植物組織培養(yǎng)技術(shù)ppt課件(完整版)
【正文】 ? 種類： VBl(鹽酸硫胺素 )、 VB6(鹽酸吡哆醇 )、 Vpp(煙酸 )、 Vc（抗壞血酸）、 VH(生物素 )、 VB11(葉酸 )、 VB12（鈷胺素 )等。 組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的 設(shè)計(jì)與主要設(shè)備 （二）各類玻璃器皿 鑷子：尖頭鑷子、槍形鑷子 剪子 解剖刀 接種針 鉆孔器 組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的 設(shè)計(jì)與主要設(shè)備 （三）器械用具 二 培養(yǎng)基及其配制 本節(jié)目的要求： (1)一般掌握培養(yǎng)基的種類、特點(diǎn)； (2)掌握基本培養(yǎng)基的配方； (3)一般掌握培養(yǎng)基的組成成分和適宜的劑量； (4)掌握培養(yǎng)基母液和常用培養(yǎng)基的配制方法； (5)熟練掌握培養(yǎng)基的滅菌方法； (6)一般掌握培養(yǎng)基的篩選辦法。 ?1972年， Carlson 通過(guò)兩個(gè)種的煙草原生質(zhì)體融合培養(yǎng)，獲得了 第一個(gè)體細(xì)胞雜交的雜種植株 。 ?1922年， Knudson 采用胚培養(yǎng)法獲得大量蘭花幼苗。該方法簡(jiǎn)單，易行，但養(yǎng)分分布不均，生長(zhǎng)速度不均衡，并常有褐化中毒現(xiàn)象發(fā)生。 即能被誘發(fā)產(chǎn)生無(wú)性增殖系的器官或組織切段。 一、什么是植物組織培養(yǎng) What Is Tissue Culture? Or in vitro culture? Or micropropagation? （一）概念： 器官（ an)：根、莖、葉、花、果實(shí)、種子 組織（ tissue)：花藥、胚珠、胚、胚乳、形成層等 植物組織培養(yǎng)（ Tissue culture） 是指用 無(wú)菌 方法使植物體的離體 （ in vitro)器官、組織和細(xì)胞在 人為提供的條件 下生長(zhǎng)和發(fā)育的所有培養(yǎng)技術(shù)的總稱，也稱之為離體培養(yǎng)（ In vitro culture）或試管培養(yǎng)。 ? 再分化（ redifferentiation):經(jīng)脫分化的組織或細(xì)胞在一定的培養(yǎng)條件下可轉(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N不同的細(xì)胞類型，形成完整植株的過(guò)程。 百合鱗葉培養(yǎng) 外植體器官發(fā)生途徑 愈傷組織 芽分化 再生苗 胚狀體 小麥 愈傷組織器官發(fā)生途徑 外植體 愈傷組織 芽 根 再生植株 脫分化 再分化 高生長(zhǎng)素 (1,2D) 高 (生長(zhǎng)素 /細(xì)胞分裂素 ) 低 (生長(zhǎng)素 /細(xì)胞分裂素 ) 器官發(fā)生途徑 愈傷組織 ?按培養(yǎng)材料分為（ Gamb等 )： 愈傷組織培養(yǎng) 器 官 培 養(yǎng) 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 原生質(zhì)體培養(yǎng) 最為常見(jiàn)的組織培養(yǎng) 懸浮細(xì)胞培養(yǎng) 單細(xì)胞培養(yǎng) 胚、胚乳、珠心、子房、根、莖、葉、花和幼果的部分組織的培養(yǎng) （三）、植物組織培養(yǎng)的類型 ?根據(jù)培養(yǎng)器官的不同： 葉培養(yǎng)、根培養(yǎng)、花藥培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng)、莖尖培養(yǎng)等 煙草 （三）、植物組織培養(yǎng)的類型 ?根據(jù)培養(yǎng)方式： 固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng) 固體培養(yǎng) ：將培養(yǎng)物放在含有瓊脂等固化劑的培養(yǎng)基表面進(jìn)行培養(yǎng)。 （三）、植物組織培養(yǎng)的類型 二、植物組織培養(yǎng)發(fā)展簡(jiǎn)史 萌芽階段 ： (從 20世紀(jì)初到 30年代中） ? 18381839年，德國(guó)科學(xué)家 Schleide 和 Schwann發(fā)表了細(xì)胞學(xué)說(shuō)，奠定了組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)。這是植物組織培養(yǎng)的第二個(gè)突破。 植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室 構(gòu)建及操作技術(shù) 植物組織培養(yǎng)學(xué) 本節(jié)教學(xué)目的與要求： ? (1)掌握組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)； ? (2)掌握組織培養(yǎng)常用的實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備及其使用方法； ? (3)掌握調(diào)控組織培養(yǎng)的主要環(huán)境條件。 培養(yǎng)基及其配制 有機(jī)化合物 (anic pound) ?最常用的碳源是蔗糖 ， 葡萄糖和果糖也是較好的碳源 。 （ 3）肌醇 培養(yǎng)基及其配制 ? 作用 ：是很好的有機(jī)氮源，可直接被細(xì)胞吸收利用。 ③抑制根的分化 。時(shí)間過(guò)久，瓊脂變褐，也會(huì)逐漸喪失凝固能力。 ? 它的顆粒大小決定著吸附能力：粒度越小，吸附能力越大；溫度低吸附力強(qiáng)，溫度高吸附力減弱，甚至不吸附。 三、培養(yǎng)基的種類、配方及特點(diǎn) 培養(yǎng)基及其配制 根據(jù)態(tài)相不同：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基 根據(jù)培養(yǎng)物培養(yǎng)過(guò)程：初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基 根據(jù)作用不同：誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、 生根培養(yǎng)基 根據(jù)營(yíng)養(yǎng)水平：基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基、 改良培養(yǎng)基。H2O ZnSO4 （三）常用的培養(yǎng)基及特點(diǎn) 培養(yǎng)基及其配制 White培養(yǎng)基： 1943年由 White為培養(yǎng)番茄根尖而設(shè)計(jì)的 。 特點(diǎn)： 是有機(jī)成分較復(fù)雜，它包括了所有的單糖和維生素。 配制生長(zhǎng)素類： 可先用少量 NaOH或95%酒精助溶 。7H2O 100 860 CoCl在 108kPa的壓力 下，鍋內(nèi) 溫度達(dá) 121℃ 。 ? 高壓滅菌的原理： 在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸氣不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。然后加負(fù)選擇劑，可殺死生長(zhǎng)分裂細(xì)胞，保留不能生長(zhǎng)的突變細(xì)胞。 ? 植物體細(xì)胞雜交：指將植物不同種、屬或科間的體細(xì)胞原生質(zhì)體通過(guò)人工方法誘導(dǎo)融合形成雜種細(xì)胞，然后進(jìn)行離體培養(yǎng)使其再生成植株的技術(shù)。 植物抗病細(xì)胞突變體篩選 突變體的分離 突變體的 4個(gè)特征： 突變體以低頻率發(fā)生 離開(kāi)選擇壓，突變體穩(wěn)定 植株再生后，突變細(xì)胞系穩(wěn)定，從再生植株發(fā)生的愈傷組織，表達(dá)其被選擇出的表現(xiàn)型 選擇出的表現(xiàn)型能通過(guò)有性傳遞保證它是突變的。在此蒸氣溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。 培養(yǎng)基及其配制 將鍋內(nèi)空氣完全排除后，關(guān)閉放氣閥。5H2O 100 25 H3BO3 100 620 Na2MO4 配制
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