【正文】 ....17 .............................................17 CAT活力計算 .........................................18 SOD酶活力測定 ...........................................18 實(shí)驗(yàn)原理 .............................................18 實(shí)驗(yàn)方法 .............................................18 結(jié)果計算 .............................................20 .............................................20第三章 結(jié)果與討論 ..............................................21 蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 .........................................21 CAT酶活測定 .............................................22 CAT酶活測定數(shù)值 .....................................22 再生不同天數(shù) CAT酶活隨 SDS濃度變化 ...................23 不同 SDS濃度下 CAT酶活隨再生天數(shù)變化 .................26 SOD酶活測定 .............................................27 SOD酶活測定數(shù)值 .....................................27 再生不同天數(shù) SOD酶活隨 SDS濃度變化 ...................28 不同 SDS濃度下 SOD酶活隨再生天數(shù)變化 .................31結(jié) 論 ............................................................33參考文獻(xiàn) ........................................................34致謝及聲明 ......................................................37附件………………………………………………………………………………38第一章 引 言 課題研究的背景及意義 淡水渦蟲是扁形動物門和渦蟲綱的代表，它是動物界兩胚層輻射對稱進(jìn)化到三胚層兩側(cè)對稱的初級階段，是再生作用、胚胎發(fā)育、行為等生物學(xué)研究的理想材料，是國際動物界熱衷探索的項(xiàng)目。已知的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是，較高濃度的十二烷基硫酸鈉會導(dǎo)致渦蟲的快速死亡，較低濃度十二烷基硫酸鈉對渦蟲體內(nèi)超氧化物歧化酶酶（SOD）和過氧化氫酶（CAT）兩種抗氧化酶活力有較大的影響。關(guān)鍵詞：東亞三角渦蟲，十二烷基硫酸鈉，超氧化物歧化酶酶，過氧化氫酶　　AbstractAccording to the information in the literature, sodium dodecyl sulfate (Sodium Dodecyl Sulfate, SDS) is monly used anionic surfactant in large numbers in all kinds of detergents and decontamination powder, with the sewage discharge to the environment caused Certain hazards, but it is also the biochemical, immunological detection of protein denaturant monly used, toxic. Known experimental results, the higher concentration of sodium lauryl sulfate can cause rapid death planarian, the lower the concentration of sodium lauryl sulfate on the planarian body enzyme superoxide dismutase (SOD) and peroxide Catalase (CAT) activity of two antioxidant enzymes have a greater impact. SDS of the experiment is to explore the process of planarian regeneration, different concentrations of SDS on the two planarian in vivo oxidative enzyme activities, but also in the process of planarian regeneration of the SDS with the same concentration of the different number of days on the planarian Both in vivo oxidative enzymes.According to information provided by teachers and semilethal concentration, in the planarian will not affect the concentration of death, select 0, , 1, , 2, , 3mg / L concentration of the regeneration of seven processing, processing time is 1, 4 , 7, 10d, through experiments, can be seen that sodium lauryl sulfate 2 of planarian in vivo activities of antioxidant enzymes are promoting effects. Planarian regeneration in the different stages of SOD, CAT were significant changes, the first clear upward trend, then decreased and then increased and then stabilized。結(jié)果,大量的表面活性劑一般在大量排放進(jìn)行污水處理植物或直接到水生環(huán)境的地區(qū)，那里沒有污水處理。此外，在SDS 對水生系統(tǒng)毒性作用方面人們也進(jìn)行了一些相關(guān)研究 [8]~ [9]，但找尋一種水生生物來監(jiān)測水體中的SDS污染程度的研究尚未見報道。大部分種類營自由生活。通常約2mm，體呈圓形，口位于近中央的腹中線上，有的具一簡單的咽，無消化管，有一團(tuán)來源于內(nèi)胚層的營養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行吞噬和消化。代表種如大口蟲（Macrostomum ）、微口渦蟲（Microstomum）。原腎管一對，卵巢一對，具分支的卵黃腺。體長一般 5～30mm，體寬1～5mm。該類渦蟲身體柔軟，體形較小，左右對稱，呈柳葉狀，最長可達(dá) 15 毫米，體色為黑色，褐色，紅棕色，或乳白色等；頭端呈三角形截頂狀或弓形，兩側(cè)各有一耳狀突起；背面有兩個黑色眼點(diǎn) [7]，有的種類眼點(diǎn)多達(dá)數(shù)百個，生活于洞穴中的種類眼點(diǎn)退化或消失。體前端背側(cè)有一對眼點(diǎn)，構(gòu)造簡單，由色素細(xì)胞和視覺細(xì)胞構(gòu)成。渦蟲的斷裂再生 3～11 月均可以發(fā)生,并在 5 月、9 月出現(xiàn)高峰,其水溫分別為 25 ℃、20 ℃。因此,渦蟲 1 年中無性生殖的增長模式不能以幾何級數(shù)表示 [1]。是一種無毒的陰離子表面活性劑，其生物降解度＞90％。根據(jù)活性中心結(jié)合的金屬離子不同， SOD 主要分為：①Cu/ZnSOD，主要存在于真核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中； ②FeSOD，主要存在于原核細(xì)胞和真核細(xì)胞的基質(zhì)中； ③MnSOD，主要存在原核細(xì)胞及少數(shù)植物細(xì)胞中。 過氧化氫酶(CAT)過氧化氫酶( Catalase, CAT, EC 1. 11. 1. 16)是一種含鐵葉琳的酶 [36]，其活性中心是血紅素，能將過氧化氫催化分解成氧和水。因此，過氧化氫酶對于減輕活性氧損傷具有一定的意義。本實(shí)驗(yàn)采用了第一類中改進(jìn)的貝爾斯—西策爾斯（Beers – Sizers ）法。（3）酶活測定條件的探索。放入冰箱 4℃保存，此溶液可保存較長時間。(9) 總蛋白提取液:,7mgEDTANa,15mgDTT,20ml 的甘油，80ml 水，用 NaOH 調(diào)節(jié) PH 到 。然后將滴管提起，離開水面。每個濃度梯度做三個平行實(shí)驗(yàn)，每個實(shí)驗(yàn)處理培養(yǎng) 10條已切渦蟲，每 24h 更換一次培養(yǎng)液。常用測定方法有 Lowry 法和考馬斯亮藍(lán)G250 染料結(jié)合法。取六只試管中按表 21 配制 0100μg/ml 牛血清蛋白液各 1ml。(2) 取 10ml 試管 4 支，3 支為測定（3 個重復(fù)） ，1 支為對照，按下表加入試劑。實(shí)驗(yàn)表明，其自氧化率隨溶液的 pH、溫度的升高而增大，在實(shí)際操作中，一般 pH 為 ~，鄰苯三酚濃度為 ~，溫度為 25℃ [41]。組間差異用單因素方差分析(Oneway ANOVA) ，最小顯著差數(shù)法 LSD檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較.，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α = 。CAT比活（U/mg）CAT濃度 未切 2天 再生 1天 再生 4天 再生 7天 再生 10天0mg/l 177。393177。0.1488177。0.1528177。0.0191177。再生 1 天時，小濃度與對照組無顯著性差異(P)，與 0mg/l 相比， 1mg/l 的 SDS 對 CAT 活性無顯著的增效作用， ，但是在 (P)，最適濃度為2mg/l。但隨著作用天數(shù)的增加，CAT 耐受 SDS 濃度降低。CAT 酶活隨天數(shù)的增加呈下降趨勢。 SOD 酶活測定 SOD 酶活測定數(shù)值S0D比活（U/mg）SDS濃度 未切 2天 再生 1天 再生 4天 再生 7天 再生 10天0177。8177。177。2.490177。1.326177。組間差異用單因素方差分析(Oneway ANOVA)，有顯著差異者用 Tukey HSD 檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取 α = 和 α = 。再生 7 天時，各個濃度的 SDS 與對照組 0mg/l 相比，對 SOD 酶活都有極顯著差異（P),SOD 酶活性極顯著增強(qiáng)。 SOD 的最適 SDS 濃度也隨天數(shù)的增加而降低。這與 Dimitrova 等于1994 年提出的 SOD 和 CAT 是氧損害的第一道防線，二者能對外源物產(chǎn)生協(xié)同反應(yīng)的結(jié)論一致。由于 SDS 有促進(jìn)細(xì)胞氧化應(yīng)激性的能力，因此加快了 SOD 的變化趨勢。SDS 對 CAT有低濃度促進(jìn)，高濃度抑制的作用。不同濃度的 SDS對渦蟲再生過程中的 SOD酶活變化速度有增效作用。再生后期再生完成細(xì)胞分裂、分化程度降低， ，氧損傷減小，SOD 酶活降低，恢復(fù)到正常水平，所以與對照組酶活性變化相似。(4)濃度為 。不同濃度的SDS對渦蟲再生過程中的 CAT酶活變化速度有增效作用。而且 SOD的在再生過程中的變化趨勢要快于 CAT，可見雖然 SOD 是渦蟲再生過程中的主要發(fā)揮抗氧化作用的酶，這符合學(xué)術(shù)界公認(rèn)的 SOD 是機(jī)體抗氧化的第一道防線的觀點(diǎn)。 不同 SDS 濃度下 SOD 酶活隨再生天數(shù)變化由表 34 所測數(shù)據(jù)，以渦蟲再生天數(shù)為自變量，SOD 比活為因變量，用excel2022 處理可得圖 35。 SDS 對 SOD 呈現(xiàn)低濃度促進(jìn)，高濃度抑制的作用?？梢姡?SDS 濃度對 SOD 酶活性有明顯影響，當(dāng)達(dá)到 2mg/l 之后開始變得平穩(wěn)，對酶活影響大幅不再變化。01mg/l 酶活幾乎沒有變化，小濃度的 SDS 對其沒有影響。1.001177。177。9177。0.7861mg/l177。177。處理天數(shù)不同最高峰的濃度也不同，2 天對照是 0mg/l,1 天是 2mg/l，10 天的都是。綜合各組再生的情況，SDS 對 CAT 的最適濃度為。再生 7 天時,與 0mg/l 相比，各濃度的 SDS 對 CAT 酶活都有極顯著的增效作用（P) ，1mg/l，2mg/l， ，3mg/l 沒有顯著性差異。0.1277177。0.1501177。0.0919177。131mg/l177。0.1396177。 第三章 結(jié)果與討論 蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線制作用牛血清蛋白制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，配置 1~100ug/ml 的溶液，測得在 595nm 的OD 值如表 31 所示。要求自氧化速率控制在每分鐘的光吸收值為 （可增減鄰苯三酚的加入量，以控制光吸收值） [42~43] 。 CAT 活力計算定義：以 1min 內(nèi) 酶液 A240降低 （3 支測定管的平均值）為一個酶活性單位（U） 。試管編號 1 2 3 4 5 7BSA 原液（ml ） 蒸餾水 （ml ） 0BSA 濃度（μg/ml）0 20 40 60 80 100表 21 牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線測定