【正文】 是 DNA，也可以是 21（ 3）基因表達系列分析法基因表達系列分析法 (serialtag,(anchoringlinkerthewithDNADNA體外包裝 isallJoiningDNAshearingChoosetailingLigationDNATransfectionofDNAcellularcellulardifferentfrompoly(A)+RNARNaseklenowfrom6RTase HOTATT3’NaOHOHssTA3’5’TT5’TTA3’5’Ttransferase+dCTP3’CTCGAddbluntendofendsisforvectormayphoshpataseselfligation。sitecDNAofmoleculesb.containenzyme.DNAusedandstickyend5’GGGCCCGGATCCCCTAGGBamH I+OHGATCCCCGGGGGGCCC5’OHGATCCCCGGGenzymeofDNAphage,process.toclonesvectorsIfandvectorsusingisclonesdetermineforGenomicfor(termedsizes機械剪切法總 DNA分離純化 ）4.DNAusingisolationusedpreparinglibrary,shearingenzyme.CTAGAnnealBamH I Sau3 AGCCTAGGATCC CTAGGATCCISLeft arm Right armS/B S/BGATCCTAGGATCCTAGLigationGATCCTAGintoofsuitableplaquessolutionConcatemeric更先進的克隆技術(shù) AdvancedcDNAOkayama–Berg法反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)載體上所加的多聚 C尾巴 moleculesPromoter（啟動子） :topromoter:IHindIIICCCC1） HindIII2）取大片段TTTTT CCCCSacI1） HindIII2）取小片段HindlargeatopYAC45.end常來自結(jié)構(gòu)基因，因此僅代表某種生物的一小部分遺傳信息，且只代表那些正在表達的基因的遺傳信息： 1—5%不同器官或組織的功能不一樣，因而有的結(jié)構(gòu)基因的表達就具有器官特異性，故由不同器官提取的 mRNA所組建的 cDNA文庫也就不同cDNA文庫的特點4.5.（ EcoR I）？、 ExoIII、 DNase I，酶的作用特點。 10:55:4810:55:4810:55Wednesday, March 24, 20231乍 見 翻疑夢，相悲各 問 年。 三月 2110:55:4810:55Mar2124Mar211世 間 成事，不求其 絕對圓滿 ，留一份不足，可得無限完美。 10:55:4810:55:4810:553/24/2023 10:55:48 AM1越是沒有本 領(lǐng) 的就越加自命不凡。 10:55:48 上午 10:55 上午 10:55:48三月 21MOMODA 三月 21三月 2110:55:4810:55:48March 24, 20231意志 堅 強 的人能把世界放在手中像泥 塊 一 樣 任意揉捏。 三月 2110:55 上午 三月 2110:55March 24, 20231少年十五二十 時 ，步行 奪 得胡 馬騎 。 2023/3/24 10:55:4810:55:4824 March 20231做前，能 夠環(huán)視 四周；做 時 ，你只能或者最好沿著以腳 為 起點的射 線 向前。 polymerase 與 DNA Ligase的異同點？思考題：9. A fragment of mouse DNA with EcoRI sticky ends carries the gene M. This DNA ,which is 8kb long, is inserted into the bacterial plasmid pBR322 at the EcoRI rebinant plasmid is cleaved with two different restriction enzyme. The size fragments that were obtained on an agrose gel are isted below. Draw the restriction map for this sequence. EcoRI BamHI EcoRI + BamHI 思考題：The EndThank You!靜夜四無 鄰 ，荒居舊 業(yè)貧 。處于不同代謝階段（或發(fā)育階段）的結(jié)構(gòu)基因表達亦不相同 在同一個 cDNA文庫中，不同類型的 cDNA分子的數(shù)目是大不相同的，盡管它們都是由單拷貝基因轉(zhuǎn)錄而來的。MechanismDNA的連接供體 DNA片段的制備 :weightBACchromosomesYAC:2)TdT+dGTPEcoRIIITTTTTAAAAAmRNAAMVRT+dNTPTTTTTTTTTTAAAAA TdT+dCTPTTTTTAAAAATTTTT CCCCEcoReukaryoticwillaExpression5） cDNA文庫的形成 — 轉(zhuǎn)化Synthesisamplificationplatescoli,packagedin vitroConcatemericcohesive endLigationvectorBfragments CTAGGATCdigestionachievedisshouldcloning:ForDNA.文庫的連接、包裝和擴增Twooflinkers:CCGAATTCGGGGCTTAAGCCCCGAATTCGGGGCTTAAGCCInsertvector vectorCloning5.酶法phage vector：有效容納量是 15kbcosmid vector：有效容納量是 45kb建立基因組文庫的一般程序：1．載體 DNA片段的制備載體 DNA分離純化 orofDNAaCloningthegenomedescribecDNAMeMeCCGAATTCGGGGCTTAAGCCCCGAATTCGGGGCTTAAGCCCCGAATTCGGGGCTTAAGCCCCGAATTCGGGGCTTAAGCCCCGAATTCGGGGCTTAAGCCCCGAATTCGGGGCTTAAGCCDigestsuitable.CloningwasofCloninglargeefficiencyin vitro mayligaseTargetorusedGGGCCCCCCGGGGGGCCCHpaIIHomopolymerofthelinkers,oligomersforarea.Ligationmethods:rebinantoroforcircularrequirefragment)secondstrandGTCACcDNASynthesisTTTAtomRNARTaseOligo(dT)plementaryclasseseachgenes:cellChapterhost/vectorDNAPackagingwithligationUsecellcDNAofstrategyinTransfectionacohesiveBluntend目的基因克隆沒有任何一種克隆方法能夠涵蓋所有好處，克隆步驟： 1）克隆一個基因的方法： cDNA9）種轉(zhuǎn)錄物，人類的基因約僅有 80expression,簡稱 SAGE)可一次對大量基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進行定量分析，從中找出新的基因。cDNA克隆。20（ 2）減法雜交技術(shù) 6．篩選目的基因片斷的差別雜交及減法雜交技術(shù)（ 1）差別雜交法差別雜交（ differential000個轉(zhuǎn)錄子，因此， 9個核苷酸序列可以代表所有轉(zhuǎn)錄子的特征。原理 （兩個）： ① 序列；根據(jù)該推測