免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗標(biāo)記技術(shù)-文庫吧在線文庫
【正文】 ? 熒光抗體技術(shù)的一種特殊應(yīng)用是流式細(xì)胞分析（ flowcytometry）。 用過碘酸鈉活化酶蛋白分子后，再與抗體（抗原）結(jié)合。 封閉： 1％－ 5％牛血清白蛋白或 5％－ 20％小牛血清。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 1．雙抗體夾心法 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 特點： ? 非競爭結(jié)合反應(yīng) ? 常用于抗原的檢測 ? 適用于分子中具有至少兩個抗原決定簇的多價抗原，而不能用于小分子半抗原的檢測 ? 所用兩種抗體分別針對同一個抗原分子的不同抗原決定簇 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 2．間接法 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 特點： ? 用于抗原和半抗原的定量測定，也可對抗體進(jìn)行測定。此階段分離效果肉眼不可見（只有在染色后才顯出電泳區(qū)帶） 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 ? 電轉(zhuǎn)移 將在凝膠中已經(jīng)分離的條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，選用低電壓（ 100V）和大電流（ 12A），通電 45min轉(zhuǎn)移即可完成。 ? 藥物和毒品如地高辛、苯巴比妥、慶大霉素、嗎啡等。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 親和素與生物素的結(jié)合，雖不屬免疫反應(yīng)，但特異性強(qiáng)，親和力大，兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。 20:45:0720:45:0720:45Saturday, March 11, 2023 ? 1乍見翻疑夢，相悲各問年。 20:45:0720:45:0720:453/11/2023 8:45:07 PM ? 1成功就是日復(fù)一日那一點點小小努力的積累。 下午 8時 45分 7秒 下午 8時 45分 20:45: ? 楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 2023年 3月 下午 8時 45分 :45March 11, 2023 ? 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 20:45:0720:45:0720:45Saturday, March 11, 2023 ? 1知人者智，自知者明。 2023年 3月 11日星期六 下午 8時 45分 7秒 20:45: ? 1楚塞三湘接，荊門九派通。 2023年 3月 下午 8時 45分 :45March 11, 2023 ? 1行動出成果，工作出財富。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 ? 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧?，F(xiàn)在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉和素（ strepavidin）。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 第四節(jié) 酶免疫測定的應(yīng)用 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 ? 病原體及其抗體廣泛應(yīng)用于傳染病的診斷 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 （反向間接法） 主要用于 血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測定。 固相 EIA：固相載體結(jié)合酶標(biāo)復(fù)合物，經(jīng)洗滌去除游離的酶標(biāo)抗體。 結(jié)合容量大，反應(yīng)迅速，逐漸普遍用于自動化分析。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 2. 堿性磷酸酶（ AP） 常用底物為對硝基苯磷酸酯（ pNPP），產(chǎn)物為黃色。 ? 用熒光抗體染色法可檢出病毒及其繁殖情況。 標(biāo)記方法：攪拌法 (適合大樣品 ) 透析法 (適合小樣品 ) 標(biāo)記抗體的純化：透析法 層析分離法 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 熒光抗體的鑒定 F/P比率 ： 將制備的熒光抗體稀釋至 A280≈ ，分別測讀 A280（蛋白質(zhì)特異吸收峰）和標(biāo)記熒光素的特異吸收峰 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 F/P值越高，說明抗體分子上結(jié)合的熒光素越多，反之則越少。其異硫氰基可與蛋白質(zhì)結(jié)合，但熒光效率較低。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 基本原理 利用熒光素標(biāo)記抗體，使之在涂片上或組織切片上與標(biāo)本中的待檢抗原特異結(jié)合，采用高發(fā)光效率的點光源，透過濾色板發(fā)出一定波長的光，使結(jié)合在標(biāo)本上的熒光素被激發(fā)而產(chǎn)生熒光，借助熒光顯微鏡觀察底物片上熒光染色形態(tài)，來判斷有無待檢抗原或抗體。因此， IRMA的批內(nèi)和批間變異均比較小。 ? 反應(yīng)速率 反應(yīng)速度與反應(yīng)物的濃度呈正比，在 IRMA中標(biāo)記抗體是過量的，而且不存在競爭性結(jié)合復(fù)雜的反應(yīng)，所以反應(yīng)速度較 RIA快。要求：分離徹底，迅速；分離試劑和過程不影響反應(yīng)平衡；操作簡便，重復(fù)性好且經(jīng)濟(jì)。 比放射性 ↑ 方法更靈敏；過高 輻射自損傷大，對標(biāo)記物免疫活性影響大，儲存穩(wěn)定性差 。標(biāo)記免疫技術(shù) 醫(yī)學(xué)檢驗系臨床微生物學(xué)及免疫學(xué)教研室 二 OO四年三月 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 標(biāo)記 免疫技術(shù) = 抗原抗體反應(yīng) 示蹤物標(biāo)記 靈敏性 特異性 標(biāo)記免疫技術(shù)的主要特點： 高特異性 、 高靈敏性 免疫技術(shù) +標(biāo)記技術(shù)
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