【正文】 s in vivo. Oncogene, 2002,21:13251334 （影響因子 ） H. Gutmann, Huang Zhiyong, Nicole , Hao Ding, Abhijit Guha and Mark A. Watson. Mouse glioma gene expression profiling identifies novel human glioma associated genes. Annals of Neurology, 2002,51:393405 （影響因子 ） H. Gutmann, Hirbe,., and Huang zhiyong and Carrie . The protein tumor suppressor, DAL1, impairs cell molotity, but regulates proliferation in a celltypespecific fashion. Neurobiology of disease 8,266278 （影響因子 ） Chen, Zaide Wu, Zhiyong Huang and Fazu Qiu .The use of hepatectomy and splenectomy to treat hepatocellular carcinoma with cirrhotic hypersplenism. British Journal of Surgery 2004。本院肝臟外科中心擁有床位78張，具有收集足夠病例完成臨床研究的能力和條件。編號(hào)姓 名工作單位名稱項(xiàng)目分工每年工作時(shí)間(月)簽 字1 2 3 4 5 6 7 8 9 依托單位及合作單位承諾： 已按填報(bào)說明對(duì)申請(qǐng)人的資格和申請(qǐng)書內(nèi)容進(jìn)行了審核。如果獲得基金資助，我將嚴(yán)格遵守國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)的有關(guān)規(guī)定，切實(shí)保證研究工作時(shí)間，加強(qiáng)合作、信息資源共享，認(rèn)真開展工作，及時(shí)向項(xiàng)目負(fù)責(zé)人報(bào)送有關(guān)材料。肝癌發(fā)病的分子機(jī)制及綜合治療一直是我科的重點(diǎn)研究項(xiàng)目，已發(fā)表研究論文三百余篇。，無論其是否表達(dá)P53。*表示有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P）。、124和48小時(shí)后，DNA含量測(cè)定。*表示有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。，Tcadherin過表達(dá)的C6細(xì)胞在Laminin包被的玻片上顯示良好的細(xì)胞伸展性。（P）。參加在美國(guó)和印度召開的國(guó)際會(huì)議3次，在研究基因功能與腫瘤惡性生物學(xué)特征的關(guān)系、腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制及治療研究領(lǐng)域積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)。預(yù)期研究成果：，在國(guó)內(nèi)權(quán)威期刊上發(fā)表論文810篇。但對(duì)應(yīng)用去甲基化藥物誘導(dǎo)Tcadherin表達(dá)并研究其對(duì)肝癌的治療學(xué)意義目前尚無研究。 采用細(xì)胞增殖計(jì)數(shù)、3H標(biāo)胸腺嘧啶攝取率測(cè)定、克隆增殖試驗(yàn)、細(xì)胞粘附試驗(yàn)和細(xì)胞聚集試驗(yàn)檢測(cè)Tcadherin表達(dá)前后肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征的變化。二、研究Tcadherin基因失活與臨床肝癌惡性分化程度、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系的技術(shù)路線a. 檢測(cè)Tcadherin表達(dá)： 定量PCR；免疫組織化學(xué)；Western blot ，研究Tcadherin缺失表達(dá)（基因失活）與人肝癌發(fā)生的關(guān)系。 的HepG2細(xì)胞于皮下接種裸鼠，在裸鼠肝癌模型上進(jìn)一步證實(shí)Tcadherin基因的腫瘤抑制基因功能。但目前對(duì)Tcadherin基因失活與肝癌惡性分化程度、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，以及應(yīng)用去甲基化藥物是否能誘導(dǎo)Tcadherin分子在肝癌細(xì)胞株中重新表達(dá)，并抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性特征全世界尚無研究報(bào)道。這一研究發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步研究Tcadherin分子在肝癌中的功能、分子機(jī)制及臨床意義奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。Tcadherin分子屬細(xì)胞粘附分子cadherin超家族。本研究將在肝癌細(xì)胞株進(jìn)一步研究Tcad基因失活與肝癌細(xì)胞的增殖及侵襲等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，并調(diào)查其分子機(jī)制；在臨床切除的肝癌標(biāo)本中研究Tcad基因失活與肝癌惡性分化程度、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，明確Tcad基因失活與臨床肝癌預(yù)后的關(guān)系；在肝癌細(xì)胞株和肝癌裸鼠模型上證實(shí)去甲基化藥物是否能重新誘導(dǎo)Tcad分子表達(dá)并抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲等惡性生物學(xué)特征，探索去甲基化藥物對(duì)肝癌的治療價(jià)值。說明: 2. 項(xiàng)目組主要成員不包括項(xiàng)目申請(qǐng)者。近年來對(duì)經(jīng)典的Cadherin分子的深入研究發(fā)現(xiàn)，E，Ncadherin分子缺失或突變與多種腫瘤如肝癌、胃癌、乳腺癌、肺癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移特征密切相關(guān)（6，7，8,9,10）。Tcadherin基因位于染色體16q24，肝癌的發(fā)生與染色體16q24的缺失、突變密切相關(guān)(25)。在臨床切除的肝癌標(biāo)本中研究Tcadherin基因失活與肝癌惡性分化程度、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，進(jìn)一步揭示Tcadherin基因失活與臨床肝癌預(yù)后的關(guān)系。二、 在臨床切除的肝癌標(biāo)本中研究Tcadherin基因失活與肝癌惡性分化程度、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，在人肝癌中揭示Tcadherin基因失活與肝癌的惡性生物學(xué)特征及預(yù)后的關(guān)系。, PLC/PRF/C, TONG 和HA22TNGH中缺失。 申請(qǐng)人（黃志勇）最新研究首次證實(shí)Tcadherin在大鼠腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的腫瘤抑制基因功能，并首次揭示其腫瘤抑制功能的分子機(jī)制（Huang Zhiyong等，Molecular and Cellular Biology 2003,23:566578）。年度研究計(jì)劃及預(yù)期研究成果研究計(jì)劃及進(jìn)度： 在肝癌細(xì)胞株和裸鼠肝癌模型上研究Tcadherin在肝癌中的基因功能。首次利用GFAP啟動(dòng)子成功地建立了腦膠質(zhì)細(xì)胞特異性CDK4基因過表達(dá)的動(dòng)物模型，并揭示了CDK4過表達(dá)與P53基因缺失對(duì)腦膠質(zhì)細(xì)胞增殖的協(xié)同作用。這一研究發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步研究Tcadherin分子在肝癌中的作用、功能及臨床意義奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。，與轉(zhuǎn)染空載體的VV3克隆相比，TTT13克隆的細(xì)胞增殖顯著受抑。，Tcadherin過表達(dá)的C6細(xì)胞在Boyden Chamber中的纖移能力顯著下降。箭頭顯示2N（G1），4N（G2/M）和8N DNA的位置。黃志勇等,Molecular and Cellular Biology,23:566578圖7. 分裂指數(shù)分析顯示Tcadherin過表達(dá)誘導(dǎo)C6細(xì)胞于細(xì)胞周期G2期阻滯。 blot顯示過表達(dá)Tcadherin的C6細(xì)胞克隆TT9和T13細(xì)胞的P21CIP1/WAF1表達(dá)顯著升高，且P21CIP1/WAF1的表達(dá)水平與Tcadherin的表達(dá)水平成正相關(guān)。91(3):322326（影響因子 ） Zhiyong, et al. Transgenic mouse modeling of the chromosome 12Q13Q15 amplification in astrocytoma pathogenesis. Neurooncology 2001。以上各項(xiàng)為我們完成本課題打下良好基礎(chǔ)。申請(qǐng)項(xiàng)目如獲資助，我單位保證對(duì)研究計(jì)劃實(shí)施所需要的人力、物力和工作時(shí)間等條件給予保障，嚴(yán)格遵守國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)有關(guān)規(guī)定，督促項(xiàng)目負(fù)責(zé)人和項(xiàng)目組成員以及本單位項(xiàng)目管理部門按照國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)的規(guī)定及時(shí)報(bào)送有關(guān)材料。 簽字： 項(xiàng)目組主要成員承諾： 我保證有關(guān)申報(bào)內(nèi)容的真實(shí)性。 4(4): 31311. Angela Hirbe, Carrie Haipek, Huang zhiyong. DAL1 is a protein tumor suppressor for leptomeningeal cells. Abstract for 92nd annual meeting, American Association for Cancer Research, 2001, New Orleans, LA工作條件 我院普通外科是國(guó)家重點(diǎn)學(xué)科，長(zhǎng)期以來又以肝臟外科為重點(diǎn)，在裘法祖、吳在德、陳孝平教授的領(lǐng)導(dǎo)下已培養(yǎng)出碩士、博士研究生60余名。*表示有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P）。而T