植物組織培養(yǎng)實驗室的構建與操作技術-文庫吧在線文庫
【正文】 合物 生長調節(jié)物質 ?水是植物體的重要組成成分，是一切代謝過程的 介質和溶媒 ，是生命活動過程中不可缺少的物質。多使用 蔗糖 。 （ 營養(yǎng)豐富，極易引起污染 ，如在培養(yǎng)中無特別需要，以不用為宜。在植物體內(nèi)也易受到體內(nèi)酶的分解。 ?在器官形成后，添加赤霉素 有時 可促進器官或胚狀體的生長 生長素 /細胞分裂素的比值決定分化發(fā)育的方向，是愈傷組織、長根還是長芽。 增殖 培養(yǎng)基：誘導離體培養(yǎng)苗擴大繁殖。 無機機鹽數(shù)量較低 ， 適于生根培養(yǎng) 。 （４）有機化合物 維生素、肌醇、氨基酸等一起配成 100或 200倍液，也可分別配制。 外植體選取 流水沖洗 （轉入超凈工作臺） 70%酒精表面消毒 20~60s 無菌水沖洗 消毒劑 處理 無菌水充分洗凈 備用 三、外植體的接種（無菌操作） 外植體的接種是把經(jīng)過表面滅菌后的植物材料切 碎或分離出器官、組織、細胞、轉放到無菌培養(yǎng)基上 的全部操作過程。 除特殊要求外 ， 一般都采用 日光燈 作光源 ， 根據(jù)不同植物或器官需要 ， 可以每天連續(xù)光照 1216小時， 也可每天光照 16小時 ， 8小時黑暗 。 ５ 、 pH值 不同的植物對培養(yǎng)基最適 pH值的要求也是不同的，大多在 5～，一般培養(yǎng)基皆要求 ，這基本能適應大多植物培養(yǎng)的需要。 ⑤ 適溫 生長，熱擊處理 ⑥ 使用透氣性好的封口膜 ⑦ 培養(yǎng)基中加入 青霉素 、 間苯三酚 、 根皮苷 或 多效唑 等 預防措施 一、試管苗的特點 試管苗的生態(tài)環(huán)境 ⑴高、恒溫 ? 試管苗整個生長過程中采用的是 恒溫培養(yǎng)，溫差很小 。 直接移栽法（極少使用） ? 直接將試管苗移栽到盆缽的方法。 04:13:3304:13:3304:132/2/2023 4:13:33 AM 1以我獨沈久，愧君相見頻。 , February 2, 2023 很多事情努力了未必有結果，但是不努力卻什么改變也沒有。 上午 4時 13分 33秒 上午 4時 13分 04:13: 楊柳散和風，青山澹吾慮。 2023年 2月 上午 4時 13分 :13February 2, 2023 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 04:13:3304:13:3304:13Thursday, February 2, 2023 1知人者智，自知者明。 :13:3304:13:33February 2, 2023 1意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 2月 2日星期四 上午 4時 13分 33秒 04:13: 1比不了得就不比，得不到的就不要。 說明外植體無菌接種程序。 ⑶弱光 ? 試管瓶內(nèi)光照一般比太陽光弱，幼苗生長也較弱，不能受太陽光直接照射。 ? 晴天 取材， 下午 取材，經(jīng)日曬可殺死部分細菌或真菌 ? 接種時除 去外部韌皮 組織，只接內(nèi)部的分生組織。 ３、濕度 培養(yǎng)瓶內(nèi)相對濕度常是 100%，培養(yǎng)室一般要求相對濕度保持在 7080%，相對濕度 過低影響培養(yǎng)物生長和分化，應向室內(nèi)噴灑水，以提高濕度；過高雜菌滋生，大量污染，應及時地通風除濕 。 （ 3）迅速將切割分離下的所需組織、細胞、器官，放入培養(yǎng)基上，及時蓋上瓶蓋。 生長素類用 NaOH、細胞分裂素用 HCl溶解 （ 6）有機附加物 ?椰乳 液體胚乳（紗布 濾渣 ） 80℃ 水浴濾液（ 20分鐘） 過濾 （去蛋白） 高溫高壓滅菌 冰箱保存 ?酵母提取液 酵母粉（加水煮沸 30分鐘） 過濾去渣 消毒 ２、培養(yǎng)基的配制及滅菌 培養(yǎng)基配制程序： 取適量蒸餾水放入容器 將母液取出混合 將瓊脂和糖加入容器 蒸餾水定容至 所需體積 調整 pＨ 分裝培養(yǎng)瓶 培養(yǎng)基的滅菌： 濕熱滅菌法，滅菌 15~20min 某些遇熱不穩(wěn)定的物質如 IAA、 ZT等進行過（抽）濾滅菌 植物細胞組織培養(yǎng)的成敗除與培養(yǎng)基的組分有關外，另一個重要因素就是 外植體本身 ，為了使外植體適于在離體培養(yǎng)條件下生長，使組織培養(yǎng)工作順利進行，有必要對外植體進行選擇與處理。 １、母液的配制和保存 母液是欲配制液的 濃縮液 ?保證各物質 成分的準確性 ， 減少微量元素用藥稱量誤差 ?配制時能 快速移取， 減少稱藥麻煩 ?便于低溫保藏。 ?1681， 出現(xiàn)由無機鹽組成的 Sacks和 Knop溶液 ， 至今仍在作為基本的無機鹽培養(yǎng)基 ?40年代多用 White培養(yǎng)基 ?60年代至今大多采用 MS等高濃度培養(yǎng)基 （ 可以保證培養(yǎng)材料對營養(yǎng)的需要 ， 由于濃度高 ， 在配制 、 消毒過程中某些成分有些出入 ， 也不致影響培養(yǎng)基的離子平衡 ） 培養(yǎng)基的名稱，多以發(fā)明人的名字來命名，也有對某些成分進行改良稱作 改良 培養(yǎng)基。 組織培養(yǎng)中最常用作凝固劑，是最方便、最好的凝固劑和支持物，常用量 610g／ L ，不是培養(yǎng)基必需成分。其中 Zt活性最強，但非常昂貴，常用的是 6BA。 植物激素（ hormone）是植物新陳代謝中產(chǎn)生的天然化合物，能以 極微小的量 影響到植物的細胞 分化、分裂、發(fā)育 ，影響到植物的 形態(tài)建成、開花、結實、成熟、脫落、衰老 和休眠 以及 萌發(fā) 等多種生理生化活動，是培養(yǎng)基的 關鍵物質 。 一般用量為 ～ ／ L。 ?除 C、 H、 O外，其它礦質元素通常以一定濃度的 無機化合物 形式，按一定比例配制而成，溶于水中以離子態(tài)被吸收 ?N有 硝態(tài)氮 KNO3和 銨態(tài)氮 (NH4)2SO4兩種形式（ 一般 NH4— N對植物生長較為有利 ）。 微孔過濾器 （細菌過濾器） ，抽濾滅菌用，如激素 器械用具 鑷子、剪刀、解剖刀、接種針（鏟）等。 ? 實驗室的大小應取決于工作的目的和規(guī)模 ? 按 組織培養(yǎng)流程 來設計，避免某些環(huán)節(jié)倒排，引起日后工作混亂 ?
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