第十章基因工程技術(shù)育種-文庫吧在線文庫
【正文】 基因組中穩(wěn)定遺傳和表達(dá)的過程。 進(jìn)入上世紀(jì) 90年代，我國水產(chǎn)品總量已躍居世界首位，水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)量超過捕撈產(chǎn)量，水產(chǎn)業(yè)的發(fā)展由捕撈型轉(zhuǎn)向增養(yǎng)型。 1. 海水魚類基因的分離和克隆 基因的分離包括構(gòu)建基因文庫和從基因文庫中篩選分離目的基因兩大步驟。 用這幾種抗凍蛋白基因構(gòu)建的各種表達(dá)重組體已經(jīng)成功地應(yīng)用于轉(zhuǎn)抗凍蛋白基因魚類的研究和基因工程菌表達(dá)生產(chǎn)抗凍蛋白的應(yīng)用研究。 顯微注射法是目前最常用的方法 ， 導(dǎo)入外源基因的成功率也比較高 。 Zhao(1993)證明電穿孔導(dǎo)入的 GH 基因不僅能表達(dá)，而且還能遺傳。 于健康等 (1994)將金魚精子與 AFP基因在 Niu—Twitty液中 4 ℃ 保溫 30 min后 ， 再與卵子受精 ， 經(jīng) PCR 法和 Southern blot分子雜交法檢查 ， 陽性率為 26%。因此， 整合率才真正反映了轉(zhuǎn)基因的效率。 外源基因整合的檢測：有 DNA點(diǎn)雜交，Southern雜交及 PCR反應(yīng)等方法。 后來又對(duì)其他基因，如抗凍蛋白基因工程操作等，獲得了很好的成效。 早在 1985年，朱作言等就率先在世界上獲得轉(zhuǎn)基因鯽魚，后來又先后獲得了轉(zhuǎn)基因泥鰍、鯉、團(tuán)頭魴和鯪等。一般認(rèn)為外源 DNA分子導(dǎo)入卵細(xì)胞核內(nèi)最佳。 染色體片段顯微注入法 這是一種超大型外源 DNA 轉(zhuǎn)移獲得轉(zhuǎn)移染色體魚的方法。 精子載體導(dǎo)入法 利用精子作為轉(zhuǎn)基因載體 ， 借助受精作用把外源基因?qū)胧芫?， 整合到受精卵的基因組中 ， 是構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的一種新的嘗試 。 電脈沖法 外源 DNA在電脈沖作用下進(jìn)入受精卵。他們將 小鼠金屬硫蛋白啟動(dòng)子 人生長激素基因組體（ mMThGH） 導(dǎo)入金魚受精卵中，獲得了第一批轉(zhuǎn)基因魚。 此后， DeVries等人從南極魚血清中分離和分析了這種生物大分子，發(fā)現(xiàn)它們是一類有特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)的糖蛋白，稱為抗凍糖蛋白（ AFGP）。其次海水魚的遺傳育種和全人工繁殖育苗問題尚未徹底解決，育苗成活率較低。 ◆ 基因治療 ◆ 利用基因工程技術(shù)，將特異基因?qū)氩⒄系骄哂羞z傳缺陷的患者的基因組中，以治療遺傳疾病的方法，通常叫做基因治療 (gene therapy)。 ● 轉(zhuǎn)染 (transfection):指病毒及其重組子導(dǎo)入受體細(xì)胞的過程 . ● 轉(zhuǎn)導(dǎo) (transduction):指噬菌體及其重組子導(dǎo)入受體細(xì)胞的過程 轉(zhuǎn)化 (1)氯化鈣法 ● 1970年 ,大腸桿菌經(jīng)過氯化鈣適當(dāng)處理及短暫熱休克之后 ,便能吸收 λ 噬菌體 DNA。 可作為 DNA載體的有 質(zhì)粒、噬菌體、病毒、細(xì)菌或酵母菌人工染色體 （ BAC、 YAC）
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