【正文】 肝癌的治療水平具有重要意義。申請人首次證實(shí)Tcad基因在腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤C6細(xì)胞中的腫瘤抑制基因功能，并揭示其分子機(jī)制。經(jīng)費(fèi)申請表 （金額單位：萬元）科目申請經(jīng)費(fèi)備注（計(jì)算依據(jù)與說明）（1）測試/計(jì)算/分析費(fèi)統(tǒng)計(jì)分析及數(shù)據(jù)處理費(fèi)（2）能源/動力費(fèi)水電費(fèi)（3）會議費(fèi)/差旅費(fèi)參加國內(nèi)學(xué)術(shù)會議45人次（4）出版物/文獻(xiàn)/信息傳播費(fèi)論文準(zhǔn)備及發(fā)表（5）其它（1）原材料/試劑/藥品購置費(fèi)購置各種抗體、脂質(zhì)體（2）其它購買氚標(biāo)胸腺嘧啶、去甲基化試劑、合成引物（1）購置購買小型冰凍切片機(jī)、動物解剖器材及消耗性器材（2）試制各種常規(guī)試劑建立動物解剖工作臺及同位素實(shí)驗(yàn)專區(qū)委托動物中心維持約100只裸鼠約1年的飼養(yǎng)及管理；流試細(xì)胞儀分析參加國際會議一次邀請Gutmann教授來院指導(dǎo)課題進(jìn)展及專題講座23次合 計(jì)與本項(xiàng)目相關(guān)的其他經(jīng)費(fèi)來源國家其他計(jì)劃資助經(jīng)費(fèi)其他經(jīng)費(fèi)資助（含部門匹配）其他經(jīng)費(fèi)來源合計(jì) 報(bào)告正文（一）立項(xiàng)依據(jù)與研究內(nèi)容項(xiàng)目的立項(xiàng)依據(jù)原發(fā)性肝癌是高度惡性的腫瘤，盡管采取積極手術(shù)治療，但絕大多數(shù)病人仍難免死于腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移，其死亡率高居我國腫瘤死亡率的第二位。將Ecadherin分子重新導(dǎo)入缺失Ecadherin分子表達(dá)的腫瘤細(xì)胞，則腫瘤細(xì)胞的增殖及侵犯能力顯著受抑（11）。 Riou （2002）對位于染色體16q24的13個(gè)常常在肝癌中缺失表達(dá)的基因的轉(zhuǎn)錄研究發(fā)現(xiàn)，Tcadherin mRNA在HepG2, PLC/PRF/C, TONG 和HA22TNGH四種肝癌細(xì)胞株中缺失表達(dá)，但Tcadherin基因本身并未發(fā)生缺失突變（12）。在肝癌細(xì)胞株及裸鼠肝癌模型上證實(shí)是否去甲基化藥物能重新誘導(dǎo)Tcadherin分子表達(dá)，并抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征，觀察其潛在的治療作用和可能的毒副作用。，揭示Tcadherin基因表達(dá)水平（失活）與肝癌惡性分化程度、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移（包括合并門靜脈癌栓和衛(wèi)星灶形成）的關(guān)系。采用Herman已報(bào)導(dǎo)的檢測Tcadherin啟動子甲基化和非甲基序列的引物，進(jìn)一步證實(shí)Tcadherin在上述肝癌細(xì)胞株中的啟動子甲基化現(xiàn)象。但目前尚無人對Tcadherin在肝癌中的基因功能及其分子機(jī)制進(jìn)行研究。證實(shí)是否Tcadherin抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征。該文發(fā)表于Oncogene 2002, 21:13251334（影響因子 ）。2 \前期關(guān)于Tcadherin研究的基礎(chǔ)工作：圖1. 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤C6細(xì)胞轉(zhuǎn)染Tcadherin基因后細(xì)胞增殖受抑。且其增殖受抑的程度與Tcadherin的表達(dá)水平成正相關(guān)。*表示有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。、S和G2/M期的細(xì)胞分布，過表達(dá)Tcad的TT9克隆于G2/M期細(xì)胞數(shù)顯著高于不表達(dá)Tcad的C6細(xì)胞克隆VV3。（V2克?。┡c轉(zhuǎn)染Tcadherin基因后表達(dá)Tcadherin的C6細(xì)胞（T3克隆）經(jīng)無血清培養(yǎng)同步化后，以含10%血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)0、124和48小時(shí)后測定細(xì)胞分裂指數(shù)。但Tcadherin的過表達(dá)與P27Kip1表達(dá)無直接相關(guān)性。 3(4): 302 Zhiyong, et al. Identification of additional genetic events associated with neurofibromatosis 1(NF1) pilocytic astrocytoma pathogenesis. NeuroOncology, 2001。簽字和蓋章頁(此頁自動生成,打印后簽字蓋章) 申 請 者： 依托單位：華中科技大學(xué) 項(xiàng)目名稱：Tcadherin基因失活與原發(fā)性肝癌惡性生物學(xué)特征的關(guān)系及其臨床意義 資助類別：面上項(xiàng)目 亞類說明：自由申請項(xiàng)目 附注說明： 申請者承諾： 我保證申請書內(nèi)容的真實(shí)性。依托單位公章 合作單位公章1 合作單位公章2 日期： 日期： 日期： 。若填報(bào)失實(shí)和違反規(guī)定，本人將承擔(dān)全部責(zé)任。 4(4): 313 zhiyong, et al. A novel cadherin moleculer functions as an astrocytoma tumor suppressor, Neurooncology, 2002。，但不能抑制缺失P21CIP1/WAF1的3T3細(xì)胞的增殖。，G2/M期細(xì)胞的百分比分別與在124和48小時(shí)測定的分裂指數(shù)一致。（R2=）。*表示有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而轉(zhuǎn)染空載體pcDNA3的C6細(xì)胞不表達(dá)Tcadherin。同時(shí)，探索研究新基因如Tcadherin和GAP43基因?qū)δX膠質(zhì)細(xì)胞瘤生長、轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，首次發(fā)現(xiàn)Tcadherin和GAP43是兩個(gè)重要的參與腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤生長調(diào)控的基因，并揭示其調(diào)節(jié)機(jī)制。 在臨床切除的肝癌標(biāo)本中研究Tcadherin基因失活與肝癌惡性分化程度、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，揭示Tcadherin的腫瘤抑制基因功能失活與臨床肝癌的惡性生物學(xué)特征及預(yù)后的關(guān)系。2. Cadherin分子，如E，Ncadherin分子缺失或突變與多種腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移特征密切相關(guān)，但目前對Tcadherin基因失活與肝癌的侵犯及轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特征的關(guān)系目前尚無研究，該研究具有先進(jìn)性和獨(dú)創(chuàng)性。 采用Western blot進(jìn)一步證實(shí)Tcadherin在上述存在的啟動子甲基化肝癌細(xì)胞株中蛋白水平表達(dá)缺失。三、在肝癌細(xì)胞株和裸鼠肝癌種植模型上證實(shí)去甲基化藥物5aza2’deoxycytidine是否能重新誘導(dǎo)Tcadherin表達(dá)，并抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征，觀察其對肝癌的治療價(jià)值和可能的毒副作用。主要參考文獻(xiàn)：1. Angst BD, Marcozzi C and Magee AI. The cadherin superfamily: diversity in form and function. J Cell Sci., 2001, 114:6296412. Kemler R. Classic cadherins. Semin. Cell Biol., 1992,3:1491553. Koller E, Ransch B. Differential targeting of T and Ncadherin in polarized epithelial cells. J Biol Chem.,1996,271:30061300674. Takeichi cell adhesion receptor as a morphogenetic regulator. Science 1991,251:145114555. Angst, ., Marcozzi, c., and Magee, . The Tcadherin superfamily: diversity in from and function. Sci 2001, 114:6296416. Berx, G., and. Van Roy, F.. The Ecadherin/catenin plex: an important gatekeeper in breast cancer tumorigenesis and malignant progression. Breast Cancer Res. 2001, 3:289293. 7. Bremnes, R. M., Veve R., Gabrielson, E. et al. Highthroughput tissue microarray analysis used to evaluate biology and prognost