【正文】 異染色質(zhì)：在細(xì)胞周期中，間期、早期或中、晚期，某些染色體或染色體的某些部分的固縮常較其他的染色質(zhì)早些或晚些，其染色較深或較淺，具有這種固縮特性的染色體稱為異染色質(zhì)（heterochromatin）。由4種組蛋白H2A、H2B、H3和H4，每一種組蛋白各二個分子，形成一個組蛋白八聚體，約200bp的DNA分子盤繞在組蛋白八聚體構(gòu)成的核心結(jié)構(gòu)外面，形成了一個核小體。哺乳動物雄性個體細(xì)胞的性染色體對為XY，雌性則為XX。其本質(zhì)是脫氧核甘酸，是細(xì)胞核內(nèi)由核蛋白組成、能用堿性染料染色、有結(jié)構(gòu)的線狀體，是遺傳物質(zhì)基因的載體。但必須注意T僅針對于形成雙螺旋區(qū)域而言，解鏈部分的bp數(shù)就不涉及T的計算。再有,雙螺旋外側(cè)負(fù)電荷的磷酸基團同帶正電荷的陽離子之間形成的離子鍵,可以減少雙鏈間的靜電斥力,因而對DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)也有一定的穩(wěn)定作用。核酸大分子可分為兩類：脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），在蛋白質(zhì)的復(fù)制和合成中起著儲存和傳遞遺傳信息的作用。用于概括涉及基因作圖、測序和整個基因組功能分析的遺傳學(xué)分支。既可以是用突變基因或其它基因敲除相應(yīng)的正?；颍部梢杂谜；蚯贸鄳?yīng)的突變基因。d、倒位或轉(zhuǎn)位：（transposition）指DNA鏈重組使其中一段核苷酸鏈方向倒置、或從一處遷移到另一處。對不同的DNA損傷，細(xì)胞可以有不同的修復(fù)反應(yīng)。DNA損傷DNA損傷是復(fù)制過程中發(fā)生的DNA核苷酸序列永久性改變，并導(dǎo)致遺傳特征改變的現(xiàn)象。e、雙鏈斷裂：對單倍體細(xì)胞一個雙鏈斷裂就是致死性事件。b、因轉(zhuǎn)移法同源重組(homologousrebination)是將外源基因定位導(dǎo)人受體細(xì)胞染色體上的方法，因為在該座位有與導(dǎo)人基因同源的序列，通過單一或雙交換，新基因片段可替換有缺陷的基因片段，達到修正缺陷基因的目的。該學(xué)科提供基因組信息以及相關(guān)數(shù)據(jù)系統(tǒng)利用，試圖解決生物，醫(yī)學(xué)，和工業(yè)領(lǐng)域的重大問題。核酸不僅是基本的遺傳物質(zhì)，而且在蛋白質(zhì)的生物合成上也占重要位置，因而在生長、遺傳、變異等一系列重大生命現(xiàn)象中起決定性的作用。DNA分子由于堿基對的數(shù)量不同,堿基對的排列順序千變?nèi)f化,因而構(gòu)成了DNA分子的多樣性。對于一定長度的DNA雙鏈，一旦出現(xiàn)解鏈T值就減少。在無性繁殖物種中，生物體內(nèi)所有細(xì)胞的染色體數(shù)目都一樣；而在有性繁殖大部分物種中，生物體的體細(xì)胞染色體成對分布，稱為二倍體。鳥類和蠶的性染色體與哺乳動物不同：雄性個體的是ZZ，雌性個體為ZW。染色質(zhì)的構(gòu)象狀態(tài)(chromosome conformation capture，3C)通過一種定量手段(PCR產(chǎn)物的有和無、產(chǎn)量的高和低)對DNA之間是否存在相互作用這一定性問題進行研究。具有強嗜堿性，染色深，染色質(zhì)絲包裝折疊緊密，與常染色質(zhì)相比，異染色質(zhì)是轉(zhuǎn)錄不活躍部分，多在晚S期復(fù)制。它們的細(xì)胞形狀都是各不相同的。非編碼RNA分子的調(diào)控作用 非編碼RNA（Noncoding RNA）是指不編碼蛋白質(zhì)的RNA。原核生物基因組的特點a、基因組較小，通常只有一個環(huán)形或線形的DNA分子。真核生物的基因組里存在大量重復(fù)序列，通過其重復(fù)程度可將其分成高度重復(fù)序列、中度重復(fù)序列、低度重復(fù)序列和單一序列。有些質(zhì)粒還有其他控制系統(tǒng)，如有分配功能的par系統(tǒng)和確保質(zhì)粒穩(wěn)定遺傳的ccd系統(tǒng)。DNA不為蛋白質(zhì)所壓縮。DNA復(fù)制主要包括引發(fā)、延伸、終止三個階段。RNA引物的大小，在原核生物中通常為50～100個核苷酸，而在真核生物中約為10個核苷酸。方向的親代DNA鏈作模板的子代鏈在聚合時基本上是連續(xù)進行的，這一條鏈被稱為領(lǐng)頭鏈（leading strand)。滾環(huán)式復(fù)制的一個特點是以一條環(huán)狀單鏈DNA為模板，進行新的DNA環(huán)狀分子合成。Χ射線、γ射線照射細(xì)胞后，由細(xì)胞內(nèi)的水所產(chǎn)生的自由基既可使DNA分子雙鏈間氫鍵斷裂,也可使它的單鏈或雙鏈斷裂。基因組重排技術(shù)結(jié)合了傳統(tǒng)誘變技術(shù)和細(xì)胞融合技術(shù),是一項對整個微生物基因組重排的新型育種技術(shù)。真核細(xì)胞內(nèi)有一個調(diào)控機構(gòu)，使細(xì)胞周期能有條不紊地依次進行。（）、（）、（）、（）和（）五個層次。（）或（）組成；細(xì)菌基因組由一條（）組成；真核生物基因組由（）和（）形成（）。28．分子克隆中常用的載體有（）、（）、（）和（）。36．分子克隆中常用的非放射性同位素標(biāo)記物有（）、（）、（）等；常用的標(biāo)記方法有（）、（）。（）真核生物結(jié)構(gòu)基因都是單拷貝，rRNA基因為多拷貝。高度重復(fù)序列在真核生物細(xì)胞基因組中重復(fù)出現(xiàn)可達106次以上。1不同生物中組蛋白基因在基因組中的排列不一樣。2原核生物中mRNA一般不需要轉(zhuǎn)錄后加工。3機體的各種細(xì)胞中含有相同的遺傳信息，所以有相同的表達，3在負(fù)控誘導(dǎo)系統(tǒng)中，阻遏蛋白不與效應(yīng)物結(jié)合時，結(jié)構(gòu)基因不轉(zhuǎn)錄。4限制性核酸內(nèi)切酶是原核生物所特有的酶。5常染色質(zhì):結(jié)構(gòu)松散，基因不表達。4．常用的核酸探針有哪些類型？各有何優(yōu)缺點？5．將目的DNA與載體DNA連接起來的方法有哪些？并用文或圖表示各種連接過程。(4)調(diào)控序列DNA重組技術(shù):是20世紀(jì)70年代初興起的技術(shù)科學(xué),又稱基因工程，是將不同的DNA片段(如某個基因或基因的一部分)按照人們預(yù)先的設(shè)計定向連接起來,在特定的受體細(xì)胞中與載體同時復(fù)制并得到表達,產(chǎn)生影響受體細(xì)胞的新的遺傳性狀的技術(shù)。指C值往往與種系的進化復(fù)雜性不一致的現(xiàn)象，即基因組大小與遺傳復(fù)雜性之間沒有必然聯(lián)系,某些低等的生物C值卻很大,如一些兩棲類動物的C值甚至比哺乳動物的還大 基因組:生物有機體的單倍體細(xì)胞中的所有DNA,包括核中的染色體DNA和線粒體、葉綠體等亞細(xì)胞器中的DNA 復(fù)制子(replicon):單獨復(fù)制的一個DNA單元被稱為一個復(fù)制子,它是一個可移動的單位。衛(wèi)星DNA通常是高度串聯(lián)重復(fù)的DNA。非組蛋白:是染色體中除了組蛋白之外的結(jié)構(gòu)蛋白。大,小溝都是由于堿基對堆積和糖一酸骨架扭轉(zhuǎn)造成的DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶(dnatopoismerase):能在閉環(huán)DNA分子中改變兩條鏈的環(huán)繞次數(shù)的酶,它的作用機制是首先切斷DNA,讓DNA繞過斷裂點以后再封閉形成雙螺旋或超螺旋DNA 復(fù)制體一種多蛋白復(fù)合體,包含DNA聚合酶,引發(fā)酶,解旋酶,單鏈結(jié)合蛋白和其他輔助因子復(fù)制叉:復(fù)制時,雙鏈DNA要解開成兩股鏈分別進行DNA合成,所以,復(fù)制起點呈叉子形狀,被稱為復(fù)制又引物。一、冷凍離心機低溫分離技術(shù)是分子生物學(xué)研究中必不可少的手段。（1）插上電源，待機指示燈亮；打開電源開關(guān)，調(diào)速與定時系統(tǒng)的數(shù)碼管顯示的閃爍數(shù)字為機器工作轉(zhuǎn)速的出廠設(shè)定，溫控系統(tǒng)的數(shù)碼管顯示此時離心腔的溫度。（2）開機前應(yīng)檢查轉(zhuǎn)頭安裝是否牢固，機腔中有無異物掉入。二、電泳儀電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可缺少的重要手段。用鍵盤輸入新的工作程序。②先設(shè)置電壓U，按“選擇”鍵，先將其反顯，然后輸入數(shù)字鍵即可設(shè)置該參數(shù)的數(shù)值。之后逐漸將輸出電壓加至設(shè)置值。(3)如果輸出端接多個電泳槽，則儀器顯示的電流數(shù)值為各槽電流之和，此時應(yīng)選擇穩(wěn)壓輸出，以減小各槽的相互影響。PL203/01型精密電子天平：最大稱量210g；；AL104/01型高分辨率電子分析天平：最大稱量110g； （1）檢查并調(diào)整天平至水平位置。（1）天平應(yīng)放置在牢固平穩(wěn)水泥臺或木臺上，室內(nèi)要求清潔、干燥，同時應(yīng)避免光線直接照射到天平上。分光光度計由光源、單色器、吸收池、接受器、顯示屏幕所組成，它不僅適應(yīng)于可見光區(qū)，同時還擴展至紫外光 區(qū)及紅外光區(qū)。(2）在儀器面板上有許多功能鍵，其中包括檢測base sep、Tm、DNA、RNA、oligo、Protein595assay、Protein280 meas、cell culture等。先用吸管吸高純水入樣品杯中，然 后放入儀器上的樣品槽中，放入時注意樣品杯的光學(xué)面朝前方。五、數(shù)字式酸度計酸度計是實驗室配置溶液必備的儀器。3’ 方向)兩鏈的堿基通過氫鍵互補配對，A:T。超螺旋DNA（Supercoil DNA）:松弛型雙鏈DNA進一步旋轉(zhuǎn)后，再形成閉環(huán)結(jié)構(gòu)時，就會形成DNA超螺旋結(jié)構(gòu)L=T+W 判斷是否為超螺旋 正負(fù)超螺旋 拓?fù)洚悩?gòu)酶：暫時斷裂DNA分子中一條或兩條單鏈上的磷酸二酯鍵，改變DNA分子的連接數(shù)及拓?fù)錉顟B(tài)。2確定DNA半保留復(fù)制半不連續(xù)復(fù)制 3 復(fù)制的基本步驟 復(fù)制為雙向大腸桿菌的復(fù)制：起始AT含量高的區(qū)域參與蛋白：DnaA（復(fù)制起始因子)：識別并結(jié)合于重復(fù)序列上，驅(qū)使富含AT的重復(fù)序列解鏈，需負(fù)超螺旋，及ATPDnaB(DNA解旋酶):DNA雙鏈解旋，形成復(fù)制叉SSB:(單鏈結(jié)合蛋白):保持解旋部分的單鏈狀態(tài)DnaG(引發(fā)酶/引物酶):RNA引物合成，引發(fā)復(fù)制 延伸參與蛋白：DNA Pol III全酶：負(fù)責(zé)新鏈的合成:前導(dǎo)鏈，岡崎片段DNA polI：復(fù)制中除去引物，填補引物處空缺終止： 真核生物的復(fù)制：一個細(xì)胞周期內(nèi)，一個DNA分子只能復(fù)制一次Section F 1 復(fù)制忠實性的機制：DNA復(fù)制的高精度：模板連和進入核苷酸在DNA聚合酶的作用位點正確配對3’到5’外切核酸酶對錯誤堿基的校正錯配修復(fù) 2 holiday模型 3Section K 編碼鏈 模板鏈 2 大腸桿菌的轉(zhuǎn)錄RNAP酶：核心酶：a 亞基：aNTD對核心酶的組裝很重要。w 亞基：可能與RNAP的組裝及維持RNAP結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性有關(guān)s factor(s因子)：s factor 在啟動子特異性識別過程中至關(guān)重要 移動慢的原因：可以保持與翻譯同步。轉(zhuǎn)錄單位的前30個核苷酸的堿基序列：影響RNAP從啟動子處移動出去（啟動子區(qū)清空）的速率。（Lac operon，CRP調(diào)控）正控阻遏：共阻遏物使激活因子失活，減少基因的表達。TFIIE 刺激TFIIH介導(dǎo)的磷酸化反應(yīng)。增強mRNA的翻譯水平，增加基因的表達 剪接 甲基化 2 核酶有：有催化功能的RNA即為核酶U2 U6 RNAP 3 RNA的多樣性：可變加工，反式剪接，RNA編輯 原核生物核糖體真核生物核糖體 原核rRNA 加工的大致過程：形成多個莖環(huán)結(jié)構(gòu)，與蛋白結(jié)合形成RNP，核苷酸修飾，逐級切割真核rRNA 加工的大致過程：甲基化，切割。基因一般不重疊。起始氨酰tRNA也進入此位點。4 核糖體各亞基的功能核糖體小亞基功能：結(jié)合mRNA促進密碼子與反密碼子的正確結(jié)合 mRNA移位大亞基的功能A位、P位、肽酰轉(zhuǎn)移酶（轉(zhuǎn)肽酶）中心等在大亞基上。有些物種也有重疊基因的現(xiàn)象。密碼子為連續(xù)的，之間無間隔、無重疊。SP1 為組成性表達的轉(zhuǎn)錄因子，在所有的細(xì)胞中都存在，與基因本底表達水平有關(guān) SL1，選擇因子,RNA Pol I起始轉(zhuǎn)錄所必需的因子 CTD:羧基末端結(jié)構(gòu)域，的磷酸化狀態(tài)與轉(zhuǎn)錄進程有關(guān)轉(zhuǎn)錄起始時期，CTD結(jié)構(gòu)域一般處于去磷酸化形式，與結(jié)合啟動子有關(guān)。（Lac operon，lac repressor）負(fù)控阻遏:共阻遏物活化阻遏蛋白，使其可以降低基因的表達。轉(zhuǎn)錄的起始：開放復(fù)合物 閉合復(fù)合物 無效起始延伸：啟動子的清空，鏈的延伸轉(zhuǎn)錄泡，s因子的循環(huán)利用終止：依賴性 不依賴性反復(fù)重復(fù)序列Section L （cisacting elements）：一般為DNA上較為保守的、有著特異性序列或結(jié)構(gòu)的特定區(qū)域。有利于轉(zhuǎn)錄終止RNAP沒有3’ →5’外切酶活性，不能進行轉(zhuǎn)錄校正。b 亞基：RNAP的催化中心。細(xì)胞中，Ⅰ型酶與Ⅱ型酶的活性保持一種平衡狀態(tài)。雙鏈序列反向互補各基團排列方式：糖磷酸骨架DNA分子排列在外。第五篇：分子生物學(xué)總結(jié)SectionA 1 三個域：真細(xì)菌，古細(xì)菌，真核生物 2 組裝中的主要作用力：非共價健作用力SectionB 1 蛋白質(zhì)純化的分析方法正電荷：天冬氨酸 谷氨酸負(fù)電荷：賴氨酸 精氨酸組氨酸極性：天冬酰胺 谷氨酰胺蘇氨酸 絲氨酸 半胱氨酸非極性：脂肪族 甘氨酸 丙氨酸 纈氨酸 亮氨酸異亮氨酸 甲硫氨酸 脯氨酸芳香族 苯丙氨酸酪氨酸 色氨酸 Cys 二硫鍵 Gly 無手性 Pro 亞氨基酸芳香族氨基酸最大吸收峰280mm 3 蛋白質(zhì)的一級(決定蛋白折疊及其最后的形狀的最重要的因素)：氨基酸脫水縮合形成肽鏈 N端到C端共價鍵二級：多肽鏈中空間結(jié)構(gòu)鄰近的肽鏈骨架通過氫鍵形成的特殊結(jié)構(gòu)。顯示屏上出現(xiàn)一系列數(shù)據(jù)均“”并提示插入樣品“Insert sample ”。在顯示屏上：Pathlengh 10mm Units 181。分子生物學(xué)實驗中常使用紫外分光光度計進行核酸溶 液定量和純度的初步判斷。（3）揮發(fā)性、腐蝕性、強酸強堿類物質(zhì)應(yīng)盛于帶蓋稱量瓶內(nèi)稱量，防止腐蝕天平。（2）打開天平開關(guān)“on”，天平則自動進行靈敏度及零點調(diào)節(jié)。嚴(yán)禁將電泳槽放在儀器頂部，避免緩沖液灑進儀器內(nèi)部。在狀態(tài)欄最下方，顯示實際的工作時間（精確到秒）。③設(shè)置電流I，按“選擇”鍵，先使I反顯，然后輸入數(shù)字200。則操作步驟如下：①按“模式”鍵，將工作模式由標(biāo)準(zhǔn)（STD）轉(zhuǎn)為定時（TIME