【正文】 度快，運行時間短。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 從色譜流出曲線可以獲得許多重要信息： ，可以判斷試樣中所 含有組分的最少個數(shù)。39。 VM = tM 因此色譜工作者有時也用保留體積來表 示保留值 。 = ? ） ③ .色譜峰底寬（ 色譜峰兩側(cè)拐點上的切線在基線上截距間的距離） Wb（ Wb=4 ?） YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 保留值（ Retation Value）是試樣各組分在色譜柱中保留行為的量度，它反映了組分與固定相間作用力大小，通常用保留時間和保留體積表示。引起 峰拖尾的主要原因是溶質(zhì)在固定相中存在吸附 作用，因此，拖尾峰也稱為吸附峰。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 空間排斥（阻）色譜 Size Exclusion Chromatography tR YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 空間排斥（阻）色譜 Size Exclusion Chromatography tR YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 空間排斥（阻）色譜 Size Exclusion Chromatography tR YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 空間排斥（阻）色譜 Size Exclusion Chromatography tR YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 空間排斥（阻）色譜 Size Exclusion Chromatography tR YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 三、氣相色譜分離過程及有關(guān)術(shù)語 （一）氣相色譜分離過程 （二）氣相色譜的常用術(shù)語 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 （一）氣相色譜分離過程 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 試樣中各組分經(jīng)色譜柱分離后，隨氣 體依次流入檢測器，檢測器將各組分濃度 變化轉(zhuǎn)換成電信號，在記錄儀上記錄為檢 測器響應隨時間變化的微分曲線，即色譜 流出曲線，也稱 色譜圖 （見圖 23）。 ? 高于臨界溫度和臨界壓力的狀態(tài)稱為超臨界狀態(tài)。 ? ? 上個世紀八十年代，毛細管電泳出現(xiàn)，此后得到長足的發(fā)展，并不斷出現(xiàn)新的模式，一直成為研究的熱點。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 色譜法發(fā)展的歷史 ： ? 1906年俄國植物學家 Tswett命名自己發(fā)明的分離植物色素的新方法為色譜法。 色譜法的最早應用是在 1906年俄國植物學家茨維特 (Tswett)用于分離植物色素時采用，其方法是這樣的：在一玻璃管中放入碳酸鈣，將含有植物色素（植物葉的提取液）的石油醚倒入管中。 第一節(jié) 概 述 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 色譜起源 加入石油醚分層 ?胡蘿卜素 ?葉黃素 ?葉綠素 A、 B Chromatography 原理 : 基于物質(zhì)在不同相之間具有不同的分配系數(shù)引起的分離 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 此時，玻璃管的上端立即出現(xiàn)幾種顏色的混合譜帶。因為他并不是一個著名的學者，因此他發(fā)表出來的文章并沒有得到重視。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 二 、 色譜法的分類 色譜分析法有很多種類，從不同的角度出發(fā)可以有不同的分類方法。處于超臨界狀態(tài)時，氣液兩相界面消失，性質(zhì)非常接近，以至于無法分辨，故稱之為超臨界流體。 （二）氣相色譜的常用術(shù)語 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 色譜圖 ：若干物質(zhì)的流出曲線，即在不同時間上的 濃度或者響應的大小。 伸舌峰： 當 As小于 1時，色譜峰是前半部分信號 增加慢，后半部分信號減小快。 （ 1）保留時間（ Retation Time） tR 指某組分通過色譜柱所需要的時間，即從進樣到出現(xiàn)某組分色譜峰最大值的時間，單位為 min或 s。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 （ 4）保留體積 VR （ Retation Volume ）是 指從進樣到出現(xiàn)某組分色譜峰最大值時所 通過的載氣體積。F 0（ 僅適用于氣相色譜 ，不適用于液相色譜 。39。 。 溶解 揮發(fā) YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 問題 2：吸附與脫附是怎么回事？ YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 吸附作用是指各種氣體、蒸氣以及溶液里的溶質(zhì)被吸著在固體或液體物質(zhì)表面上的作用。 當樣品進入流動相時，它就隨流動相一 起沿柱床向前移動，當它們進入固定相時， 被滯留而不再向前移動。 k值越大 ， 說明組分在固定相中的量越多 ， 相當 于柱的容量大 ， 因此又稱 分配容量 或 容量因子 。 RMssttuuR ??（ 211） YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 Rs若用質(zhì)量分數(shù)表示，則有 結(jié)合兩式有： kmmmmmRMSSMMs ??????1111kttRM??11（ 212） YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 經(jīng)整理可得 )1( ktt MR ??MRMRMMRVVtttttk??????（ 215） （ 216） 可見，某組分的 k可直接從色譜圖中測得： 它等于該組分的 調(diào)整保留時間 與 死時間 的比值。這些峰 的寬或窄是由組分在色譜柱中傳質(zhì)和擴散行為 決定的，即與色譜過程的動力學性質(zhì)有關(guān)。 作為一個色譜理論，它不僅應說明組分在色譜柱中移動的速率，而且應說明組分在移動過程中引起區(qū)域擴寬的各種因素。 （ 218） YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 222/139。 載氣流速下柱效不同的實驗結(jié)果，也無法指出影響柱效的因素及提高柱效的途徑。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 式中的 u為載氣的 線速度 ； A、 B、 C為 常數(shù)，分別代表 渦流擴散項系數(shù)、分子擴 散項系數(shù)和傳質(zhì)阻力項系數(shù) 。 這一過程中試樣組分將在兩相間進行質(zhì)量交 換 ， 即根據(jù)分配系數(shù)在兩相間進行分配 。 （ 225） YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 提高柱溫可增大 D1， 但會使 k值減小； 為了保持適當?shù)?C1值 ， 應控制適宜的柱溫 。 通過選擇適當?shù)?固定相粒度 、 載氣種 類 、 液膜厚度 及 載氣流速 可提高柱效。 （ 227） YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 不同分離度時色譜峰分離的程度 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 （二）色譜分離基本方程式 分離度作為柱的總分離效能指標，既 反應了兩組分 保留值的差值 ，又考慮到了 色譜峰寬度 對分離的影響，即柱效能 neff的 高低。139。???????????????????????????????kknttkttntttttttktnWttWWttRktnWWtnttkkttRRMRRRRRRRRMRRRRMRMRMRYANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 ?? 14???e f fnR 式（ 229）和（ 231）將 分離度 R與 柱效能 n(neff)、 柱選擇性 α和 k聯(lián)系起來 ，為色譜分離條件的選擇提供了理論依據(jù)。 研究證明 α 的微小變化 ， 就能引起 R的顯著變化 。 知道其中兩個指標，就可計算出第三個指標。 (3) 塔板高度 。 各種色譜定性方法都是基于保留值的。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 （二）相對保留值法 相對保留值 α is 是指組分 i與基準物質(zhì) s調(diào)整保留值的比值 α is = tri ? / trS180。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 （四）保留指數(shù)定性法 retention index 保留指數(shù)又稱為柯瓦（ Kov225。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 信號 t?R(Z) t?R(i) t?R(Z+1) t 進樣 內(nèi)插法求 IiX示意圖 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 據(jù)此，可用內(nèi)插法求算保留指數(shù) IiX 。這種方式分離度不好，靈敏度不高，操作麻煩。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 ?（ 一）峰面積測量方法 峰面積是色譜圖提供的基本定量數(shù)據(jù)； 其測量的準確與否直接影響定量結(jié)果。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 校正因子分為： 絕對校正因子和相對校正因子。 若某組分質(zhì)量為 mi ，峰面積 Ai ，則 fi? Ai的數(shù)值與質(zhì)量為 mi的標準物質(zhì)的峰面積相等。 若文獻中查不到所需的 fi? 值，也可以自己測定。 歸一化法的 優(yōu)點 是簡單、準確，操作條件變化時對定量結(jié)果影響不大。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 2. 內(nèi)標法 當樣品各組分不能全部從色譜柱流出； 或有些組分在檢測器上無信號； 或只需定量分析某幾個出現(xiàn)色譜峰的組分； 常常采用內(nèi)標法。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 測定 相對校正因子最好是用色譜純試劑。 這就是歸一法求算 各組分百分含量的基礎 。 但要精確求出 fi值是比較困難的。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 （二）定量校正因子 色譜定量分析的依據(jù)是被測組分的量與其峰面積成正比。這些聯(lián)用儀器和技術(shù)已完全成熟 , 成為現(xiàn)代儀器分析的重要工具。 )lglglglg(1 0 0/)(/)1(/)(/)( ZttttIZRZRZRiRiX ??????YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 保留指數(shù)的物理意義 ： 它是與被測物質(zhì)具有相同調(diào)整保留時間 的假想的 正構(gòu)烷烴的碳數(shù)乘以 100。 它具有重現(xiàn)性好、標準統(tǒng)一及溫度系數(shù)小等優(yōu)點。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 相對保留值測定方法 ： 在某一固定相及柱溫下，分別測出組 分 i和基準物質(zhì) s的調(diào)整保留值；再用已求 出的相對保留值與文獻相應值比較即可定 性。 因此僅根據(jù)保留值對一個完全未知的樣品定 性是困難的（雙柱或多柱法）。 YANGTZE NORMAL UNIVERSITY 現(xiàn)代儀器分析 解 : (1) R=2()/(+)= (2)