【正文】 ............... 5 神經(jīng)營養(yǎng)因子 (neurotrophic factors ,NTFs) ................................................................... 5 基因治療 ......................................................................................................................... 6 腺苷 A2A 受體拮抗劑治療帕金森病的實(shí)驗(yàn)研究近況 ................................................... 6 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀 ............................................................................................................. 6 腺苷 A2A 受體對(duì)紋狀體神經(jīng)元的影響 ......................................................................... 7 腺苷 A2A 受體拮抗劑 ..................................................................................................... 9 第 2章 實(shí)驗(yàn)部分 .................................................................................................................. 11 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 .............................................................................................................. 11 實(shí)驗(yàn)步驟 .......................................................................................................................... 13 第一步反應(yīng) ................................................................................................................... 13 第二步反應(yīng) ................................................................................................................... 14 第三步反應(yīng) ................................................................................................................... 14 第四步 反應(yīng) ................................................................................................................... 15 第五步反應(yīng) ................................................................................................................... 15 第六步反應(yīng) ................................................................................................................... 15 第七步反應(yīng) ................................................................................................................... 16 第八步反應(yīng) ................................................................................................................... 16 分析方法 .......................................................................................................................... 13 第 3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 .................................................................................................... 11 實(shí)驗(yàn)收率 .......................................................................................................................... 18 LCMS 圖譜分析 .............................................................................................................. 20 核磁圖譜分析 .................................................................................................................. 23 結(jié) 論 ........................................................................................................................................... 32 致 謝 ............................................................................................................. 錯(cuò)誤 !未定義書簽。s disease use an overview of the status and progress of Parkinson39。隨著老齡化社會(huì)的到來， PD 患病人數(shù)有增加趨勢。隨著對(duì) PD 發(fā)病機(jī)制的不斷探索 ， 越來越多的藥物應(yīng)用于 PD 不同發(fā)病階段的臨床治療。 外源性多巴胺不能透過血腦屏障(BBB) ， 應(yīng)用其前體物左旋多巴能通過 BBB 進(jìn)入腦內(nèi) ， 經(jīng)多巴脫羧酶脫羧轉(zhuǎn)變成多巴胺 ，從而起到補(bǔ)充腦內(nèi)多巴胺的作用。近期開發(fā)的依替左旋多巴 (etilevodopa) [3]即左旋多巴乙酯 ， 在腸道中很快水解成左旋多巴 ， 而在胃中則不被水解。半合成的麥角類衍生物 [2 ,5]溴隱亭 (bromocriptine)、麥角乙脲 (lisuride)等 ， 主要作于D2受體 ， 培高利特 (pergolide)即協(xié)良行 ， 直接作用于 D1和 D2受體 ， 其療效維持時(shí)間較長 ，部分對(duì)溴隱亭失去反應(yīng)的患者在改用培高利特后仍有效，阿樸嗎啡類如阿樸嗎啡(apo2morphine)， 20 世紀(jì) 50 年代開始用于抗帕金森病，其作用時(shí)間短，多采用皮下注射 ，也可肌內(nèi)注射、口服和經(jīng)皮給藥 ， 由于阿樸嗎啡常誘發(fā)給藥部位的皮膚損害 ， 在美國已停用。研究結(jié)果表明受體激動(dòng)劑單獨(dú)用于早期治療要優(yōu)于安慰劑 ， 帕金森病統(tǒng)一量表 (UPDRS)和日常生活功能量表 (ADL)評(píng)分都顯著 改善 ， 同時(shí)與左旋多巴相比 ， 可以減少運(yùn)動(dòng)并發(fā)癥 ， 原因是受體激動(dòng)劑作用時(shí)間較左旋多巴長 ， 可以長時(shí)間持續(xù)刺激多巴胺受體 [10]。多巴胺在腦內(nèi)通過 MAO2B 氧化降解 ， 并在其代謝過程中產(chǎn)生大量氧自由基損傷神經(jīng)元。 拉扎貝胺 (lazabemide)、 mefegiline、雷沙吉蘭 (rasagiline)和 safinamide[17]等系正在臨床研究階段的新的 MAO2B 抑制劑。d 1 耐受性很好 ， 在紅細(xì)胞內(nèi)迅速產(chǎn)生可逆性的 COMT抑制作用 ,其抑制作用和劑量有關(guān)。d 1。 抗膽堿制劑 該類藥物能對(duì)抗失衡后過多的乙酰酰膽堿的作用 ， 也抑制突觸間隙中多巴胺的再攝取 ， 糾正乙酰膽堿和多巴胺的不平衡。 Kanda 等 [21]在 MPTP 處理中發(fā)現(xiàn)聯(lián)合使用 KW26002 與左旋多巴或選擇性 D1， PD2多巴胺激動(dòng)劑可以提高抗帕金森作用 ,但不會(huì)增加異動(dòng)癥。在 MPTP 和 62OHDA 損傷的藥物模型中 ， BDNF 和 GDNF 證實(shí)可以促進(jìn)多巴胺能神經(jīng)元生存 ， 在早期嚙齒類動(dòng)物研究中 ， 低劑量的 BDNF 不能減緩黑質(zhì)多巴胺減少 ，但在后來的更高劑量的研究中發(fā)現(xiàn)確實(shí)能起到改善作用。針對(duì)帕金森病的治療基因包括 3 類 ， 一是表達(dá)多巴胺合成的酶基因 ， 二是神經(jīng)營養(yǎng)因子基因 ， 三是 BCL22 基 因。最近發(fā)現(xiàn) [24]，至少神經(jīng)系統(tǒng)其他部位和外周組織中有這種受體的 mRNA 的表達(dá)，但水平都很低。然而 DA 消耗引起的前腦啡肽 mRNA 表達(dá)增高需要 A2A 和煙堿型 Ach受體的激活。 8 Ach受體拮抗劑在 PD中僅有輕微的治療作用，主要因?yàn)?A2A 受體能刺激 Ach的釋放，因此 A2A 受體拮抗劑通過減少 Ach的影響能對(duì)這種疾病起輔助 的治療。另外，在紋狀體 Gpe 神經(jīng)元點(diǎn)燃時(shí)可能也有一些作用，而神經(jīng)元失活時(shí)其作用則相當(dāng) 小。 除了上述 A2A 受體的作用外，這種受體還能降低多巴胺 D2受體的親和力以及對(duì)抗 D1和 D2受體行為學(xué)、基因表達(dá)和第二信使系統(tǒng) [21]的影響作用。此外 ， 該衍生工具的藥效及臨床表現(xiàn)成功完成了第一階段的臨床研究。再者 ， 因?yàn)榉答佉种?， 管理水平的增加外源性左旋多巴的結(jié)果會(huì)降低內(nèi)部形成的化合物 (內(nèi)源性多巴胺 )。 一 種拮抗劑的合成路線 X=Y=CH X=N， Y=CH X=Y=N 通過這 條路線 ，我們用這種藥物中間體來形成新型的 A2A 受體阻滯劑，研發(fā)出治療帕金森病的新藥物。 第五步反應(yīng) OH . H C lNONM e 2 S O 4K 2 C O 3 5 6 將第四步的產(chǎn)物（ 5） ，加入碳酸鉀 150g，然后加入硫酸二甲酯 180ml,讓其在 0 度進(jìn)行反應(yīng)，然后保持室溫過夜反應(yīng)，此反應(yīng)在高度真空下進(jìn)行，點(diǎn)板反應(yīng)完全后過濾，然后用乙酸乙酯和水萃取三次，有機(jī)相旋干稱其質(zhì)量，進(jìn)行拌樣，裝柱子進(jìn)行過柱，通過對(duì)留樣的點(diǎn)板觀察，一共有兩個(gè)點(diǎn)，第一個(gè)是產(chǎn)物點(diǎn)，第二個(gè)是雜質(zhì)點(diǎn)，選取展開劑石油醚：乙酸乙酯 =20： 1 進(jìn)行 沖洗，點(diǎn)板確認(rèn)有熒光點(diǎn)，用展開劑石油醚：乙酸乙酯 =4:1 進(jìn)行爬板，發(fā)現(xiàn)純凈的產(chǎn)物點(diǎn)已經(jīng)下來，因?yàn)殡s質(zhì)點(diǎn)和產(chǎn)物點(diǎn)相距較遠(yuǎn)，于是加大展開劑極性到 10:1，通過點(diǎn)板確認(rèn)產(chǎn)物依然純凈，于是繼續(xù)用此極性進(jìn)行沖洗直至沒有產(chǎn)物點(diǎn)出現(xiàn)，此過程中沒有雜質(zhì)點(diǎn)下來，將收集的溶液旋干既得產(chǎn)物 ，取樣送核磁檢測。首先我們先將甲基氧化成醛，一般方法是使用硫酰氯，高錳酸鉀，三氧化鉻，二氧化錫等方法氧化， 我們 將第五步的產(chǎn)物溶于苯中，加入硫酰氯，使其在常溫下反應(yīng) 1 個(gè)小時(shí)，收集起 來，并通過柱層析刮大板來測得到產(chǎn)物，將產(chǎn)品送核磁檢測不是產(chǎn)物。 M eN H 2C H ON H 2D D QM e O H : H 2 O = 1 6 : 1 我們也觀察到類似的結(jié)果為 DDQ 氧化對(duì)甲基苯胺在二氧六環(huán) (表 )和四氫呋喃 (表)溶劑下基本沒有反應(yīng)。在我們整個(gè)反應(yīng)的進(jìn)程中，產(chǎn)物的極性是逐漸加大的，在前幾步純化時(shí)并不要求達(dá)到 100%，考慮時(shí)間以及經(jīng)濟(jì)效益我們選擇較佳方案，因此 會(huì) 以較高的效率得到最終產(chǎn)物。 28 圖 產(chǎn)物（ 6）的 核磁 圖 Figure NMR figure 0f the product (6) 對(duì)產(chǎn)物的核磁圖分析共有 15 個(gè)氫原子，與所要化合物的化學(xué)分子式相同，是期望產(chǎn)物。 30 圖 產(chǎn)物（ 8）的 核磁 圖 Figure NMR figure 0f the product (8) 對(duì)產(chǎn)物的核磁圖分析共有 15 個(gè)氫原子， 與所要化合物的化學(xué)分子式相同，是期望產(chǎn)物。 圖 產(chǎn)物（ 6）的 液相色譜 質(zhì)譜 圖 Figure LCMS figure 0f the product (6) 22 此圖為第五步產(chǎn)物（ 6）的譜圖，可以看出產(chǎn)物純度為 100%。類似的反應(yīng)有 30%的產(chǎn)量對(duì)氨基苯醛 (表 )在 MeOH:水處理系統(tǒng)下