【正文】 表 24 正交實驗因素水平表 水平 因素 20 乙醇體積分?jǐn)?shù) (A) % 溫度 (B) ℃ 料液比 (C) g:mL 浸提時間 (D h 1 65 70 1:20 2 75 80 1:25 3 85 90 1:30 表 25 L9(34)正交表 A B C D 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 實驗過程中主要事項 (1) 決明子粉碎粒度要均勻，使用前要經(jīng)過一定的干燥處理。 3. 決明子中總黃酮的提取及測定 準(zhǔn)確稱取 ，按照設(shè)計的配方加入一定量的提取劑，在一定溫度下回流提取一定時間，趁熱減壓抽濾，濾渣加適量水洗滌、過濾．合并清液后得提取液，再蒸餾，回收溶劑至近干，再按照 2中的步驟配置待測液，以下按照測定蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液吸光度的方法測定吸光度 A，計算黃酮提取率 [19]。準(zhǔn)確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液 0mL、 、 、 、 、 10mL容量瓶中，加入 5%NaNO2液 ，搖勻，放置 6min后加入 10%Al(N03)3溶液 ，搖勻，放置 6min后加入 4%NaOH溶液 ，再用 30%乙醇定容，搖勻，以 30%乙醇為空白參比 ， l0min后用 lcm比色皿于 510nm測定吸光度 A，得到蘆丁標(biāo)樣含量 Y(μg/mL)與吸光度 A間的關(guān)系，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線 [17]。黃酮類化合物的羥基糖苷元化后，水溶解度較大，而在一些較低極性的有機溶劑中溶解度較低。 (3) 不同提取劑對決明子中黃酮浸提效果的影響。 AlCl3顯色法 以蘆丁為標(biāo)樣，在測定液中加入 AlCl3搖勻，室溫放置 10min，按分光光度法，在 200500nm范圍內(nèi)迸行掃描，尋找二者重疊最吸收波長，測定。 (5) 酶解法 對于一些黃酮類物質(zhì)被細胞壁包圍不易提取的原料使用酶解的法比較實用。此方法主要用于提取脂溶性基團占優(yōu)勢的黃酮類物質(zhì)，對設(shè)備要求簡單，產(chǎn)品得率高，但成本較高，雜質(zhì)含量也較高?，F(xiàn)在，很少單一使用本方法。近年來上市的保健產(chǎn)品中，大部分功效成分都屬于黃酮類化合物。 黃芩也具有抗真菌活性，對多種致病性真菌，如白色念珠菌，許蘭毛癬菌等有一定抑制作用。 (4) 抗心腦血管疾病 黃酮類化臺物具有擴張血管的作用，可以改善心肌平滑肌的收縮舒張功能，其作用機 11 制與黃酮類化合物調(diào)節(jié)平滑肌細胞 膜外 Ca2+內(nèi)流和細胞內(nèi) Ca2+釋放有關(guān) [14]。能夠降低冠心病發(fā)病率和死亡率，日本、美 國等國家的調(diào)查得出類似的結(jié)論。 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu) 常見的黃酮類物質(zhì)有槲皮素、蘆丁、兒茶素、毛地黃黃酮、白藜蘆醇及其衍生物等 ,圖11所示為具有代表性的一中黃酮結(jié)構(gòu)。另外，大決明種子還含有十六烷～三十一烷，膽甾醇、豆甾酵、爭谷簪醇、 1,3二羥基． 3甲基蔥醌。 決明子多糖效用抗氧化能力 [10]，體現(xiàn)在對 H2O2誘導(dǎo)引起的紅細胞溶血有較明顯的抑制作用，且在一定的濃度范圍內(nèi)隨多糖濃度的增加，對紅細胞溶血的抑制作用也增加，當(dāng)多糖濃度達 ％ (即加入糖體積小于 )時，抑制率達 ％。因此，決明子蒽醌苷可能是通過減少外源性脂質(zhì)的吸收及增加排泄而降低血脂的。決明子生品石油醚、正丁醇提取物和炒決明子正丁醇提取物，能明顯縮短燥結(jié)便秘模型小鼠的首便時間，增加排便粒數(shù)及糞便重量，表明決明子瀉下作用的有效成分主要集中于石油醚及正丁醇提取物中．可能是油脂類及苷類成分。決明子蒽醌類對大腸桿菌金黃色葡萄球菌和青霉有較強的抑制作用 [4]。其脂溶部分在 1mg／ kg對呈明顯降壓作用（ P)，醇溶和水溶部分在 6 15 mg／ kg出觀明顯降壓作 (P)。 研究 進 展 決明子中黃酮成分在國內(nèi)的研究起步相對較晚，其中的一些功能效用也只是在相應(yīng)的文獻中提及過，并未涉足深入的研究。 關(guān)鍵詞 ： 決 明子，黃酮類化合物，乙醇 ， 提取工藝 II Abstract Semen Cassiaen a traditional Chinese herbal medicine, which is a rich source o f flavones,polysaccharides and anthraquinone,having a widespread activity in biology. Modern pharmacology study also shows that, cassia seed also have fall blood pressure, fall hematic fat, protect liver and bacteriostasis activities, be applied to various cholesterollowering diet drugs in preparations. Meanwhile, cassia seed and eating Chinese traditional medicine, is the good health drink raw chemical separation factors were adopted to extract flavonoids. This experiment determined the content of flavonoids in cassia seed, and cassia seed the extraction technology of flavonoids were Condensing Reflux Extraction were applied to extract flavonoids． When extracting， Five extraction factors of flavonoids from Semen Cassiaen were investigated and pared, including extracting time ， ethanol concentration， extracting temperature and ratio of liquid to solid. Again the optimization of process conditions for orthogonal experiment. Quantification was performed by means of UV–Vis spectrophotometry with chromogenic system of NaNO2–Al (NO3)3–NaOH. Experiments show that that the ethanol extraction was better than the other． The found optimum extraction conditions were that the ethanol concentration was 75% (v/v), solid–liquid ratio was 1:30, extracting temperature was 80176?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究又表明，決明子 具有降血壓、降血脂，保肝及抑菌等活性，被 應(yīng)用于多種降脂減肥的成方制劑中。在最佳提取條件 75％乙醇為 提取劑， 80℃下提取，提取時間 ，料液比 1:30時 。 但是，就目前情況來看，我國對中藥有效成分的提取研究較少，許多生產(chǎn)企業(yè)還在采用陳舊的提取工藝， 造成了資源的極大浪費，還導(dǎo)致環(huán)境污染，加工質(zhì)量不穩(wěn)定等因素，生產(chǎn)成木高，經(jīng)濟效益低。多年來國內(nèi)外學(xué)者對決明子進行了大量的研究。增加排泄，通過反饋詞節(jié) LDI．代謝，降低血清膽固醇水平，延緩和抑制動脈粥樣硬化斑塊的形成。動物實驗結(jié)果表明新決明內(nèi)脂可減少大鼠的體重增加率； HepG2肝細胞基因表達圖譜結(jié)果顯示新決明內(nèi)脂調(diào)節(jié)了 46個與脂質(zhì)代謝、蛋白代謝、細胞增生與凋亡等功能有關(guān)的基因 [5]。 (1) 蒽醌類 決明中含有蒽醌類成分約為 ％ [8]。結(jié)論 SCAG體外給藥可顯著增強小鼠細胞免疫功能 [6] (2) 多糖類 目前對決明子的研究多針對其蒽醌類、吡酮類物質(zhì)，而對決明子多糖的研究較少。 (4) 其他物質(zhì) 據(jù)分 析，每 100g可食用部分的決明子含胡蘿卜素 、核黃素 、抗壞血酸105mg。一般游離甙元難溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等有機溶劑及稀堿液中。黃酮類化合物的研究發(fā)展很快， 1950年發(fā)現(xiàn) 104種 (甙類除外 )， 1962年累計達到 201種， 1965年近 400種， 1973年約為 750種， 1965年至 1973年的八年時間，就發(fā)現(xiàn)了新黃酮化合物約為 350種 (不包括甙類 )。方式之一是通過直接殺滅腫瘤細胞、阻止其分裂繁殖而達到抗腫瘤抗癌的作用 ；第二種抗腫瘤方式是通過增強其他物質(zhì)的活性間接殺死腫瘤細胞；第三種方式主要是指能減小甚至消除一些化學(xué)致癌物的致癌毒性。這方面進行的研究較多，如銀杏黃酮、槲皮素 、桑色素、山奈酚和楊梅黃酮等均有抗病原微生物和抗病毒的作用。其作用機制與清除自由基，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，對抗四氧嘧啶所致的 β 細胞損傷促進 β 細胞修復(fù)和再生密切相關(guān)。生物酶法提取植物中黃酮的提取效果好、提取率高，已被廣泛應(yīng)用 15。一般可以根據(jù)不同的原料使用不同堿性溶液。 (4) 微波法 微波技術(shù)在中草藥的應(yīng)用上越來越廣泛，原理是利用磁控管所產(chǎn)生的每秒 24． 5億次超高頻率的快速震動，使藥材內(nèi)分子問相互碰撞、擠壓，有利于藥材有效成分的浸出。缺點是超臨界提取所需設(shè)備價格昂貴、生產(chǎn)成本高、提取物中烷基酚含量較高、對極性大的物質(zhì)提取不理想。 重點 研究不同提取條件對 黃酮提取效率的影響，確定其影響程度的大小，尋找最佳提取工藝條件。 (8) 進行正交實驗確定最佳提取條件。9H2O 天津永晟精細化工有限公司 氫氧化鈉 NaOH 天津永晟精細化工有限公司。重復(fù) 3次，結(jié)果取平均值 [18]。 (4) 提取時間對浸提效果的影響 分別采用 、 、 、 、 3的操作步驟進行試驗，以濃度為75%的乙醇為提取劑，提取溫度為 80℃ ， 料液比為 1:20，提取決明子中黃酮類化合物的試驗，得出提取時間對提取效果的影響。 21 第 3章 結(jié)果與討論 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 本實驗過程中，黃酮類化合物檢測以標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，應(yīng)用 亞硝酸鈉 硝酸鋁顯色法 ，通過測定吸光度來確定黃酮類物質(zhì)的含量。 (2) 溶耕不能與植物成分產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，即使反應(yīng)亦屬于可逆性的。 提取劑濃度的影響 實驗過程中選取乙醇提取濃度分別為 65%、 75%、 80%、 85%、 95%，提取條件保持 ，在 80℃ 下，回流提取時間為 ，料液比為 1:20，結(jié)果見表 33。 提取時間的影響 實驗過程中分別選取提取時間 、 、 、 、 ， 提取劑濃度為 75%，提取溫度為 75℃ ，料液比為 1:20，結(jié)果如表 35。所以，直觀分析表明決明子中黃酮的提取實驗中，黃酮提取率最高的實驗方案為 A2B2C3D3， 即以 75％乙醇為提取劑， 80℃ 下提取，提取時間 ，料液比 1:30， 這一結(jié)論與單因素實驗基本吻合。 試驗結(jié)果表明： (1). 以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，測定了 0~6μg/mL濃度范圍內(nèi)的吸光度。 33 附 錄 A 英文 譯 文 研究不同提取方法提取馬齒莧中的黃酮類化合物及應(yīng)用紫外 — 可見分光光度計對其進行測定 朱洪斌，王玉枝，劉宇軒，夏亞林，唐天 收到： :： 施普林格 +商業(yè)媒體科學(xué) ,LLC 2021 年 摘要 在中國 馬齒莧是一種傳統(tǒng)的食用和藥用植物。八種不同產(chǎn)地的馬齒莧進行調(diào)查分析，黃酮類化合物的總含量 ,是 、 、 、 、 、 、 、 。 在中藥材的許多有效成分中， 黃酮類化合物是其中一種最受關(guān)注的化合物。 最近，黃酮類化合物在醫(yī)學(xué)的發(fā)展和食品領(lǐng)域成為一個非常熱門的研究方向。 (Jin et al. 2021。在目前的研究中，微波萃取法，這種簡單、有效的方法已被發(fā)展出來，與此同時，微波萃取法優(yōu)勢顯示了出來。 材料和方法 采集的樣本 為了研究馬齒莧中黃酮含量，采集不同月份的三種馬齒莧作為實驗材料。整個研究過程中要使用蒸餾水。馬齒莧中黃酮提取的五種方法如下： 準(zhǔn)確地稱量 ，至于錐形瓶中，加入 25mL70%乙醇，密封后至于微波分解系統(tǒng)中提取。 準(zhǔn)確地稱量 ，至于錐形瓶中，加入 25mL70%乙醇，然后在室溫25℃ 提取 48h，然后按照上述所作 (按照 對微波萃取 的 描述 )。微波提取后，提取液在 11000rpm下離心分離 30min。高速離心機 (TGL16C、上海 、 中國 )，其是在相分離中使用的。中醫(yī)的樣品被收集于 2021年 8月 ,另一種中藥樣品被收集是在 2021年 7月。在這些方法中，只有分光光度法能測定總黃酮的總量。不幸的是，應(yīng)用這種方法，黃酮不能被充分的提取，是由于提取的雜質(zhì)很多，提取時間長，這些因素限制這種提取方法。據(jù)報道，在馬齒莧中發(fā)現(xiàn)了 7種黃酮類化合物，包括：槲皮素、山奈酚、木犀草素、楊梅酮、木犀草素、染料木黃酮 (Chen et al. 2021。 De Souza et al. 2021。 Garti et al. 1999)。對比研究五種提取方法馬齒莧中黃