免疫細(xì)胞分泌研究進(jìn)展(完整版)
【正文】 胞Ca2 濃度升高激活,進(jìn)而引發(fā)K外流和細(xì)胞膜的超極化。1 免疫細(xì)胞的離子通道和細(xì)胞功能 免疫細(xì)胞不屬于可興奮性細(xì)胞(如神經(jīng)細(xì)胞、 肌肉細(xì)胞等)之列, 但也具有某些與神經(jīng)細(xì)胞相類似的電生理特性。這克服了單純電刺激引起的離子通道附近產(chǎn)生不同的鈣微區(qū)的缺點。另一種方法是通過基因轉(zhuǎn)染方法將熒光基因如綠色熒光蛋白(GFP)基因轉(zhuǎn)入靶細(xì)胞中并選擇性地在囊泡中表達(dá),然后用激光掃描共聚焦熒光顯微鏡等檢測囊泡的運動過程［5］。 另外, 該方法對細(xì)胞無損傷, 可進(jìn)行長時間監(jiān)測。2 電化學(xué)測量 用電化學(xué)技術(shù)監(jiān)測細(xì)胞分泌的原理是: 在電極尖端表面施加一定的電壓, 容易氧化的化學(xué)信使物質(zhì)就會在電極尖端釋放出電子而發(fā)生氧化,電極可獲得電子并產(chǎn)生一定的電流［3］。最近出現(xiàn)的細(xì)胞貼附膜片電容技術(shù), 膜電容分辨率可達(dá)到0amp。54卷測定。細(xì)胞分泌活動是生物體信息傳遞和細(xì)胞功能的基本過程之一, 如神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)遞質(zhì)和激素的分泌、免疫系統(tǒng)中細(xì)胞因子和抗體的分泌等。細(xì)胞分泌活動涉及一系列復(fù)雜的分子活動和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程, 隨著新技術(shù)尤其是細(xì)胞分泌檢測技術(shù)的不斷出現(xiàn),這一過程正在被逐步揭示出來。近年來,各種實時監(jiān)測技術(shù)的發(fā)展極大地促進(jìn)了人們對細(xì)胞分泌機制的了解。46。微電極的電流大小與電極尖端面積和實驗類型有關(guān), 一般在pA到nA范圍,通常采用膜片鉗放大器等低噪聲儀器進(jìn)行檢測。但是電極只能檢測到少部分信息物質(zhì)(10％左右),而且對于那些不能被氧化的物質(zhì)的釋放不能直接檢測［16］。例如, 將GFP基因與囊泡特異的前胰島素基因整合后轉(zhuǎn)入胰島INS1 β細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá),然后用熒光成像技術(shù)實時研究活分泌囊泡的轉(zhuǎn)移、 錨定和胞吐過程。DMnitrophen在光解前對Ca2 有很高的親和力,對靜息的細(xì)胞鈣緩沖幾乎沒有影響, 是研究細(xì)胞鈣緩沖和鈣穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)的非常理想的材料。離子通道的活動與離子跨膜流動、膜電位的變化以及隨后的淋巴細(xì)胞激活密切相關(guān)。電壓依賴性Ca通道僅在B淋巴細(xì)胞上存在, 而在T淋巴細(xì)胞以及T淋巴細(xì)胞株均未見報道。 2amp。進(jìn)一步研究Ca2 和GTPγS的促分泌效率的差別和他們分別在什么情況下起作用將是一個重要課題。這是首次直接觀察到直徑＜500 nm的小囊泡的融合孔, 根據(jù)其起始電導(dǎo)小的特征,可以推測融合孔的形成必須有蛋白質(zhì)參與。與融合孔的研究相比, 對膜分裂孔(fission pore)的研究非常有限, 因為胞飲囊泡通常非常小, 不能被全細(xì)胞膜電容記錄所分辨, 而細(xì)胞貼附式膜電容記錄可分辨出單個囊泡的胞飲, Lollike已經(jīng)分辨出直徑300～700 nm的小囊泡分裂孔［2］。 對肥大細(xì)胞的研究表明, PKC活性是調(diào)控肥大細(xì)胞脫顆粒的重要因素［17］。MHCI類抗原NK細(xì)胞受體可抑制NK細(xì)胞的脫顆粒和自然殺傷作用,但是尚不清楚是哪種特異性受體介導(dǎo)了這種作用, 以及這些受體是否影響細(xì)胞因子分泌等NK細(xì)胞的其他功能。當(dāng)然細(xì)胞也可能通過不依賴Ca2 信號的其它信號系統(tǒng)來直接調(diào)控不同的分泌,例如PKC的激活可觸發(fā)分泌［21］, g蛋白偶聯(lián)的受體latrophilin也可在無明顯Ca2 信號升高的情況下觸發(fā)分泌［22］。細(xì)胞內(nèi)膜結(jié)構(gòu)上存在4種VAMP蛋白: VAMP cellubrevin、 tIVAMP和VAMP8, 其中以VAMP8對細(xì)胞胞吐活動最為重要。 免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定最終可歸結(jié)為免疫因子分泌的平衡。 細(xì)胞因子和神經(jīng)遞質(zhì)以及激素的多功能位點特性是其神經(jīng)和免疫調(diào)節(jié)的分子基礎(chǔ)。除此之外, 許多細(xì)胞因子和遞質(zhì)都有多功能位點特征。形態(tài)學(xué)研究表明,在幾乎所有免疫細(xì)胞上都有不同神經(jīng)遞質(zhì)和激素的受體, 同時許多種神經(jīng)遞質(zhì)和激素受體在免疫細(xì)胞上都有分布。 [!] chen等［24］對血小板分泌的分子機制進(jìn)行了研究, 揭示了SNAP23在Ca2 引發(fā)的致密顆粒釋放中的作用。amp。 90年代分泌機制的研究獲得了突破性的進(jìn)展, 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞分泌的關(guān)鍵蛋白質(zhì)復(fù)合體SNARE是導(dǎo)致包括神經(jīng)元、內(nèi)分泌細(xì)胞和免疫細(xì)胞在內(nèi)的各種細(xì)胞分泌發(fā)生的共同分子機制［20］。 這一過程除需要激活酪氨酸激酶(tyrosine kin
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