【正文】 。研究表明，微生物的營養(yǎng)需求和代謝類型與其生長環(huán)境有著很大的相關(guān)性。也有人從含油污泥中篩選出能以20機(jī)械潤滑油為惟一碳源的３株石油降解菌菌株，分別為動(dòng)膠菌屬（Zoogloea sp.）、氮單胞菌屬（Azomonas sp.）和假單胞菌屬（Pseudomonas sp.）。因?yàn)樯詈Ｖ猩畹奈⑸锬苣秃芨叩撵o水壓，如從海中篩到一株水活微球菌（Micrococcus aquivivus）,它能在600個(gè)大氣壓下生長。前蘇聯(lián)學(xué)者發(fā)現(xiàn)，20%～50%的海鞘、海參體內(nèi)的微生物可產(chǎn)生具有細(xì)菌毒性和殺菌活性的化合物。還有人從侵蝕木船的一種蠕蟲腸道中分離到既能固氮又能降解纖維素的微生物。這類微生物在低溫發(fā)酵時(shí)可生產(chǎn)許多風(fēng)味食品且可節(jié)約能源及減少中溫菌的污染。從意大利境內(nèi)的噴硫磺氣的火山口中分離到一種原始的微生物，在pH2和90℃時(shí)生長最好，其代謝類型極不尋常，既能作為耗氧型自養(yǎng)菌將硫氧化成硫酸，使自己增殖，又能作為厭氧菌用氫還原硫，生成H2S。因此，在分離該類菌株之前，可在增殖培養(yǎng)基中人為加入相應(yīng)的底物作惟一碳源或氮源。首先要到含糖分高的花蜜、糖質(zhì)中去取樣。如在分離環(huán)己烷降解菌時(shí)，樣品經(jīng)環(huán)己烷為惟一碳源的培養(yǎng)基富集后，培養(yǎng)液由原來的無色變?yōu)闇啙岬娜榘咨?。分離放線菌時(shí)，可將樣品液在40℃恒溫預(yù)處理20分鐘，有利于孢子的萌發(fā)，可以較大的增加放線菌數(shù)目，達(dá)到富集的目的。在富集培養(yǎng)基中加入適量的膽鹽和十二烷基磺酸鈉可抑制革蘭陽性菌的生長，對革蘭陰性無抑制作。 第三節(jié)組織分離法則通常是從有病或特殊組織中分離菌株。該分離方法操作簡便、快捷，效果較好。通過觀察微生物在選擇性培養(yǎng)基上生長狀況或生化反應(yīng)進(jìn)行分離，可顯著提高菌株分離純化的效率。分離乳酸產(chǎn)生菌時(shí)，由于乳酸是一種較強(qiáng)的有機(jī)酸，因此，在培養(yǎng)基中加入的碳酸鈣不僅有鑒別作用，還有酸中和作用。如培養(yǎng)基起始pH為堿性，則陽性解脂反應(yīng)從咖啡色到藍(lán)綠色，能使脂類底物和解脂后的脂肪酸區(qū)別開來。 生長圈法通常用于分離篩選氨基酸、核苷酸和維生素的產(chǎn)生菌。通常抗生素的篩選要投入極大的人力、財(cái)力和時(shí)間。測量抑菌圈大小，根據(jù)有效指標(biāo)（抑菌圈直徑于菌落直徑之比）選出高產(chǎn)突變株。許多海洋生物體內(nèi)都含有微生物，這些微生物為宿主抵御病害起著關(guān)鍵作用。 四）組織分離法組織分離法是由一些有病組織或特殊組織中分離菌株的方法。 從豆科植物的根瘤中分離根瘤菌：取新鮮健壯的根瘤，經(jīng)漂白粉或升汞溶液等進(jìn)行表面消毒后，用無菌鑷子將根瘤壓破，取出汁液少許與分離培養(yǎng)基混合倒入平皿中，攤平，培養(yǎng)后在平板上長出菌落，經(jīng)鏡檢觀察后確認(rèn)典型菌落，移入斜面。三角瓶內(nèi)事先制備好馬鈴薯—蔗糖培養(yǎng)基平板。（五）單細(xì)胞或單孢子分離法 采用特殊的儀器設(shè)備進(jìn)行單細(xì)胞或單孢子的分離。（六）特殊菌類——環(huán)保降解菌的分離 自然界存在著大量廢物及污染物，如多環(huán)芳烴（PAHs）、有機(jī)染料和顏料、表面活性劑、農(nóng)藥、酚類和鹵代烴等。這時(shí)就需根據(jù)不同的情況設(shè)計(jì)更合理的篩選模型。如在分離聚乙二醇降解菌時(shí)，可先篩選能分解乙二醇、丙二醇或聚乙二醇結(jié)構(gòu)相似的含兩個(gè)醚鍵的三甘醇的微生物，再從中篩選能降解聚乙二醇的菌株，也能達(dá)到較好的效果?？傊昧畠r(jià)碳源的高產(chǎn)菌株的發(fā)現(xiàn)與選育是降解塑料領(lǐng)域中最有意義的研究之一。測定水解圈直徑與菌落直徑之比，把比例大的菌落移入斜面保藏，供進(jìn)一步篩選。 培養(yǎng)基的pH要結(jié)合營養(yǎng)成分和培養(yǎng)條件來考慮。此外，在分離霉菌時(shí)，加幾滴乳酸不僅可以維持一定酸堿度，而且可以抑制細(xì)菌的生長。（4）分離根霉和毛霉時(shí)，由于這些微生物的菌絲易蔓延成片，難以得到純化的菌落，%去氧膽酸鈉或山梨醇防止菌絲蔓延，使菌落長得小而緊密。工業(yè)發(fā)酵微生物絕大多數(shù)都屬于此類。因此，培養(yǎng)過程中要除去氧氣，現(xiàn)介紹如下幾種方法：（一）加還原劑 分離培養(yǎng)基內(nèi)加入還原劑，如半胱氨酸、D型維生素C、硫化鈉等，操作時(shí)以最快的速度劃線分離，然后立即置于事先已抽真空密閉的容器內(nèi)（充CO2或N2也可），于室溫培養(yǎng)。 到上分離培養(yǎng)基，凝固后，皿底一側(cè)放焦性沒食子酸固體，另一側(cè)放10%NaOH溶液，使二者不相接觸。（三）平皿厭氣培養(yǎng)法 取無菌培養(yǎng)皿一套，在皿蓋內(nèi)當(dāng)分離某些特殊產(chǎn)物的微生物時(shí)，對溫度的選擇還需考慮某些內(nèi)在的關(guān)系，如在篩選不飽和脂肪酸產(chǎn)生菌時(shí)，由于細(xì)胞膜中所含的不飽和脂肪酸含量越高，其凝固點(diǎn)越低，即細(xì)胞在較低溫度下仍能表現(xiàn)出活力，因此在低于正常溫度10℃下分離效果最好。各類微生物生長溫度不同，從大范圍來看，可分三大類：一類是高溫微生物，最適溫度在50～60℃。（1）分離細(xì)菌時(shí)，在培養(yǎng)基中加入濃度為50U/ml制霉菌素，可以抑制霉菌和酵母菌的生長。而NaNO3是生理堿性氮源，其中NO3—被菌體分解利用后，剩余Na+，使培養(yǎng)液變成堿性。例如，分離檸檬酸產(chǎn)生菌的黑曲霉，就是利用調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的酸堿度獲得成功的。在選擇分離放線菌時(shí)，通常采用改良的HV瓊脂培養(yǎng)基、土豆胡蘿卜水汁液培養(yǎng)基和淀粉瓊脂培養(yǎng)基能取得較好的效果。而一些聚脂類高分子由于具有和微生物本身可合成的聚β羥基丁酯（PHB）相類似的結(jié)構(gòu)，無毒，且能在酸、堿和微生物條件下完全降解，同時(shí)具有良好的塑性，用途寬廣的多。在淀粉塑料的降解試驗(yàn)中，采用加富土壤淹埋法，篩選到的降解微生物主要是霉菌與放線菌。分離平板可采用該污染物為底物的鑒別培養(yǎng)基，通過水解圈變色圈進(jìn)一步提高篩選效率。除用凹玻片，還可用濾紙進(jìn)行單細(xì)胞或單孢子分離。將消毒后的子實(shí)體懸掛在支架上方，下方置一個(gè)已滅菌的去蓋的培養(yǎng)皿，然后罩一個(gè)鐘罩，周圍縫隙用凡士林封好。兩種方法的分離步驟、方法介紹如下：（1）多孢子分離法 取產(chǎn)量高、朵大、健壯無病并即將成熟的初生和單生子實(shí)體，用清水洗凈表面污物，對子實(shí)體外有膜保護(hù)著的菇類，如蘑菇、草菇，%～%升汞溶液浸泡2～3 min，用無菌水沖洗數(shù)次。將消毒后的組織移到平皿培養(yǎng)基上，置于適宜溫度（25～26℃）培養(yǎng)一定時(shí)間，即可在組織周圍四247。由于哺乳動(dòng)物不含幾丁質(zhì)，因此可先篩選抑制幾丁質(zhì)合成酶的生理活性物質(zhì)，再從中篩選所需抗生素。在這些方法中，檢驗(yàn)菌的選擇十分重要，直接關(guān)系到檢出的靈敏度和篩選到的抗生素的活性和抗菌譜。若被檢菌能分泌某些抑制菌生長的 物質(zhì)，如抗生素等，便會在該菌落周圍形成工具菌不能生長的抑菌圈，很容易被鑒別出來。培養(yǎng)基平板由兩層組成，％，％，％，％，待凝固后在其上覆蓋一層瓊脂，％。若平板上出現(xiàn)產(chǎn)酸菌，其菌落周圍會變成黃色，可以從這些產(chǎn)酸菌中篩選谷氨酸產(chǎn)生菌。在分離淀粉酶產(chǎn)生菌時(shí)，培養(yǎng)基以淀粉為惟一碳源，待樣品涂布到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)形成單個(gè)菌落后，再用碘液浸涂，根據(jù)菌落周圍是否出現(xiàn)透明的水解圈來區(qū)別產(chǎn)酶菌株。例如分離小單孢菌就可采用該方法，從河泥中取樣，風(fēng)干研碎，取樣品粉末20～50mg直接加到天門冬酰胺培養(yǎng)基中，混合均勻制成平板，培養(yǎng)后長出魚卵狀菌落。（一）稀釋涂布法 把土壤樣品以十倍的級差，用無菌水進(jìn)行稀釋，取一定量的某一稀釋度的懸浮液，涂抹于分離培養(yǎng)基的平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，長出單個(gè)菌落，挑取需要的菌落移到斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)。例如同樣一群以油脂為碳源的脂肪酶產(chǎn)生菌，有的是細(xì)菌，有的是霉菌，有的是芽孢桿菌，有的不產(chǎn)芽孢，有的生產(chǎn)能力強(qiáng)，有的生產(chǎn)能力弱等等。在分離除鏈霉菌以外的放線菌時(shí)，先將土樣在空氣中干燥，再加熱到100℃保溫1h，可減少細(xì)菌和鏈霉菌的數(shù)量。這時(shí)除了配置特殊的培養(yǎng)基外，還需準(zhǔn)備特殊的培養(yǎng)裝置，創(chuàng)造一個(gè)有利于厭氧菌的生長環(huán)境，使其數(shù)量增加，易于分離。通過該方法分離DDT、甲基對硫磷（MP）及其他一些污染物的分解菌，也都取得了滿意的結(jié)果。 根據(jù)微生物對環(huán)境因子的耐受范圍具有可塑性的特點(diǎn)，可通過連續(xù)富集培養(yǎng)的方法分離降解高濃度污染物的環(huán)保菌。 現(xiàn)舉兩例，如要分離水解酶產(chǎn)生菌，可在富集培養(yǎng)基中以相應(yīng)底物為惟一碳源，加入含菌樣品，給目的微生物以最佳的培養(yǎng)條件（pH、溫度、營養(yǎng)、通氣等）進(jìn)行培養(yǎng)。富集培養(yǎng)主要根據(jù)微生物的碳、氮源