【正文】 水平。即使干擾 RNA靶向特定基因確實(shí) 很 有前 景 的 ，但需要體內(nèi) 高效和生物相容性的 siRNA遞送手段來 實(shí)現(xiàn)其完整的治療潛力?；隗w積小，屏蔽疏水核心，受體介導(dǎo)的攝取能力等這些有效特征， HDL納米粒是一種理想的藥物載體。例如，乳腺癌細(xì)胞通過增加 SR B1的表達(dá)來增加膽固醇酯的攝取。在卵巢癌患者中， FAK過度表達(dá)與侵襲性腫瘤的特征相關(guān)，這有助于弱勢(shì)細(xì)胞生存。膽酸鈉， 140μ L （ 100mg/ml 溶于為PBS ）形成的蛋黃卵磷脂摩和膽酸的摩爾比為 1: 。顆粒明顯可見（放大 50000倍），通過使用 Zeiss 910透射型電子顯微鏡。所有的細(xì)胞都保存在 37176。 ）均購(gòu)自 SigmaAldrich 公司 ，RNAiFect 轉(zhuǎn)染試劑按照廠家建議 使用。從微序列分析得到的基因表達(dá)數(shù)據(jù)，加載到異丙醇獨(dú)創(chuàng)性通路數(shù)據(jù)庫(kù)，關(guān)于凋亡基因的不同表達(dá)可以驗(yàn)證選擇性。 C 孵育過夜。 高表達(dá) 或低表達(dá)都是 由婦科病理學(xué)家使用下列程序 來決定的 :強(qiáng)度從 1到 3,分布是從 1到 4。每張幻燈片有十個(gè)高倍區(qū)域，取平均值。兩個(gè)星期后，按照前面描述的開始用奧沙利鉑處理，根據(jù)圖 2C 所示。本研究中所有的數(shù)據(jù)使用雙側(cè)分析。在 50種人類卵巢上皮癌 , 96%的腫瘤細(xì)胞表達(dá)了 SRB1受體 (圖 1 C)。我們進(jìn)一步驗(yàn)證 rHDL納米粒的遞 送是否由受體介導(dǎo)。第四天，單劑量注射 ，我們發(fā)現(xiàn)降低了 88% STAT3蛋白水平 (圖 W3B)，在第 6天，蛋白表達(dá)有些回升。在 HeyA8 模型中，單獨(dú)給 STAT3 siRNA / rHDL 或多烯紫杉醇減少了的 62%的腫瘤重量 (P ,兩者 )。腫瘤節(jié)數(shù)量也有類似的效果（圖 2）。與對(duì)照組相比，奧沙利鉑和 STAT3 siRNA / rHDL 偶聯(lián)治療可使腫瘤重量（ 96 ％， P ）和肝臟中轉(zhuǎn)移損壞數(shù)目（ 86％ ， P ）顯著減少。 STAT3 靶向 腫瘤微環(huán)境的 影響 為了了解 STAT3 / rHDL 的生物效應(yīng)，在藥物敏感的 (SKOV3ip1)和藥物耐藥(HeyA8MDR)卵巢癌模型中進(jìn)行一系列的體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)。同樣 ,在 HeyA8MDR 模型 中，就 多烯紫杉醇 處理對(duì) MVD 的降低沒有影響， 但多烯紫杉醇 和 STAT3 siRNA / rHDL 偶聯(lián)治療可顯著降低 (圖W6)。從表中知，我們 使用 RTPCR 驗(yàn)證 STAT3基因沉默后最顯著改變的 12個(gè)基因 (圖 4 C)。與多烯紫杉醇治療相比， STAT3 siRNA 可增高 41%的細(xì)胞凋亡 (P )，這表明在體內(nèi)凋亡效應(yīng)的確實(shí)受到直接影響 (圖 5A)。因此 ,非特異性遞送系統(tǒng)可能需要更高的劑量來達(dá)到有效性和持續(xù)的基因沉默。此外 ,我們的安全研究表明，對(duì)照組 siRNA 相比， STAT3 / rHDL 在小鼠肝臟中吸收沒有任何不良反應(yīng)。所以，藥理干預(yù)靶向 STAT3對(duì)于這里描述的納米技術(shù)是可能的。 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 Figure of SRB1 mRNA in different human ans and tumors using RTPCR. Actin is used as a loading control. 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 Figure of systemic delivery of fluorescentlabeled siRNA/ control siRNA/rHDL or untagged siRNA/rHDL was injected (IV or IP), and 48 hours later, ans were harvested. Freshfrozen tissues were counterstained with Hoechst, and the level of fluorescentlabeled siRNA (red) was assessed with fluorescent microscopy. Average fluorescence uptake is represented by the graphs. *P .05 pared with untagged siRNA/rHDL. Hamp。在卵巢癌患者中， FAK 的過度表達(dá)與腫瘤相關(guān)功能在所有存活者中 并不明顯。 STAT3是一個(gè)良好的轉(zhuǎn)錄因子，涉及到腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移的許多關(guān)鍵過程。 遞送 siRNA 的 rHDL 傳輸系統(tǒng)具有許多的優(yōu)點(diǎn)。 Figure of STAT3 silencing on apoptosis. STAT3 was silenced using STAT3specific siRNA in (A)SKOV3ip1 and (B) HeyA8MDR cells with and without docetaxel treatment, and apoptosis was assessed using flow cytometry (annexin V). Average percent apoptosis (Annexin 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 V/PE–positive SKOV3 cells) and average percent apoptosis pared with control (annexin V/PE–positive HeyA8MDR cells) are reported. Error bars, SEM 討論 本研究的關(guān)鍵發(fā)現(xiàn)就是在體內(nèi) rHDL 納米粒能有效地傳遞 siRNA 以沉默基因，這些基因?qū)Π┌Y的增長(zhǎng)和發(fā)育很重要。STAT3基因沉默大量減少了關(guān)鍵生存基因，這些基因主要用來調(diào)節(jié) MAP 激酶和AKT 通路（圖 4）。因此，我們?cè)赟KOV3ip1卵巢癌模型中用 TUNEL 染色法 (圖 3)，在 HeyA8MDR 模型活化型半胱天冬酶染色法 (圖 W6)研究了腫瘤細(xì)胞的凋亡效果。與對(duì)照組比較， STAT3 siRNA / rHDL 和多烯紫杉醇聯(lián)合治療可抑制 48%腫瘤細(xì)胞增殖 (P )(圖 3)。在兩個(gè)不同治療組中，動(dòng)物體重或肝功能測(cè)試（ AST 和 ALT 比值）沒有顯著差異（圖 W5 ， A基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 和 B ）。相比于對(duì)照組和多烯紫杉醇單藥療法， STAT3 siRNA / rHDL 是否偶聯(lián)多烯紫杉醇都能顯著降低上腹部和薄壁肝組織的轉(zhuǎn)移。在SKOV3ip1模型中結(jié)果類似 (圖 2 B)。另一個(gè)關(guān)于癌癥生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵基因， FAK 也具有類似的結(jié)果 (圖 W3C)。 rHDL 納米粒在肝臟中的吸收最高，而在大腦、心臟、肺、腎、或脾中吸收很少。用 RTPCR 也檢測(cè)了一些細(xì)胞系 (圖 1 D)。反義寡賴氨酸多肽含有大約 40賴氨酸殘基，這可使 siRNA 偶聯(lián)到 rHDL。小鼠在第 2， 4或 6天解剖 。所有的實(shí)驗(yàn)都是由 MD 安德森癌癥中心機(jī)構(gòu)動(dòng)物護(hù)理和使用 委員會(huì)批準(zhǔn)。凋亡小體通過綠色熒光表示。肌動(dòng)蛋白或黏著斑蛋白證實(shí)相同的負(fù)載量 。人類肝中的 cDNA 利用 SRB1表達(dá)作為陽性對(duì)照組。分別使用 1: siRNA 和轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染，對(duì)照 siRNA 和 STAT3 siRNA 組無血清培養(yǎng)基培養(yǎng) 6 h。 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 體外基因沉默 STAT3 （靶序列 539。 細(xì)胞系和 培養(yǎng)條件 衍生和源于人體上皮卵巢癌細(xì)胞系的 HeyA8 ， SKOV3ip1， HeyA8 MDR細(xì)胞系在之前已有研究。 4 ℃孵育 12h， 接著用 2L 的 PBS 透析 2天，換 3次透析緩沖液。 原料與方法 rHDL 納米粒的制 備和 siRNA 的偶聯(lián) siRNA 偶聯(lián)到 rHDL 納米粒，并儲(chǔ)存在 20176。 siRNA基因沉默治療非常有效，其他方法