【正文】 wth factors I and II[J]. Growth Factors, 1991, 5:318. [9] Kornfeld S. Structure and function of the mannose 6phosphate/insulinlike Growth factor II receptors[J]. Annu Rev Biochem. 1992, 61:307330[10] Jones J I, Clemmorts D R. Insulinlike growth factors and their binding proteins: Biological Actions[J]. Endocr Rev, 1995, 16:3234[11] Jones J I, Clemmorts D R. Insulinlike growth factors and their binding proteins: Biological Actions[J]. Endocr Rev, 1995, 16 (2):334[12] Andress D L, Birnbaum R S. Human osteoblastderived insulinlike growth factor (IGF) binding protein5 stimulates osteoblast mitogenesis and polentiates IGF action[J]. Biol Chem, 1992. 267: 2246722472[13] Jones J I, Gockerman A, Busby Jr W H et al. Clemmons D growthfactor binding protein 1 stimulates cell migration and binds to the 5β1 integrinreceptor by means of its ArgGlyAsp sequence[J]. Proe Natl Acad Sci USA, 1993, 90:1055310557[14] Oh Y, Muller H L, Lamson G et al. Insulinlike growth factor(IGF)independent action of IGFbinding protein3 in Hs578T human breast cancerCells[J]. Biol Chem. 1993b, 268:1496414971[15] Jones J I. Clemmons D R Insulinlike growth factors and their binding proteins: Biological actions[J]. Endocr Rev, 1995, 16:334[16] Kelley K M, OH Y, Gargosky S E, Gacev Z, Matsumoto T, Hwa V, Ng L, Simpson D M, Rosenfeld R G. Insulinelike growth factorbinding protaln(IGFBPs)and theirRegulatory dynamics[J]. Int Biochen Cell Biol, 1996. 28(6):619637[17] Jones J I. Clemmorts D growth factors and their binding proteins: biological actions[J]. Endocr Rev, 1995, 16:334 [18] 顧以韌，張凱，李明洲，(IGFs)系統(tǒng)基因的發(fā)育表達(dá)模式[J].遺傳，2009，31(8)：8384.致 謝本論文是在導(dǎo)師張紅平教授的悉心指導(dǎo)下完成的，從論文選題、試驗設(shè)計、數(shù)據(jù)處理、寫作上都凝聚著導(dǎo)師的大量心血。本次試驗在南江黃羊從初生到生后120d，在肝臟、肺臟、心臟和背最長肌、半膜肌、臂三頭肌組織中均檢測到IGFBP6基因的表達(dá)，并且在背最長肌中的表達(dá)量最高，在肝臟組織中表達(dá)量最少。臂三頭肌中，IGFBP6基因的表達(dá)量為生后60d＞生后0d＞生后30d＞生后90d＞生后120d，其中在生后60d基因表達(dá)量達(dá)到峰值，極顯著高于生后0d、30d、90d、120d（P＜）。 IGFBP6基因的組織表達(dá)差異 根據(jù)出生后各階段不同組織IGFBP6基因表達(dá)量的差異，如圖4，基本呈現(xiàn)背最長肌表達(dá)量最高，IGFBP6基因表達(dá)量總是極顯著高于其他組織（P＜），其次為肺臟和心臟組織，其它組織的表達(dá)量最低。當(dāng)DNA解鏈時，熒光信號強(qiáng)度降急劇降，此時的溫度為融解溫度(Tm)。 GLM程序進(jìn)行最小二乘分析，結(jié)果以最小二乘均數(shù)177。檢測中為每個待測樣品cDNA設(shè)置3個重復(fù)，對得到的3個Ct值取平均值，以備帶入公式進(jìn)行計算。各梯度稀釋液作為標(biāo)準(zhǔn)品備用。l去離子水進(jìn)行稀釋，作為原始管。l總體積40181。（2）按照下表的逆轉(zhuǎn)錄體系配制混合液，徹底混勻，渦旋振蕩時間不超過5秒鐘，簡短離心，并置于冰上，如果要做多個逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，可以將配制好的混合液后分裝在單個反應(yīng)管中，置于冰上。采樣后快速置于液氮中帶回試驗室，放置于80℃冰箱中保存?zhèn)溆谩＿@些都證明了IGFBP6在肌肉的生長中具有重要的作用。但也有例外，在人和鼠中IGFBP6分別缺乏2個和4個氨基酸；而IGFBP4則含有20個半胱氨酸殘基。IGFBPs是IGFs的重要組成之一，IGFBPs對于調(diào)節(jié)IGFs的生物學(xué)功能主要表現(xiàn)在以下四個方面： (1)IGFs運載蛋白的作用，并可調(diào)節(jié)血液中游離IGFs含量；(2)延長IGFs的半衰期，調(diào)節(jié)IGFs的代射清除率；(3)對特異性組織、細(xì)胞進(jìn)行識別和定位；(4)調(diào)節(jié)IGFs的生物學(xué)效應(yīng)，通過調(diào)節(jié)IGFs和IGFs受體的相互作用來完成；(5)不用依賴于IGFs而直接調(diào)節(jié)正常和惡性細(xì)胞的生長[1215]。IGFs在許多組織中均有表達(dá)， IGFs除了通過旁分泌方式發(fā)揮作用外[7]，還可以在局部以自分泌的方式促進(jìn)細(xì)胞增殖[8]。關(guān)鍵詞：南江黃羊；IGFBP6基因；克?。粺晒舛縋CR；表達(dá)Cloning of Goat IGFBP6 Gene and its Developmental Change in Tissue ExpressionYou Jie, Animal本研究以培育品種南江黃羊為試驗材料，應(yīng)用RTPCR和克隆技術(shù)克隆山羊IGFBP6基因的全編碼區(qū)序列，采熒光定量PCR技術(shù)研究該基因在南江黃羊生后5個時間點（0d、30d、60d、90d、120d）和6個組織（肝臟、肺、心臟、背最長肌、半膜肌和臂三頭?。┑陌l(fā)育性變化。IGF家族由2個生長因子(IGFI和IGFII)、IGF受體(IGFI R和IGFII R)、IGF結(jié)合蛋白(IGFBPs)及IGF蛋白水解酶組成。存在于血液和細(xì)胞間隙中的IGFs絕大部分與IGF結(jié)合蛋白(IGFBPs)結(jié)合。 IGFBPs的結(jié)構(gòu)和功能IGFBPs成熟蛋白均由200～300個氨基酸殘基組成，其中20～40個氨基酸殘基形成信號序列，并含有18個半胱氨酸殘基，組成9對鏈內(nèi)二硫鍵。在人和豬上IGFBP6研究