新人教版生物選修1課題3血紅蛋白的提取和分離之一-文庫(kù)吧在線文庫(kù)
【正文】 遷移的過(guò)程。 SDS能與各種蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì) — SDS復(fù)合物， SDS所 帶負(fù)電荷 的量大大超過(guò)了蛋白質(zhì)分子原有電荷量。血紅蛋白因含有（ ）而呈紅色。 ② 底塞的制作： 打孔 挖出凹穴 安裝移液管頭部 覆蓋尼龍網(wǎng) ，再用 100目尼龍紗包好。 （ 2）方法： 配置凝膠懸浮液：計(jì)算并稱取一定量的凝膠浸泡于（ ）中充分溶脹后，配成（ ）。這使血紅蛋白的分離過(guò)程非常直觀，大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。 ⑥ Tris— 甘氨酸電泳緩沖液 25 mmol/L Tris，250 mmol/L 甘氨酸 (pH )， %的 SDS。 （ 2）電泳方法步驟 ③ 配制 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳濃縮膠溶液。把凝膠固定于電泳裝置上，上下槽各加入Tris— 甘氨酸電泳緩沖液。 9)脫色： 染色完畢，傾出染色液 ,換脫色液脫色310 h，其間需多次更換脫色液至背景清楚。 討論：如何測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量？ 使用 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量時(shí)， 可選用一組已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白同時(shí)進(jìn)行電泳 ，根據(jù)已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的電泳區(qū)帶位置，用 電泳遷移率和分子量的對(duì)數(shù)作標(biāo)準(zhǔn)曲線， 可以測(cè)定未知蛋白質(zhì)的分子量。此外，還可以加入大分子的有色物質(zhì)，例如藍(lán)色葡聚糖 — 2020或紅色葡聚糖，觀察色帶移動(dòng)的情況。 8）染色 將電泳凝膠片放在考馬斯亮藍(lán)染色液中染色 12 h。 ② 分離膠聚合完全后（約 30 min），傾出覆蓋水層，再用濾紙吸凈殘留水。 TEMED和過(guò)硫酸胺對(duì)黏膜和上呼吸道組織、眼睛、皮膚等有很大的破壞作用，吞服可致命。 純化 — 聚丙烯酰胺凝膠電泳 鑒定血紅蛋白純度 （ 1）試劑的配制 ① 丙烯酰胺和 N, N甲叉雙丙烯酰胺 用去離子水配制 29%（ 29 g/100 mL，下同）的丙烯酰胺和 1%的 N, N甲叉雙丙烯酰胺的貯存液 ② 十二烷基硫酸鈉（ SDS） 用去離子水配成10%的貯存液，于室溫保存。 ③ 洗滌平衡 裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在 ( )高的操作壓下，用 300ml的 20mmol/l的 磷酸緩沖液（ pH為 ）充分（ ） 12小時(shí)。 d、色譜柱下端用移液頭部做（ ），連接一細(xì)的（ ），并用螺旋夾控制尼龍管的（ ），另一端放入收集（ ）的收集器內(nèi) 橡皮塞的凹面 100目 上部 出口部位 尼龍管 打開(kāi)與關(guān)閉 色譜流出液 ⑤ 安裝其他附屬結(jié)構(gòu)。 五倍體積 生理鹽水 三 黃色 (2)血紅蛋白的釋放 加（ ）到（ ）體積，再加 40％體積的（ ）（ 溶解細(xì)胞膜 ） ，置于（ ）上充分?jǐn)嚢?0分鐘（加速細(xì)胞破裂） , 細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白 . (3)分離血紅蛋白溶液：將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以 2020r/min的速度離心 10 min ，試管中的溶液分為 4層 : 原血液 甲苯 磁力攪拌器 蒸餾水 第 1層（最上層）： （ ）甲苯層 第 2層（中上層）： （ ） 的沉淀層， （ ）色薄層固體 第 3層（中下層）： （ ） 的水溶液層 （ ）的液體
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