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工業(yè)微生物育種誘變劑(2)(完整版)

2025-02-18 22:20上一頁面

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【正文】 甲基磺酸甲酯 亞硝基乙基脲 7甲基鳥嘌呤 3甲基腺嘌呤 O6甲基鳥嘌呤 ? 烷化劑的誘變機(jī)制 —— 烷化劑主要使通過烷化基團(tuán)使 DNA分子上的堿基及磷酸部分烷化, DNA復(fù)制時導(dǎo)致堿基配對錯誤而引起突變。 22 2. 羥化劑 ? 羥胺( hydroxylamine)是典型的羥化劑 ? 羥胺的分子式為 NH2OH(簡稱 HA) ,常以鹽酸羥胺形式存在(分子式為 NH2OH于 25— 26℃ 保溫 10—20min,加入 、 20ml,使pH下降至 ,以終止反應(yīng)。 ?細(xì)菌采用對數(shù)期的細(xì)菌,霉菌、放線菌采用孢子,但要進(jìn)行前培養(yǎng),使孢子處于萌動狀態(tài),并要加大 5BU的濃度,處理過程要進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。 ? 誘變劑 mutagen : 凡是能誘發(fā)生物基因突變,且突變頻率遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過自發(fā)突變率的物理因子或化學(xué)物質(zhì) 。 ? 陸續(xù)發(fā)現(xiàn)許多物理因子與化學(xué)物質(zhì)都具有誘發(fā)基因突變的作用。 1. 2. 6 ? 在 DNA復(fù)制過程中取代正常堿基,整合進(jìn)DNA分子 ? 它們產(chǎn)生異構(gòu)體的頻率高,出現(xiàn)堿基錯配的概率也高 堿基類似物是如何提高突變頻率的 ? (一)堿基類似物的誘變機(jī)制 —— 現(xiàn)以 5BU為例來分析堿基類似物的誘變機(jī)制。因此,堿基類似物也是一種輻射誘變的增敏劑。取一定量進(jìn)行后培養(yǎng)— 2h。 ? 羥胺的處理方法: 常用濃度為 — 5%,可直接在溶液中處理,時間 1— 2h,然后分離培養(yǎng)。因此,由這些位點改變所引起的突變僅是少數(shù)。因此,化學(xué)誘變劑要現(xiàn)用現(xiàn)配。其中處理細(xì)菌、放線菌等微生物時,不經(jīng)淘汰,就可以直接得到 10%以上的營養(yǎng)缺陷型突變株。使用時取母液 ,加菌懸液 , NTG最后處理濃度為 100μ g/ml。 42 ? 甲基磺酸乙脂 ( EMS) 使 G的第 6位烷化 , 使 T的第 4位上烷化 , 結(jié)果產(chǎn)生的 O6EG和 O4ET分別和 T、 G配對 , 導(dǎo)致 G∶C 對轉(zhuǎn)換成 A∶T 對; T∶A 對轉(zhuǎn)換成 C∶G G O 6 E G A T O 4 E T C C T T A G G43 三、移碼誘變劑 ? 是一類能夠嵌入到 DNA分子中的物質(zhì) ? 吖啶類染料( acridine dye)、溴化乙錠( ethidium bromide)和一系列 ICR類化合物 溴化乙錠( EtBr) 由美國的腫瘤研究所合成,故名。 ? 重視化學(xué)誘變劑的操作安全 化學(xué)誘變劑多數(shù)是極毒的致癌藥品,在進(jìn)行誘變操作后的處置以及誘變劑的保藏等方面的安全防護(hù)都是及其重要的。 55 二、電離輻射( X射線和 γ 射線) ? X射線波長是 ~136納米, X射線一般由 X光機(jī)產(chǎn)生。 作業(yè): 。 56 電離輻射誘變機(jī)理 ? 直接作用:打斷化學(xué)鍵 ? 間接作用:通過自由基打斷化學(xué)鍵,引起缺失和損傷 效應(yīng):染色體畸變,堿基置換,移碼突變 ? ? 57 三、快中子 ? 中子可以從回旋加速器、靜電加速器或原子反應(yīng)堆中產(chǎn)生 ? 快中子具有的能量最高,為 ~10MeV ? 快中子的應(yīng)用:可將放在安瓿管中的菌懸液或長在平皿上的菌落置射線源一定距離處進(jìn)行處理 用 10~30krad的劑量進(jìn)行處理,控制致死率為 50~85%,產(chǎn)生的正突變率可達(dá) 50% 58 四、離子注入 ? 一種較為新型的物理誘變手段 ? 離子注入的質(zhì)量、電荷、能量參數(shù)可以按需要進(jìn)行不同組合,可使誘變具有較高的方向性和可控性 ;產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)比單一輻射更為豐富。 ?使用化學(xué)誘變劑一般要求避光、密封、低溫、干燥等; ?盡可能不觸及人體任何部位; ?對殘余物要及時進(jìn)行消毒、稀釋處理。 44 移碼突變劑的誘變機(jī)理 B嵌入到舊鏈上導(dǎo)致插入突變 A嵌入到新合成鏈上導(dǎo)致缺失突變 ? 移碼誘變劑的嵌入并不導(dǎo)致突變,必須通過 DNA的復(fù)制才形成突變,因此這類誘變劑只能作用于生長態(tài)的細(xì)胞。 NTG溶液混合于一試管內(nèi),置該菌生長適宜的溫度下保溫處理若干時間。
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