細(xì)胞工程-動(dòng)物細(xì)胞工程(完整版)
【正文】 及其彼此融合的細(xì)胞不能增殖。 B淋巴細(xì)胞？ B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞放在一起，有幾種融合方式？ ? ? ？ 制備過程提示 : 制備單克隆抗體 ◆ 每一個(gè) 只分泌一種特異性抗體。 動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的應(yīng)用 ? 細(xì)胞融合技術(shù)突破了 有性雜交 的局限，使遠(yuǎn)緣雜交 成為可能。 一、動(dòng)物細(xì)胞融合 ◆ 雜交細(xì)胞： 融合后形成的具有原來 兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息 的 單核細(xì)胞 成為雜交細(xì)胞 。 若黑面綿羊的基因型為 AA,白面綿羊的基因型為 aa，則克隆羊的基因型為 核移植 胚胎移植 白色 多利全部的核基因都來自白面綿羊 aa ◆ 取供體細(xì)胞傳代培養(yǎng) 10代以內(nèi)的細(xì)胞 .為什么？ ◆ 用的是去核的減數(shù)第二次分裂中期細(xì)胞（ MⅡ 中期 ）為什么？ ◆ 激活方法： ◆ 激活目的： ◆ 促融方法：電刺激 ◆ 胚胎移植至代孕受體內(nèi) 妊娠、分娩 2）核移植流程 供體：優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)奶牛 受體：普通奶牛（卵母細(xì)胞的采集與培養(yǎng)） ，易操作。 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用 : 蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn) 如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體 應(yīng)用于基因工程 主要用于作為受體細(xì)胞 檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性 細(xì)胞的生理、藥理、病理研究 如用于篩選抗癌藥物 植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較： 比較項(xiàng)目 植物組織培養(yǎng) 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 原理 細(xì)胞的全能性 細(xì)胞增殖 培養(yǎng)基性質(zhì) 固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基 培養(yǎng)基特有成分 蔗糖、植物激素 葡萄糖 促 動(dòng)物血清 培養(yǎng)結(jié)果 植物體 細(xì)胞株、細(xì)胞系 培養(yǎng)目的 快速繁殖、培育無病毒植株 獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白 取材 植物幼嫩部分或花藥 胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織 其他條件 無菌無毒，適宜條件 無菌無毒，適宜條件 二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物 定義： 動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的 一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核 ,移入一個(gè)已經(jīng) 去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中 ，使其重組并發(fā)育成一個(gè) 新的胚胎 ,這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為 動(dòng)物個(gè)體 。 動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)， 胰 蛋白酶處理動(dòng)物組織，可以使動(dòng)物組織細(xì)胞間的蛋白質(zhì)和 細(xì)胞外的其他成分酶解，獲得單個(gè)細(xì)胞。 細(xì)胞株：一般說遺傳物質(zhì)未改變 細(xì)胞系：遺傳物質(zhì)已改變 原代培養(yǎng) : 1）無菌無毒 的環(huán)境： 適宜的溫度： 人和哺乳動(dòng)物細(xì)胞最適溫度為177。有 接觸抑制 現(xiàn)象） 。 ① 原代培養(yǎng) 過程 圖示 原代培養(yǎng) 強(qiáng)調(diào)一：細(xì)胞貼壁過程 ■ 細(xì)胞貼壁： 在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。 ℃ 。 問題 4：為什么用胰蛋白酶處理而不用胃蛋白酶？ 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的最適 PH值為 ，胰蛋白酶作用的適宜 PH為 ，胃蛋白酶適宜 PH為 2，胃蛋白酶在 PH為。 分類： 胚胎核移植、體細(xì)胞核移植。 促使細(xì)胞核表達(dá)全能性的物質(zhì)和營養(yǎng)條件。 基因型相同的細(xì)胞融合成的雜交細(xì)胞稱為 同核體 。 ? 利用 雜交瘤技術(shù)， 制備 單克隆抗體。 ◆ 具有無限增殖的特性。 人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜交細(xì)胞中可利用淋巴細(xì)胞中的 S途徑合成 DNA而增殖。但 BG雜交瘤細(xì)胞也是一個(gè)系列：如 B1G,B2GBnG。第 2次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞群。實(shí)驗(yàn)過程如圖所示。 （ 2）設(shè)計(jì)一方法（不考慮機(jī)械方法），從培養(yǎng)液中分離出 雜種細(xì)胞，并說原理。 原理： 培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細(xì)胞 加入氨基嘌呤后 ,使 D合成的途徑阻斷 ,所以僅 D合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞或彼此融合的細(xì)胞就不能增殖 ,但雜種細(xì)胞則可以利用淋巴細(xì)胞中的 S途徑合成 DNA而增殖 B 體外培養(yǎng) 骨髓瘤細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞 足夠數(shù)量的細(xì)胞群 注射到 小鼠腹腔 A C 下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)方案 該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？ 圖中 B為 ________過程，常用_________作
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