mtt法檢測細胞活力講解(完整版)
【正文】 8h換液的。 。最后比色時，以空白孔調(diào)零。 第九頁，共二十四頁。 ? 3〕每孔參加 10 ul MTT溶液〔 5 mg/ml，即 %MTT〕，繼續(xù)培養(yǎng) 4 h ? 4〕每孔加三聯(lián)裂解液〔 10gSDS，異丁醇 5ml， 10M HCl 成 100ml〕過夜， 第二天早晨置搖床上低速振蕩 10 min，使結晶物充分溶解。 5. 終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。 貼壁細胞操作步驟 1. 接種細胞：用 %胰蛋白酶消化單層培養(yǎng)細胞，用含血清的培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔 20243000個細胞接種于 96孔培養(yǎng)板中，每孔體積 90 ul。MTT法檢測細胞活力 甘肅中醫(yī)藥大學 第一頁，共二十四頁。 〔邊緣孔用 PBS或空白培養(yǎng)基填充〕。 6. 每孔參加 100ul二甲基亞砜〔置搖床上低速振蕩 10min，使結晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀 OD570nm測量各孔的吸光值。 100 % 第十頁，共二十四頁。 第十三頁，共二十四頁。一定要多看文獻，參考別人的結果再定個比較大的范圍先初篩。 ，不能測定細胞絕對數(shù)。由于試驗本底增加，會試驗敏感性。 ? 細胞密度要根據(jù)不同細胞的特點來定。所以要熟練鞋、快些上板。 第二十一頁，共二十四頁。 內(nèi)容總結 MTT法檢測細胞活力。 〔培養(yǎng)基、 MTT、二甲基亞砜〕，對照孔〔細胞、培養(yǎng)液、 MTT、二甲基亞砜〕。對于 DMSO，溶解后呈紫〔紅〕色， 490nm有最大吸收值 。 如何去除上清 ? 直接吸出：加 DMSO前要把液體吸掉，但培養(yǎng)液里的紫色結晶可能會吸去，可在這之前先用平板離心機離心 96孔板， 2024r， 5分鐘，然后吸掉上清 (如果是懸浮細胞，那么推薦此法 ,懸浮細胞要離心2500rpm MTT最好用圓底型 96孔板 ,去除上清時注意不要把下面的結晶顆粒吸掉 ,建議各孔吸棄 150160ul即可 )。 第十八頁
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