此外在細(xì)胞器的分離、微生物的分離檢查、分子生物學(xué)移植耐受和生物體內(nèi)痕量物質(zhì)的分析方面得到越來(lái)越多的應(yīng)用。直接法是指抗體直接連在磁性微球上，然后與靶細(xì)胞結(jié)合。這些技術(shù)都有各自的缺點(diǎn)。親和磁珠在分子生物學(xué)上的應(yīng)用可歸納于下面幾個(gè)方面 [31]。 (4) 固相克隆 應(yīng)用親和磁珠的固相克隆可以克隆任何片斷、任何位點(diǎn)，不需限制性內(nèi)切酶和連接酶，可以得到較高收率的重組片斷。在注入合適的培養(yǎng)基前可以進(jìn)行洗滌，單抗和多抗都可以應(yīng)用。 而越來(lái)越多的人將免疫磁珠技術(shù)與 PCR 結(jié)合起來(lái)，稱為 IMBPCR 技術(shù)。最近， Ludnerbrg 等人運(yùn)用免疫磁珠設(shè)計(jì)了一種固相分析技術(shù)，通過(guò)比色來(lái)檢測(cè) DNA，稱作固定型放大核酸檢測(cè)（ Dectection of Immobilized Amplified Nueleic Acid， DIAANA）。但是，朋 MT 也有限制條件，那就是腫瘤轉(zhuǎn)移細(xì)胞有可能累及骨髓。 (1) 用于清除神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 IMMS 最早應(yīng)用于神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 的清除。集落分析證明， BFUE、 CFUC、 CFUGEM 和 CFUE 均無(wú)顯著降低。 Combaret 等人建立了應(yīng)用免疫磁性微球凈化感染了 BMrkitt 淋巴瘤或神經(jīng)母細(xì)胞瘤的骨髓移植的模型系統(tǒng)。移植前治療方案為全身照射（ TBl）（ ）和環(huán)磷酰胺（ CY）（ 50mg／ kg，每周 2 次，共 4 周）。除過(guò) Maphosphamide 凈化后血小板的恢復(fù)率較慢外，白細(xì)胞、中性白細(xì)胞及血小板在三組病人中的恢復(fù)速度均類似。 5．免疫磁性微球在其它方面的應(yīng)用 (1) 異體骨髓移植時(shí)清除 T 細(xì)胞 自身骨髓移植時(shí)為防止移植物抗宿主反應(yīng)（ GVHD），需要從骨髓中有效地清除 T 細(xì)胞。正相分離干細(xì)胞的方法也受到重視。 (4) 分離其它細(xì)胞 免疫磁珠在從血液中分離、定量、分型各細(xì)胞亞類方面的應(yīng)用與日 俱增。從單一的抗原特異 B 淋巴細(xì)胞群開(kāi)始可以增加克隆成功的機(jī)會(huì)并提高雜交后相關(guān)雜和體的幾率。在海得堡的歐洲分子生物實(shí)驗(yàn)室（ EMBL）發(fā)展了一種應(yīng)用免疫磁珠分離細(xì)胞器的“磁性自由流式系統(tǒng)”（ Magic Free Flow System，MFFS），在整個(gè)分離和后續(xù)洗滌過(guò)程中，磁珠始終分散在整個(gè)稀釋懸 浮液中。 (7) 用 IMBPCR 檢測(cè)循環(huán)系統(tǒng)中的癌細(xì)胞 血液是癌擴(kuò)散的一個(gè)重要途徑，對(duì)血液中癌細(xì)胞的檢測(cè)可能成為臨床醫(yī)生預(yù)測(cè)癌癥復(fù)發(fā)、選擇更加合適的輔助治療方法的重要工具。 Mass 等則用 IHBRTPCR 對(duì)人乳腺癌細(xì)胞中廣譜抗藥基因 l（ MDR1）的信使 RNA 水 平進(jìn)行了檢測(cè)。但是天 冬酰胺酶在血液中容易被體內(nèi)的一些蛋白酶降解；同時(shí)這種外源性的酶會(huì)激發(fā)免疫反應(yīng)而產(chǎn)生抗體，也會(huì)導(dǎo)致酶的迅速清除，因此延長(zhǎng)天冬酰胺酶在血液循環(huán)系統(tǒng)中的半衰期，使酶分子易于轉(zhuǎn)移至癌變的靶組織和降低其免疫原性，是這種療法的關(guān)鍵