【正文】 逝去 ， 我 首先 要感謝 在 身邊 關(guān)心我的 林 老師和同學(xué) 們 ，是你們的呵護和幫助，使我在大學(xué)里成長，畢業(yè)，走入社會 。研究者對油茶枯餅進行了固態(tài)發(fā)酵，以黑曲霉、毛霉、產(chǎn)朊假絲酵母及黑曲霉和產(chǎn)朊假絲酵母等四個菌種及菌種組合在油茶餅粕 對油茶餅粕培養(yǎng)基的蛋白質(zhì)最大提高率在 66． 7％ 99． 7％ ； 紫木耳、毛霉與產(chǎn)朊假絲酵母二次發(fā)酵產(chǎn)品的粗蛋白質(zhì)含量接近 20％ ，粗纖維含量下 降至 18％以下。由于各油茶皂 甙 的結(jié)構(gòu)上差異很小，有時用一種方法往往達不到分離的目的，這時可采用多次反復(fù)層析或多種方法結(jié)合進行，如用活性炭，三氧化二鐵， 葡聚糖凝膠，硅藻土一硅酸鎂等方法 [3334]。 目前，低壓、中壓、高壓液相色譜以及反相高壓液相色譜 (RPHPLC)己經(jīng)成為分離皂 甙 的常用方法 。 不僅僅是規(guī)模的擴大，而且提取的茶油和皂素的產(chǎn)量和質(zhì)量均得到相應(yīng)的改進和提高。首先由中南林學(xué)院譚曉風(fēng)等建立了改良 CTAB法提取山茶屬植物總 DNA的技術(shù)方法，張自俊等在此基礎(chǔ)上進行改良為同時提取 DNA與 RNA方法，改進了油茶 RAPD反應(yīng)體系。至次年春分取出畦種 ， 秋分后分栽，三年結(jié)實， 屬于較早的自然選種了。 （ 2）在進行壓榨之前，應(yīng)控制種子的含水量，含有過多的水會對壓榨有一定的影響，從而給后面的試驗帶來不必要的 麻煩，也可能會對皂素的產(chǎn)量有影響。由于功率較為顯著，浸 提 時間 作用 不明顯， 時間 *功率互作顯著， 功率和時間的最優(yōu)水平應(yīng)根據(jù)時間 *功率互作而定，即 在 D2確定為最優(yōu)水平后，在 D2水平上比較 B，確定時間的最優(yōu) 水平。 仁 率的測定 未脫殼的油茶籽 G=4152g，脫殼后的油茶籽重 G1=2930g 油茶籽的出 仁 率 = G1/G=2930/4152*100%=%。 皂甙 的提取 （ 1） 將油茶粕用粉碎機粉碎，然后放入乙醚中浸泡 24h，去除 剩余 油脂。 ： 此技術(shù)是在水提技術(shù)的基礎(chǔ)上，使用超濾膜分離技術(shù)，通過水溶液中物質(zhì)分子量的差別而使糖類、鹽類、色素等雜質(zhì)被分離除去，從而達到濃縮、精制及脫色的目的 。干法裝柱既可以省時，也可以節(jié)約溶劑．而且干柱在分離條件上更接近薄層層析，這樣就更容易找到合適的分離條件，此方法得到的皂甙較好，但不適用于工業(yè)生產(chǎn)。 正丁醇萃取法： 將粗皂甙用少量水溶解， 水 溶液用正丁醇萃取，即可得到正丁醇層，濃縮至干 ，得到棕紅北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文 7 色粘稠固體。 油茶 皂甙 的提取 目前 ， 從油茶餅中提取茶 皂甙 的方法主要有兩種 :一種是水提法，即用熱水多次浸泡脫脂后的餅渣，然后過濾、濃縮、 干 燥，得到深揭色的 皂甙 。因此，以油茶 皂甙 為主要原料研制的植物殺蟲劑對人畜無害，對植物安全，具有推廣前景 [16]。尤其是作為一種純天然原料，它對皮膚不會產(chǎn)生刺激、過敏、加深色素和毒 素積累等現(xiàn)象 [12]。溶血作用也是茶籽 皂甙 的毒性，據(jù)推測，可能是由于它與血液中的大分子醇 (如膽固醇等 )結(jié)合成復(fù)鹽所致。 圖 皂甙的結(jié)構(gòu)圖 1 圖 皂甙的結(jié)構(gòu)圖 2 北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文 4 茶 皂甙 的表面性質(zhì) 茶 皂甙 具有乳化、分散、濕潤、去污、發(fā)泡、穩(wěn)泡等多種表面活性，是一種性能優(yōu)良的天然表面活性劑。 油茶籽餅中的氨基酸含量如 表 。油茶在我國國民經(jīng)濟建設(shè)中起到了重要的作用。油茶喜溫暖，怕寒冷，要求年平均氣溫 16～ 18℃ ，花期平均氣溫為 12～ 13℃ 。 油茶分布區(qū)的北界在淮河 秦 嶺一線；南界大致在北回歸線附近；東界為東南海岸和臺灣；西界是云南的怒江流域和青藏高原的東緣。 鑒于油茶資源的巨大浪費， 本文從油 茶餅粕中茶皂素的提取純化著手， 旨在實現(xiàn)茶皂素 提取 方法的改進和新方法的探索 。我國是世界上油茶籽產(chǎn)量最高、分布最廣、品種最多的國家， 年產(chǎn)油茶籽約 54． 98萬噸 ，油茶籽副產(chǎn)品 — — 油茶餅粕的年平均產(chǎn)量約為 39． 71萬噸。 此試驗結(jié)果降低了提取溫度、減少了提取時間和試劑的耗費 ，初步解決了皂甙大規(guī)模生產(chǎn)的問題。樹皮淡褐色，光滑。要求水分充足，年降水量一般在 1000mm以上，但花期連續(xù)降雨，影響授粉。油茶 皂苷 的加工、提取工藝先后經(jīng)歷了水、含水乙醇、含水甲醇等溶劑提取法，同時采取多種精制工藝，使油茶 皂甙 產(chǎn)品的 加工成本、質(zhì)量都有了較大程度的改善。本試驗從改進 皂甙 提取方法入手，利用超聲波的破碎原理，改變以前費時、費料的提取方法，增加提取方法在工業(yè)上應(yīng)用的可能性，將油茶的資源盡可能的開發(fā)出來。茶 皂甙 作為表面活性劑，它的親水親油平衡值 (HLB值 )為 。茶 皂甙 有抑制霉菌生長的作用，但對革蘭氏陰、陽菌的生長無影響。 皂甙 用作乳化劑 油茶 皂甙 形成的石蠟乳化液性能好，乳液 顆 粒度小，分布均勻，穩(wěn)定性好，可用于地板光蠟液和藥品乳化劑。最近研究還表明，油茶 皂甙 具有抗突變、抗放射輻射和抗癌作用 [1920]，還可以影響釘螺生殖腺及肝臟 [21]，可以殺滅血吸蟲卵，體外有殺精子等作用 [22]。 本試驗是應(yīng)用超聲波的破碎原理，提高了 皂甙 的提取率，而且這種方法具有提取成本低、提取時間短、操作簡便等特點。 ： 在粗皂甙的水溶液中，加入新煅制的氧化鎂粉，然后向蒸發(fā)至干的粉末中加入乙醇，使吸附在氧化鎂上的皂甙溶解出來，放冷后，皂甙析出，得到純品，得率大約為粗皂甙的 50%，且純度不高。此方法純化效果不佳，可與其它方法配合使用。 本試驗 是用水進行提取皂素的，而且乙醇沉淀法比較安全，所以 采用的是乙醇沉淀法和陽離子型聚丙烯酰胺絮凝劑法相結(jié)合來進行純化的。 上清液按 1: 95%的乙醇，攪拌均勻，靜置 2h，離心取上清液。 表 皂素的提取量 （ g） 試驗號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 皂素產(chǎn)量 輔助 提取油茶 皂甙的正交試驗結(jié)果分析見表 表 正交試驗結(jié)果的直觀分析 列 號 影 響 因 素 皂素產(chǎn)量（ g） A B C D 試 驗 號 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 2 6 2 3 1 1 北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文 11 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 T1 T= T2 T3 ?X1 ?X2 ?X3 R 從表 ，溫度和超聲波的功率的極差分居第一、二位，是影響皂素提取的關(guān)鍵因素，其次是料液比， 超聲波提取 時間的影響程度最小。而如果只用乙醇作為浸提液，雖然得到的產(chǎn)品質(zhì)量尚可，但要消耗大量有機溶劑 (乙醇 )，成本高，工藝復(fù)雜，所以采用醇水溶液法較為 可行 。 （ 1）油茶種子質(zhì)量的好壞，主要取決于品種的優(yōu) 劣 ，優(yōu)良品種的產(chǎn)量高，種子質(zhì)量好， 所以改良油茶品種也是解決油茶開發(fā)的一個問題。飲料茶葉和觀賞茶花的組織培養(yǎng)在國內(nèi)外已有報道，但對油料用的北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文 15 普通油茶方面報道還很少。雷治國等通過18 條引物對 90個油茶優(yōu)良無性系進行 RAPD標(biāo)記，得到 569條多態(tài)性譜帶，其多態(tài)比率達到％ ，還找到了 32條特異性譜帶。 （ 3） 本實驗中沒有按照一般的提取方法進行提取茶油，結(jié)果是茶粕中含有一定的油脂，所以在進行皂素提取前一定要做好油脂的提取。 層析法是比較經(jīng)典的分離方法，由于皂 甙 極性較大，采用分配柱層析來分離的效果要比吸附層析好。 油茶的開發(fā)技術(shù)還處于探索階段，我們將進一步研究的是茶油 的精煉、皂素的應(yīng)用以及油茶 粕的綜合利用。 綜上所述，油茶從種子到粕餅都有很好的利用價值，所以充分開發(fā)、 利用 油茶 將是未來的研究的另一 主題 。湖南農(nóng)學(xué)院學(xué)報開發(fā) ， 1993， 30(2)： 14． [25] 劉鐵平 ． 薛仲華 ． 揚曉東等．化學(xué)世界， 1998， 39(7)： 386387． [26] 朱恒英，劉克坤，陳永培等，福建中醫(yī)藥， 1989， 20(2)， 4445 [27] 油茶豐產(chǎn)栽培技術(shù)研究進展 [J]．林業(yè)科技開發(fā)， 2OOO， 14(1)： 1o13． [28] 陳永忠等．湖南省油茶良種選育及推廣應(yīng)用概況 [J]．湖南林業(yè)科技， 2020， (28)： 3． [29] 陳永忠 ． 王德斌 ． 劉欲曉．湖南油茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展機遇與對策 [J]．湖南林業(yè)科技， 20O2， 29(4)： 50— 52． [30] 陳永忠 ． 譚曉風(fēng) ． 王德斌．林木分子標(biāo)記輔助選擇育種 [J]．湖南林業(yè)科技， 20O2， 29(3)． [31] A Marston ,K Hotettmann et al, Natural Pr oducts Report,1991,8 (4), 391394 [32] Carlos Jimenez and Ricardo,Riguca et al Natural Product Report,1994 , 11(6), 591606 [33] T Tanimura, J J Pisano, Y Ito and RL Bowman et al54,Science,1970,169, [34] H .Otsukae ta l,P lantam edica 1978, 33(2), 152 [35] 川崎敏男 ． 天然有機化合物實驗法， 1977 年版， 346頁 [36] 鐘海雁 ． 王承南 ． 謝碧囊油茶枯餅回態(tài)發(fā)酵技術(shù)的研究中南林學(xué)院學(xué)報． 2020， 21(1)： 21— 26 北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文 21