【正文】 離時極易污染雜菌，所以要嚴格操作。 （ 2）菌核分離 ? 茯苓、豬苓、雷丸等菌的子實體不易采集。置 25℃ 下培養(yǎng) 1周即得到混合好的銀耳母種。 例：銀耳孢子分離 ? 按無菌操作獲取種耳后，懸掛種耳的三角瓶經(jīng) 12小時培養(yǎng)后，瓶底培養(yǎng)基表面就有“孢子印”。 ② 褶上涂抹法 ? 按無菌操作分離時；應選擇成熟的種菇，用接種針直接插入褶片之間，輕輕抹取褶片表面子實體尚未彈射的孢子，再在培養(yǎng)基上劃線接種。形成一層粉末狀孢子?。ㄆ焦綐O淡紫色，蘑菇、草菇 為褐色，香菇、金針菇孢子印白色）。這種菌種生活力較強，但孢子個體之間有差異，且自然分化現(xiàn)象較嚴重，變異大，需經(jīng)出菇試驗才能在生產(chǎn)上應用。 培養(yǎng)基滅菌采用常壓滅菌灶滅菌 ，要求滅菌溫度達 100℃ ， 保持 810小時 ， 達標后趁熱卸袋冷卻 。也可進行常壓滅菌，在100℃ 下保持 1011小時，達標后趁熱取出，讓其冷卻。 出菇試驗 ? 分離選育的母種，還必須進行出菇試驗。 選育提純 ? 通過上述方法得到的菌絲，不一定都是優(yōu)質(zhì)的，還需要選育提純。 ? (2)組織分離法。然后將瓊脂加入汁內(nèi)，邊加熱邊攪拌，讓瓊脂充分溶化；再將葡萄糖等加入，稍煮幾分鐘后，同樣用4層紗布過濾，取其汁液。作為一般制種專業(yè)戶，可以采用人工選擇方式分離培育母種。長途購運菌種不僅花費大，成本高而且菌種因破瓶而易引起雜菌污染，從而嚴重影響栽培食用菌的經(jīng)濟效益。采集 12朵符合上述標準的種菇編上號碼，作為分離母種的材料。然后置于高壓鍋內(nèi)，在 98108千帕／厘米的壓力下滅菌 30分鐘左右。選擇已長菇的木段，削去樹皮及表層木質(zhì)部，用 75％的酒精消毒后，鋸成 1厘米厚的薄片，放入 0． 1％的升汞水中消毒12分鐘，再用滅菌水洗去殘液。 轉(zhuǎn)管擴接 ? 母代母種可以轉(zhuǎn)管擴接成“子代”母種。 原種木屑培養(yǎng)基配方 ? 雜木屑 77． 5％，麥麩 20％，蔗糖 1％，石膏粉 1． 2％，硫酸鎂 0． 3％?？臻g相對濕度控制在70℃ 以上，避免強光照射。 菌種培育室要求潔凈 ， 防強光 ， 室溫掌握在 2325℃ ， 并經(jīng)常檢查 ，發(fā)現(xiàn)雜菌污染應及時淘汰 ， 不斷選優(yōu)去劣 。單孢分離生產(chǎn)上較少采用，而且技術復雜，一般采用多孢分離法。 ? 還可用孢子采集器收集孢子。 ④ 貼附法 ? 按無菌操作將成熟的菌褶或耳片取一小塊， 用溶化的瓊脂培養(yǎng)基或阿拉伯膠、漿糊等貼附在配管斜面培養(yǎng)基正上方的試管壁上。經(jīng)30天左右，菌落長出白色菌絲。 （ 1）子實體分離 ? 種菇要選朵大蓋厚，柄短，八九分成熟的優(yōu)良品種。方法是將菌核表面洗凈，用酒精或升汞消毒后，切開菌核，取中間組織一小塊，約黃豆大小，接種在PDA 培養(yǎng)基斜面上，保溫培養(yǎng)?；鶅?nèi)分離法與組織分離法不同之點是，干燥的菇木或耳木中的菌絲常呈休眠狀態(tài)。所以，菌絲生長緩慢的種類應淺??；菌種生長快的種類可以深取。 ? 土中菌絲分離時要注意，由于土中菌絲體的周圍生活著多種多樣的土壤微生物，因此分離時必須盡可能避開這些微生物的干擾，盡可能批取清潔菌絲素的尖端、不帶雜物的菌絲接種，反復用無菌水沖洗，在培養(yǎng)基中加入一些抑制細菌 生長的藥物，如 40微克／升的鏈霉素或金霉素。經(jīng)滅菌后，用接種刀把袋口上部約 15毫米厚的老菌根挖除，并進行培養(yǎng)。經(jīng)適溫培養(yǎng) 1015天后，當接種塊扭結(jié)團出現(xiàn)紅、黃色水珠時，即可擴大原種。一般香菇、平菇、冬菇、猴頭、木耳、銀耳的栽培種多用鋸木、棉皮作培養(yǎng)基。還可用于制原種、栽培種。 如果生產(chǎn)量較大，在三角瓶的基礎上，再逐級擴大種子缸，發(fā)酵罐中進行液體深層通氣發(fā)酵，產(chǎn)生大量菌種。 培養(yǎng)觀察：從菌種瓶中挑取小塊菌絲體，接種斜面試管培養(yǎng)基上。白塊四周的菌絲生長快、濃白、棉絮狀，表明菌種生命力強。 ? 污染雜菌另一個原因可能是分離母種時感染雜菌，因種菇表面帶菌，消毒不徹底，通過組織塊將雜菌帶入培養(yǎng)基 ? 總之，污染機會很多，要注意環(huán)境消毒，按無菌操作規(guī)程徹底滅菌，層層把關，環(huán)環(huán)抓緊，嚴加注意；提離菌種質(zhì)量