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正文內(nèi)容

sds聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量(完整版)

  

【正文】 原理 ? 聚丙烯酰胺凝膠 是由丙烯酰胺和交聯(lián)試劑 N,N’甲叉雙丙烯酰胺在有引發(fā)劑(如過(guò)硫酸銨)和增速劑(如 N,N,N’,N’四甲基乙二胺, TEMED)的情況下聚合而成的。 ? 帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì) SDS復(fù)合物由于結(jié)合了大量的 SDS,使蛋白質(zhì)喪失了原有的電荷狀態(tài),形成了僅保持原有分子大小為特征的負(fù)離子團(tuán)塊,從而降低或消除了各種蛋白質(zhì)分子之間天然的電荷差異。對(duì)于垂直板型電泳,一般樣品進(jìn)膠前電流控制在 15~ 20mA,大約 15~ 20分鐘;樣品進(jìn)膠后,將電流調(diào)到 40~ 50mA,保持電流強(qiáng)度不變。 有兩種染色液可供選擇 。 一天換 2~ 3次脫色液 , 直至凝膠的藍(lán)色背景褪清 、 蛋白質(zhì)色帶清晰為止 。 ? 剝膠和固定:電泳結(jié)束后,取下凝膠膜,卸下凝膠膜上的橡膠框,用鑷子將短板玻璃撬開(kāi)后取出凝膠板。 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的分子量在 15,000~ 200
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