【正文】 在計(jì)數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計(jì)數(shù)。若不干凈，則必須重復(fù)洗滌至干凈為止。因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果往往偏低。依次標(biāo)是1010101010106。放菌液時(shí)吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接觸一個(gè)稀釋度的菌懸液，否則稀釋不精確，結(jié)果誤差較大。同一稀釋度的三個(gè)重復(fù)對(duì)照的菌落數(shù)不應(yīng)相差很大，否則表示試驗(yàn)不精確。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1．結(jié)果2．將培養(yǎng)后菌落計(jì)數(shù)結(jié)果填入下表稀釋度104105106Cfu數(shù)/平板123平均123平均123平均每毫升中的cfu2．思考題(1)為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板?(2)要使平板菌落計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個(gè)關(guān)鍵?為什么?(3)試比較平板菌落計(jì)數(shù)法和顯微鏡下直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。（2）調(diào)整菌液濃度 用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)培養(yǎng)24小時(shí)的釀酒酵母菌懸液，并用無菌生理鹽水分別稀釋調(diào)整為每毫升110210410610810101012106含菌數(shù)的細(xì)胞懸液。（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告l．結(jié)果每毫升樣品原液菌數(shù)=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的菌數(shù)稀釋倍數(shù)2．思考題(1)光電比濁計(jì)數(shù)的原理是什么?這種計(jì)數(shù)法有何優(yōu)缺點(diǎn)?(2)光電比濁計(jì)數(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐中有何應(yīng)用價(jià)值?(3)本實(shí)驗(yàn)為什么采用560nm波長(zhǎng)測(cè)定酵母菌懸液的光密度?如果你在實(shí)驗(yàn)中需要測(cè)定大腸桿菌生長(zhǎng)的OD值，你將如何選擇波長(zhǎng)?四 大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定(一)目的要求1．通過細(xì)菌數(shù)量的測(cè)量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律，繪制生長(zhǎng)線。本實(shí)驗(yàn)用分光光度計(jì)(spectrophotometer)進(jìn)行光電比濁測(cè)定不同培養(yǎng)時(shí)間細(xì)菌懸浮液的OD值，繪制生長(zhǎng)曲線。3．培養(yǎng)將已接種的試管置搖床37℃振蕩培養(yǎng)(振蕩頻率250r/min)，分別培養(yǎng)0、1116和20h，將標(biāo)有相應(yīng)時(shí)間的試管取出，立即放冰箱中貯存，最后一同比濁測(cè)定其光密度值。(五)實(shí)驗(yàn)報(bào)告1．結(jié)果(1)將測(cè)定的OD600值填入下表：培養(yǎng)時(shí)間對(duì)照 0 3 4 6 8 10 12 14 16 20光密度值OD600(2)繪制大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線。實(shí)驗(yàn)過程中認(rèn)真及時(shí)做好實(shí)驗(yàn)記錄?？己藘?nèi)容共8項(xiàng)，每位同學(xué)通過抽簽考其中的一項(xiàng)內(nèi)容。革蘭氏染色法（1）、口試回答細(xì)菌涂片的制作方法（2）、將一張已涂好的細(xì)菌玻片進(jìn)行革蘭氏染色（3）、要求染色步驟及各項(xiàng)染色時(shí)間正確，操作熟練。（3）、正確觀察出鏡下細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)。本實(shí)驗(yàn)主要介紹目前微生物學(xué)研究中最常用的普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)和使用方法，目的在于使同學(xué)們通過本實(shí)驗(yàn)，對(duì)光學(xué)顯微鏡有比較全面的了解，并重點(diǎn)掌握明視野普通光學(xué)顯微鏡中油鏡的使用。六、作業(yè)（可選）哪些方法可以提高顯微鏡的分辨率？為什么有時(shí)候在低倍鏡下可看到的目標(biāo)，換用高倍鏡則無法看到？實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌、放線菌的形態(tài)觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙? 二、細(xì)菌染色的基本原理 G＋與G－細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)不同，當(dāng)用結(jié)晶紫初染后，像簡(jiǎn)單染色法一樣，所有細(xì)菌都被染成蘭紫色，碘作為媒染劑，它能與結(jié)晶紫結(jié)合成結(jié)晶紫碘的復(fù)合物，從而增強(qiáng)了染料與細(xì)菌的結(jié)合力。4．氣生菌絲、孢子絲的印片觀察載玻片——滴1滴美蘭染液——蓋玻片印片——印片面向下置于美蘭中——吸去多余染液——鏡檢（用油鏡觀察）——維護(hù)還原顯微鏡。（1）肉眼觀察（2）顯微鏡觀察打開培養(yǎng)皿蓋，將蓋倒置，在低倍鏡下觀察，注意假根和匍匐絲的結(jié)構(gòu)，孢囊結(jié)構(gòu)和孢囊孢子。器材顯微鏡，載玻片，蓋玻片，接種環(huán)，酒精燈，乳酸苯酚，吸水紙等。但從營(yíng)養(yǎng)角度分析，培養(yǎng)基中一般含有微生物所需的C源、N源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子以及水等。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的配制稱量45克營(yíng)養(yǎng)瓊脂，加水至1000毫升，煮沸后分裝，加棉塞滅菌。儀器：電爐、恒溫培養(yǎng)箱。（2）平板劃線法：制平板—制菌懸液—?jiǎng)澗€—培養(yǎng)—獲得純種微生物。取225ml蒸餾水于500ml具塞三角瓶中，包扎后滅菌。任何一種培養(yǎng)基制成后應(yīng)及時(shí)的滅菌，以備培養(yǎng)菌使用，一般培養(yǎng)基滅菌采用高壓蒸汽滅菌。：(1)制片：取干凈載玻片——加1滴乳酸苯酚——在菌落中心與邊緣之間鉤出少量菌（帶培養(yǎng)基）置于乳酸苯酚——加蓋玻片煮微沸——鏡檢.(2)觀察：將制片放在顯微鏡下，用低倍鏡觀察菌絲的粗細(xì)、顏色、分生孢子頭形態(tài)；曲霉頂囊大小、形態(tài)、可育面積、分生孢子梗粗細(xì)、顏色、表面特征，有無橫隔，小梗著生情況、大小、層數(shù)，分生孢子形態(tài)，大小，表面特征。區(qū)別孢囊與氣泡在顯微鏡下的差別：氣泡會(huì)吸附大量孢子，且中央亮，兩邊暗，而孢囊中間厚，整個(gè)區(qū)域都暗。放線菌菌落和細(xì)菌菌落有何不同之處？放細(xì)菌的菌體為何不易挑取？實(shí)驗(yàn)三 酵母菌和接合菌的形態(tài)觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙笳莆战湍妇徒雍暇浼皞€(gè)體主要形態(tài)特征。G－菌肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，其脂含量高, 乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，沙黃復(fù)染后呈紅色。（2）光學(xué)系統(tǒng)：目鏡、物鏡、聚光器、反光鏡、濾光片。（2）、操作技術(shù)手法正確熟練（3）、脫色程度控制較好。（2）、要求劃線分區(qū)正確，接種劃線手法正確、熟練。考核地點(diǎn)：微免實(shí)驗(yàn)課上課的實(shí)驗(yàn)室考核內(nèi)容及要求如下：顯微鏡（油鏡）的使用和保護(hù)方法（1）、提供一張細(xì)菌玻片標(biāo)本，要求能正確使用油鏡觀察到細(xì)菌的基本形態(tài)。如遇火險(xiǎn)，先關(guān)掉火源，再用濕布掩滅，必要時(shí)用滅火器。(3)次生代謝產(chǎn)物的大量積累在哪個(gè)時(shí)期？根據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的規(guī)律，采用哪些措施可使次生代謝產(chǎn)物積累更多？評(píng)論這張第二篇：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基本要求微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基本要求及成績(jī)?cè)u(píng)定一、思想和態(tài)度要求樹立嚴(yán)謹(jǐn)認(rèn)真的科學(xué)態(tài)度理解與驗(yàn)證基本原理掌握并不斷提高分析和解決問題的方法啟迪創(chuàng)新思維