【正文】 14 Y4 35 M7 15 Y5 36 M8 16 Y6 37 M9 17 Y7 38 M10 18 Y8 39 M11 19 Y9 40 M12 20 Y10 41 M13 21 Y11 42 M14 菌株鑒定 菌落形態(tài)及菌體形態(tài)觀察 一共分離純化得 42 株菌，其中乳酸菌 10 株，酵母菌 18 株，霉菌 14 株。 （ 2）初步篩得 42 株菌，其中乳酸菌 10 株，酵母菌 18 株，霉菌 14 株。 （ 7） 16S rDNA 序列分析 將測(cè)序公司發(fā)回的序列 通過 NCBI 網(wǎng)站 用 BLAST 程序進(jìn)行序列同源性分析。 酶活力 (U/g或 U／ mL)=x﹒ v﹒ n/(t﹒ m) 式中： x為反應(yīng)液中的氨基酸含量； v為反應(yīng)試劑的總體積， 3 mL； n為酶液的稀釋倍數(shù)； t為反應(yīng)時(shí)間， 10 min； m為酶質(zhì)量或酶體積， g 或 mL。吸取 1mg/mL 賴氨酸標(biāo)準(zhǔn)液 10mL，用 酸稀釋定容至 100ml，即為 100μg/mL的賴氨酸標(biāo)準(zhǔn)液。 （ 3）呂 氏堿性美藍(lán)染色液 : A 液：美藍(lán) ； 95%乙醇 30mL。 （ 4） LB 培養(yǎng)基：胰蛋白胨 %， NaCl %，酵母提取物 %，蒸餾水定容，PH 調(diào)至 ， 121℃ 蒸汽滅菌 20min。7H2O， MnSO4除此之外還有總酚含量、還原力、 DPPH自由基清除能力 和 ABTS自由基清除能力等都可以作為指標(biāo)，可以系統(tǒng)的考察微生物酵素的抗氧化活力 [43]。此外，酵素具有分解老化細(xì)胞、清潔皮膚、淡化皺紋、消除青春痘、徹底改善肌膚狀況等美容功效，還有去除油脂等減肥作用。 益生菌存在的問題 益生菌的作用已被人們接受，其在發(fā)酵食品或食品添加劑有許多的應(yīng)用，但也存在許多有待解決的問題，如 :① 目前已經(jīng)確認(rèn)的適宜的益生菌菌種不多，僅有乳酸桿菌、鏈球菌、芽抱桿菌、雙歧桿菌及酵母等種屬； ② 一些產(chǎn)品中的益生菌在加工、運(yùn)輸過程中易失活；③ 有些活菌 難以 經(jīng)受低 PH 值的胃酸、膽汁酸及胰液等的作用，數(shù)量 少， 難以發(fā)揮作用；④ 關(guān)于益生菌在體內(nèi)的作用 機(jī)理的還不明確，許多學(xué)說相互矛盾。 有研究表明向干酪中添加糞腸球菌， 有保健作用 的同時(shí) ，還 可 改善 其 品質(zhì) [40]。目前國內(nèi)外益生菌的應(yīng)用主要有以下幾方面。 預(yù)防陰道感染 酸牛奶中的嗜酸乳桿菌可抑制陰道內(nèi)白色念珠菌的繁殖?？茖W(xué)研究表明，益生菌對(duì)宿主細(xì)胞免疫系統(tǒng)具有正面作用如增強(qiáng)抵抗力。 促進(jìn)腸道消化系統(tǒng)健康 許多益生菌可在胃腸道內(nèi)產(chǎn)生消化酶，這些酶 可使 人體更好地消化 食物 及其營養(yǎng)成分。分離鑒定酵母菌，可以為研究酵母菌在酵素等產(chǎn)品發(fā)酵過程中的生物特性的研究提供了一定的基礎(chǔ) [25]。 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的益生菌分別是雙歧桿菌類：長雙歧桿菌 、短雙歧桿菌 、 嗜熱雙歧桿菌等，乳酸桿菌類：短乳桿菌、保加利亞乳桿菌、嗜酸乳桿菌等，鏈球菌類： 嗜熱鏈球菌屬 等。 但其 主要來源是動(dòng)物腸道正常生理性菌和非腸道菌。后來 Fuller [15]、 Guarner[12]等 人也提出了差不多的定義。普通動(dòng)物與無菌動(dòng)物之間 存在著許多 差異 ，這 使人們認(rèn)識(shí)到微生物 對(duì)人 體 的健康有著重要的意義 [7]。 （ 3）將 L Y14 參考徐祖炎的專利制作成酵素， 20 天后測(cè)得實(shí)驗(yàn)組的蛋白酶活力為，對(duì)照組的蛋白酶活力為 。它 是 定植于人體腸道、生殖系統(tǒng)內(nèi)，能改善宿主微生態(tài)平衡、發(fā)揮有益作用的活性有益微生物的總稱。文中引用 他人研究成果的 部分已 在 標(biāo)注 中 說明 ； 其他同志對(duì)本設(shè)計(jì)（ 論文 ）的啟發(fā)和貢獻(xiàn)均已在 謝辭 中 體現(xiàn)；其它內(nèi)容及成果為本人獨(dú)立 完成 。 本論文從酸奶、酒、酒曲和自制酵素樣品中篩選出益生菌，以蛋白酶活力為指標(biāo)，篩 出酶活高的菌株，并對(duì)其在酵素中的應(yīng)用進(jìn)行初步探究。s yeast and homemade enzyme are took as the sample, then the sample dilution are coated on the red culture medium MRS, PDA and Bangladesh to enrich and be separated, preliminary we got 42 screening isolates, and they are numbered and preserved. After that, strain is purified again and observed with microscope. 18 kinds of morphological characteristics of different strains are screened out after a second screening. There are two kinds of lactic acid bacteria, 11 kind of yeast and five types of mold in total. （ 2） 42 strains of bacteria got in the early screening are put in the protease activity test of lactic acid bacteria. The highest enzyme activity of lactic acid bacteria, yeast and the mold of strains respectively are L4, Y14 and M14. And protease activity respectively are U/mL and U/mL and U/ mL. And L4 is identified as Streptococcus thermophilus according to the molecular biological and physiological and biochemical identification. （ 3） With the reference to Xu Zuyan’s patent, L4 and Y14 are made into enzyme. After 20 days, the protease activity of the experimental group are measured to be U/mL and protease activity to be U/mL in the control group. Preliminary it shows that L4 and L14 can improve the index of protease activity of enzyme, promote the enzyme fermentation as well as improve the functionality of the enzyme. Key words: Probiotics, Screening, Lactic acid bacteria, Yeast, Mold, Appraisal, Enzyme III 目 錄 第 1 章 緒論 ................................................................................................................................... 1 益生菌概述 ....................................................................................................................... 1 益生菌理論的產(chǎn)生 ................................................................................................. 1 益生菌的定義 ......................................................................................................... 1 益生菌作用基本機(jī)理概述 ..................................................................................... 1 益生菌的來源 ......................................................................................................... 2 益生菌的特征 ......................................................................................................... 2 益生菌的種類 ......................................................................................................... 2 益生菌的作用 ......................................................................................................... 3 益生菌的應(yīng)用 ................................................................................................................... 4 益生菌食品 ............................................................................................................. 4 益生菌保健品 ......................................................................................................... 5 益生菌存在的問題 ........................................................................................................... 5 酵素 ................................................................................................................................... 6 酵素的定義、作用及應(yīng)用 ..................................................................................... 6 評(píng)價(jià)微生物酵素的指標(biāo) ......................................................................................... 6 本課題主要研究的內(nèi)容和意義 ....................................................................................... 6 研究內(nèi)容 .................................................................................................................. 6 本課題研究的意義 ................................................................................................. 7 第 2 章 實(shí)驗(yàn)材 料與方法 ............................................................................................................... 8 材料與主要設(shè)備 ............................................................................................................... 8 實(shí)驗(yàn)材料 ................................................................................................................. 8 培養(yǎng)基 ....................................................................................