工業(yè)微生物育種誘變劑(2)(存儲版)
【正文】 沉淀懸浮并作成一定稀釋度分離于平皿。 通常在 。 烷化劑名稱 理化特性 pH7水中半衰期 /h 分子量 狀態(tài) 水溶性 溶點(diǎn)或沸點(diǎn) 20℃ 30℃ 37℃ 甲基磺酸乙酯 (EMS) 無色液體 約 8% 沸點(diǎn)85~86℃/10mmHg 93 26 124 乙烯亞胺 (EI) 無色液體 易溶于水 沸點(diǎn) 56℃/760mmHg 43 亞硝基乙基脲 (NEU) 粉紅色液 約 5% 沸點(diǎn) 53℃/5mmHg 84 117 亞硝基甲基脲 (NMU) 黃色固體 35 103 硫酸二乙酯 (DES) 無色油狀 物 不易溶 1 亞硝基胍 (NTG) 黃色固體 熔點(diǎn) 118℃ 烷化劑的某些性質(zhì) ? 幾種常用的烷化劑： 1甲基 3硝基 1亞硝基胍（簡稱亞硝基胍， NTG或 NG或MNNG） ? 為黃色結(jié)晶狀物質(zhì)，性質(zhì)不穩(wěn)定，遇光易分解，放出 NO，顏色由黃色變?yōu)榫G色，誘變效應(yīng)降低。 由于烷基化后的鳥嘌呤，易離子化，由原來的酮式變?yōu)椴环€(wěn)定的烯醇式，不能和胞嘧啶配對，而是與胸腺嘧啶錯誤配對，結(jié)果發(fā)生 G:C—— A:T轉(zhuǎn)換而導(dǎo)致突變。 ? 堿基中容易發(fā)生烷化作用的是嘌呤類。HCl），為白色晶體，溶于水，不穩(wěn)定易分解，具腐蝕性，容易吸濕，故要密封、干燥保存。稀釋分離于平板。 12 2氨基嘌呤（ 2AP） ? 比較容易誘發(fā) AT→GC這一轉(zhuǎn)換 13 A 2 A P 2 A P * GT T C C（二）堿基類似物的誘變處理方法（以 5BU為例） 5BU是白色結(jié)晶粉末，能溶于水或乙醇。 ? 誘變劑種類： 化學(xué)誘變劑、物理誘變劑和生物誘變劑 4 第一節(jié) 化學(xué)誘變劑 ? 定義： 一類能對 DNA起作用，改變 DNA結(jié)構(gòu)，并引起遺傳變異的化學(xué)物質(zhì)。 ? 在第二次世界大戰(zhàn)中，又發(fā)現(xiàn)化學(xué)物質(zhì)氮芥也能導(dǎo)致細(xì)菌性狀變異，其效應(yīng)與 X射線相類似。 ? 主要誘變劑 ： 5溴尿嘧啶（ 5BU） /T 2氨基嘌呤（ 2AP） /A ? 誘發(fā)的突變 ： AT GC的 轉(zhuǎn)換 。 據(jù)報道，如果菌體先用 5BU等堿基類似物進(jìn)行處理，使它們首先滲入到 DNA分子中，然后用輻射線照射，誘變效果會比單獨(dú)使用輻射線更好。于 35— 37℃ 處理 5— 10min、加入 5倍的 酸氫二鈉溶液，使 pH下降到 。 ? 由于羥胺是誘發(fā) G:C A:T的專一性誘變劑，因此，可以用來鑒別突變體是 A:T G:C還是 G:C A:T轉(zhuǎn)換。這些位點(diǎn)引起堿基置換的僅占烷化作用的 10%左右。 —— 它們大部分半衰期很短，其長度與溫度、溶液 pH關(guān)系很大。 ? NTG有超誘變劑之稱，能使細(xì)胞發(fā)生一次或多次突變，誘變效果好，尤其適合于誘發(fā)營養(yǎng)缺陷型突變株。 如果采用細(xì)菌細(xì)胞或絲狀菌孢子（真菌或放線菌）須進(jìn)行前培養(yǎng)，可用有關(guān)培養(yǎng)基代替以上緩沖液，孢子培養(yǎng)時間控制在大部分孢子處在萌動階段，經(jīng)離心、洗滌，用緩沖液制成懸液，濃度約在106107ml1； NTG的誘變處理方法： NTG母液： 由于 NTG不溶于水，配制需加助溶劑甲酰胺或丙酮少許，然后加緩沖溶液，其比例為 9： 1（緩沖溶液 9ml： NTG丙酮溶液 1ml），一般 NTG母液濃度配成1mg/ml。凡接觸過 NTG的器皿必須及時、單獨(dú)處理，例如用自來水大量沖洗或用 1—2mol/L的 NaOH或 2%的 Na2S2O3浸泡過夜，洗凈。而且還要注意介質(zhì)的 pH值。 作用機(jī)理 嘧啶二聚體、嘧啶水合物、交聯(lián)作用、 DNA鏈斷裂 ? 效應(yīng)： 移碼突變，堿基置換 51 紫外線誘發(fā)胸苷二聚體 O O U V O O H C H 3 H C H 3 H C H 3 C H 3 H N
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