掌握層析chromatography的概念(更新版)
【正文】 從一個混合物中分離和純化一種生物物質(zhì)的純度如何 ， 取決于混合物中各組分 K 值的差異程度 。 ?.薄層層析 （ thin layper chromatography） 將適當(dāng)?shù)?吸附劑 在玻璃板或 其他材料薄板上 鋪成薄層 ， 樣品 點在上面隨后用流動相展開達(dá) 到分離鑒定的方法 。 其 固定相 也可有兩種狀態(tài) ， 一種是以固體 作為吸附劑的固定相 ， 另一種是以涂布在固體載體表面的 液體 作為固定相 。 二 .層析技術(shù)的分類 1. 按兩相所處的 狀態(tài) 分類 以液體作為 流動相 的層析稱為 液相層析 ， 以氣體作為 流動相 的稱為 氣相層析 。 ?紙層析 （ paper chrmatography） 用 紙 作為液體的載體 ， 樣品點在 紙上隨后展開達(dá)到分離鑒定的 方法 。若分配系數(shù) K值小，則該物質(zhì)在洗脫液中較早出峰。 主要機(jī)理是 分子篩效應(yīng) ,當(dāng)被分離物質(zhì)流經(jīng)凝膠柱時 ,因各組份的 分子大小不同 ,在凝膠受到的 阻滯作用有差異 ,從而造成各組分在凝膠柱中的 遷移速度不同 得到分 離。 ? 內(nèi)水體積 （ Ｖｉ ） … 即凝膠顆粒內(nèi)部所含 ? 水相的體積 ， 它可從 ? 干凝膠顆粒重量和吸 ? 水重量求得 。 （ 2） 當(dāng) Kd = 1時 ,Ve = Vo + Vi,意味著該分子完全不被排阻 ,可以自由地擴(kuò)散進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部 ,它能均等地分布在流動相和固定相里 ,在兩相分配的比值為 1,而 最后流出 . （ 3） 當(dāng) 0 Kd 1, Ve = Vo + ViKd為處于兩種極端行為 之間 的分子 。 孔徑大小非常有限 ,所以可被 純化的物質(zhì)的 分子量范圍受到限制 。 瓊脂糖凝膠不帶電荷 ,不受微生物作用而降解 ,但對熱不穩(wěn)定 ,易受 pH影響 (只在 范圍內(nèi)穩(wěn)定 . 使用范圍及效果同葡聚糖凝膠相似 ,但化學(xué)性質(zhì)較葡聚糖穩(wěn)定 ,可在 pH211范圍內(nèi)使用 . 聚丙烯酰胺凝膠的商品為生物膠－ P （ BioGel P） ， 由美國 BioRod廠生產(chǎn) ， 型號很多 ， 從 P2至 P300共 10種 ， P 后面的數(shù)字再乘 1000就相當(dāng)于該凝膠的排阻限度 。 裝柱注意點： ? 不得有氣泡和分層 ； ? 凝膠表面應(yīng)平整 ； ? 柱床體積穩(wěn)定； ? 不能讓凝膠表面露出水面。 提取液 色帶 Chromatographic column Stationary phase Mobile phase or eluent The mobile (top) and stationary (bottom) phases in column chromatography. Paper chromatography is an analytical method. Note the very small sample volume spotted onto the plate.
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