植物組織培養(yǎng)-文庫(kù)吧在線文庫(kù)
【正文】 (5) 降溫冰凍。 五、影響超低溫保存效果的主要因素 預(yù)處理方法： (1)細(xì)胞、組織繼代培養(yǎng)中．細(xì)胞分裂分化同步化的調(diào)控，增加指數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。其降溫速度在每分鐘 l000℃ 以上。 (3)兩步冰凍法：這種方法是慢凍法和快凍法的結(jié)合，或者說(shuō)，是一種改良的慢凍法。從理論上說(shuō)，借助迅速的化凍速度通過(guò)此溫度區(qū)，從而避免細(xì)胞內(nèi)次生結(jié)冰。 3)后代染色體的分析。在 0℃ 放置 30分鐘。 (7)待恢復(fù)生長(zhǎng)后， 統(tǒng)計(jì)存活率 。 (5)預(yù)培養(yǎng)后，將培養(yǎng)瓶浸入 冰浴中 2小時(shí) 。植株的再生率達(dá) 70％以上，已有的試驗(yàn)表明，貯存 2年多仍能存活。 (5)貯存一定時(shí)間后， 在 25 ℃ 水浴中快速化凍， 為 280 ℃ ／分。 04:13:1904:13:1904:132/2/2023 4:13:19 AM 1以我獨(dú)沈久，愧君相見(jiàn)頻。 , February 2, 2023 很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒(méi)有。 上午 4時(shí) 13分 19秒 上午 4時(shí) 13分 04:13: 楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 2023年 2月 上午 4時(shí) 13分 :13February 2, 2023 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 04:13:1904:13:1904:13Thursday, February 2, 2023 1知人者智，自知者明。 :13:1904:13:19February 2, 2023 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 2月 2日星期四 上午 4時(shí) 13分 19秒 04:13: 1比不了得就不比，得不到的就不要。 3天內(nèi)恢復(fù)生長(zhǎng)， 3周后產(chǎn)生成苗，成苗率 (存活率 )達(dá) 80— 90％。 (3)將預(yù)培養(yǎng)后分生組織放入試管， 然后加入高濃度的冰凍保護(hù)劑。化凍后．立即將試管轉(zhuǎn)移到冰浴中． (10)用等體積 B5培養(yǎng)基 在 30分鐘內(nèi)，分 6次逐步加入試管中。置于 25— 28℃ 培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)。 (4)在液氮中貯存一定時(shí)期后，取出材料在 37— 40℃ 溫水浴迅速化凍， 化凍后立即轉(zhuǎn)移到 20℃ 水浴中。 1. 已進(jìn)行超低溫保存的植物： 目前已超過(guò) 30種植物 成功進(jìn)行了愈傷組織及懸浮細(xì)胞超低溫保存。 3. 3. 再培養(yǎng) 新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)。 5．化凍方法 實(shí)驗(yàn)證據(jù)證實(shí)， 植物的凍害常發(fā)生在冰涼和化凍兩個(gè)過(guò)程 。對(duì)大多數(shù)植物材料說(shuō)來(lái)，不適宜采用快速冰凍法，而需要在冰凍保護(hù)劑存在的條件下，采用慢速冰凍法。常用的是二甲基亞砜 (DMSO)、甘油、糖和糖醇類物質(zhì)、氨基酸、多肽及聚乙二醇等。 (8) 再培養(yǎng)，觀察組織細(xì)胞恢復(fù)生長(zhǎng)的速度、存活率、植株的再生能力。 2 . 基本程序 (1) 材料的準(zhǔn)備與選擇。 當(dāng)溫度進(jìn)一步下降，細(xì)胞內(nèi)外都結(jié)冰，產(chǎn)生冰晶損傷。 而 復(fù)蘇 就是以一定的復(fù)溫速率將凍存的體外培養(yǎng)物或生物活性材料恢復(fù)到常溫的過(guò)程。限制離體培養(yǎng)物生長(zhǎng)速度的方法主要有： （ 1）低溫保存法 （ 2）高滲透壓保存法 （ 3）生長(zhǎng)抑制劑保存法 （ 4）降低氧分壓保存法 （ 5）干燥保存法 而超低溫保存是將要保存的材料經(jīng)過(guò)適當(dāng)處理后，保存在液氮中（ 196℃ ），植物細(xì)胞生長(zhǎng)停止，但細(xì)胞活力和形態(tài)發(fā)生潛能得到了保存。 種質(zhì)資源的離體保存是對(duì)離體培養(yǎng)的小植株、器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體等材料，采用限制生長(zhǎng)、延緩或停止其生長(zhǎng)的處理使之保存，在需要時(shí)可以重新恢復(fù)其生長(zhǎng)，并再生植株的方法。因此采取適當(dāng)?shù)姆椒▽⑸锊牧辖抵脸蜏?，即可使生命活?dòng)固定在某一階段而不衰老死亡。
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