【正文】 85℃滅菌30min，連續(xù)3天，經(jīng)無菌試驗證明無雜菌生長即可應用。 先將蛋白胨、氯化鈉、牛肉浸膏、葡萄糖和胱氨酸加水加熱溶解，加入瓊脂，高壓滅菌115℃15min備用。[用法] 凡急性患有水樣便標本做增菌培養(yǎng)的同時，應直接取標本接種到堿性瓊脂平板或亞碲酸鉀瓊脂平板上。 [配法]蛋白胨10g，牛肉膏 5g， 氯化納5g~10g，瓊脂 20g，膽鹽（牛、豬），蒸餾水1L。 [用途] 用于霍亂弧菌分離培養(yǎng)。[保存] 置4℃冰箱內(nèi)，1周內(nèi)用完。 8h后即可初步觀察結(jié)果。取乳糖10g置于已滅菌的肉膏湯瓊脂瓶內(nèi)，加熱溶解瓊脂并混勻。 (2)薔薇紅酸能抑制革蘭陽性細菌生長，但對大腸埃希菌沒有抑制作用，標本接種量不宜太多。大腸埃希菌、腸桿菌屬、克雷伯菌屬、枸櫞酸桿菌屬細菌可形成黃色、不透明菌落；大多數(shù)沙門菌屬細菌因不利用糖類，為半透明紅色或無色菌落。 [質(zhì)量控制]大腸埃希菌菌落呈紅色；痢疾志賀Ⅰ型、福氏志賀菌和傷寒沙門菌 生長良好，菌落無色；腸炎或豬霍亂沙門菌菌落呈黑色；糞腸球菌、金黃色葡萄球菌不生長。[質(zhì)量控制]大腸埃希菌菌落呈桃紅色；痢疾志賀菌菌落呈無色；傷寒沙門菌菌落 無色；金黃色葡萄球菌不生長。根據(jù)檢驗目的不同，挑取無色菌落或挑選紫紅色及有金屬光澤的菌落轉(zhuǎn)種克氏雙糖或三糖鐵瓊脂進行鑒定。斜面變紅，底層變黃，為不發(fā)酵乳糖菌株。分裝試管，每管4ml，經(jīng)115℃滅菌20min，立即置高層斜面，待凝固后，經(jīng)無菌試驗備用。注：該培養(yǎng)基pH 。EHEC O157﹕H7菌落無色。 [用途] 用于檢測細菌代謝類型。注：(1)有些細菌不能在上述培養(yǎng)基上生長，需在該培養(yǎng)基中加入2%血清或10g/L酵母浸膏，重做試驗。每天用解剖鏡檢查平板培養(yǎng)物，用略大于100角的斜射光源照明。注：1）多抗液的配制：①乳酸62mg(約2滴)加入100ml滅菌水中，然后加入TMP100 mg，混合加熱100℃滅菌。將上述成分（除羊血和抗菌補充劑外），加入900ml蒸餾水，加熱溶解，121℃滅菌15min，加入羊血和抗菌藥物添加劑，充分混勻后傾注于無菌平皿內(nèi)。如需觀察產(chǎn)氣，可在試管內(nèi)加小倒管1只。用間歇滅菌法滅菌，每天1次，連續(xù)3天，每次20min。 [質(zhì)量控制]糞腸球菌 ATCC 29212 陽性；化膿性鏈球菌ATCC 19615 陰性。并用滅菌的液體石蠟覆蓋，置35℃培養(yǎng)18~24h。[用法] 上述瓊脂傾注于載玻片上，凝固后，打孔，孔徑2cm，孔內(nèi)加入經(jīng)100℃15min隔水加熱處理后的肉湯培養(yǎng)物。待細菌生長成集落菌苔后，待片刻后，如待檢菌DNA酶陽性，可在菌苔的周圍出現(xiàn)明顯的透明圈；而陰性者則無透明圈出現(xiàn)。若用四甲基對苯二胺則陽性為藍色。[用法] 取培養(yǎng)物接種斜面，35℃孵育24h。將上述瓊脂加熱溶化，待冷卻至45℃時，加入濾過除菌的10g/L磷酸酚酞溶液1ml，搖勻后傾注平板。⑶ 酚酞指示劑產(chǎn)生的顏色隨其pH而變化，試劑的量要準確，太少或太多的堿均可引起假陽性或假陰性結(jié)果。如液面下降時以蒸餾水補充之。 [用法] ⑴ 玻片法：取18~24h培養(yǎng)物，置于清潔玻片上，加1滴3%過氧化氫溶液，如產(chǎn)生大量氣泡為陽性。 [質(zhì)量控制]大腸埃希菌ATCC 25922陽性；普通變形桿菌ATCC l3315陰性。[保存] 置4℃冰箱保存，2周內(nèi)用完。天然淀粉微溶于水，并不耐熱，切勿煮沸過度，防止淀粉水解。 [質(zhì)量控制] 無乳鏈球菌陽性；產(chǎn)氣腸桿菌陰性。三、碳源和氮源利用試驗培養(yǎng)基[用途] 用于無動力不產(chǎn)氣不發(fā)酵乳糖的大腸埃希菌與志賀菌屬的鑒別。 [質(zhì)量控制] 大腸埃希菌 ATCC 25922陽性；痢疾志賀I型 ATCC l3313 陰性。[保存] 置4℃冰箱，1周內(nèi)用完。注：⑴ 試驗菌株要新鮮。 [用途] 鑒定細菌對枸櫞酸鹽及無機銨的利用能力。因培養(yǎng)基上若存在葡萄糖或其它營養(yǎng)物質(zhì)可導致假陽性。 [質(zhì)量控制] 菌液不可太濃，否則結(jié)果不易觀察。分裝試管每管約4m1，121℃滅菌15min后備用。 ⑷ 沙門菌屬、假單胞菌屬的某些菌株，不但能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，而且還能使亞硝酸鹽繼續(xù)分解，生成氨和氮導致假陰性結(jié)果。[用法]將試驗菌接種于亞硝酸鹽培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)24~48h。⑵ 未接種的亞硝酸鹽培養(yǎng)基應以硝酸鹽試劑進行檢查，出現(xiàn)紅色反應方可使用。 注：若為初次觀察或培養(yǎng)基本身不易觀察，可轉(zhuǎn)種血瓊脂平板。注：⑴ CAMP為Christic,Atkins,MunchPetersen四人名?，F(xiàn)將兩培養(yǎng)基分述如下： ⑴ 醋酸鉛培養(yǎng)基 [配法]蛋白胨10g,蒸餾水1L將上述成分加熱溶解，~，分裝試管，每管液體高度為4~5cm，115℃滅菌20min。 [質(zhì)量控制] 鼠傷寒沙門菌ATCC l3311陽性；宋內(nèi)志賀菌ATCC ll060陰性?；撔枣溓蚓?ATCC l9615)陰性。 [質(zhì)量控制] 創(chuàng)傷弧菌陽性；親水氣單胞菌陰性。 [配法] 蛋白胨10g,氯化鈉5g,磷酸二氫鉀 ,磷酸氫二鈉 ,蒸餾水lL。氰化鉀培養(yǎng)基廢棄前(無論是否用過)，應作無害化處理：向每管加400 g/L 。觀察方法：（1）奧梅拉(OMeara)法 試劑： 氫氧化鉀 40g、蒸餾水100m1。試劑易失效，應用前應進行質(zhì)量控制。某些細菌如蜂房哈夫尼亞菌(哈夫尼腸桿菌37℃下孵育和奇異變形桿菌可產(chǎn)生MR和VP同時陽性反應，后者常延遲出現(xiàn)。注：⑴ 試劑和培養(yǎng)基在應用前要用已知陽性菌(如大腸埃希菌)和已知陰性菌(如克雷伯菌)做對照試驗。附：試劑配制⑴ 靛基質(zhì)柯氏試劑：對二甲氨基苯甲醛5g溶于異戊醇75ml中，待冷卻后慢慢加入濃鹽酸25ml。⑶ 國內(nèi)多采用柯氏試劑。 將上述各成分混合，靜置10min，待可溶物完全溶解后，121℃高壓15min滅菌。(4) NCCLS推薦淋病奈瑟菌用GC瓊脂平板，添加生長補充劑。[保存] 置4℃冰箱2周內(nèi)用完。 [用途] 用于血液、骨髓、胸水等標本的L型細菌增菌培養(yǎng)。 將各成分稱量混合加熱溶解后，~，分裝培養(yǎng)瓶，每瓶15m1，121℃滅菌15min備用。分裝每瓶80m1，121℃滅菌15min冷藏備用。覆蓋后置35℃10 %二氧化碳環(huán)境下3~5 天，逐日觀察。 2．蚌埠857分離平板 [配法] 牛肉浸液1L，氯化鈉40g，蛋白胨30g，明膠(生物試劑)30g，瓊脂粉5~8g。[保存] 置4℃冰箱內(nèi)使用l~2周。在上述增菌培養(yǎng)基上， L型細菌呈顆粒狀生長，顆?？烧掣接诠鼙诨虺恋碛诠艿?。第七節(jié) L型細菌培養(yǎng)基一、 L型細菌增菌培養(yǎng)基(一)高滲液體L型細菌菌增菌培養(yǎng)基[用途]可用作基礎培養(yǎng)。 將上述成分混合加熱溶解，校正pH 177。 [保存] 瓊脂平板應新鮮使用， 4℃冰箱保存，1周內(nèi)用完。但其不適用于肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌和奈瑟菌的抗菌藥物敏感試驗，這些的細菌須在常規(guī)的抗菌藥物敏感試驗培養(yǎng)基內(nèi)補充特殊的營養(yǎng)成分。 [質(zhì)量控制] 大腸埃希菌 ATCC25922 陽性；肺炎克雷伯菌 陰性。甲基紅試劑置密閉的棕色瓶內(nèi)，可使用3月。 [用途] 檢查細菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸的能力；用于鑒別某些細菌，如大腸埃希菌(陽性)、產(chǎn)氣桿菌(陰性)、陰溝桿菌(陰性)，克雷伯菌屬一般為陰性，耶爾森茵屬陽性，其它革蘭陰性非腸道桿菌陰性，單核李斯特菌陽性。且次序不能顛倒。（2）貝立脫 (Barritt)法 試劑甲液： 60g/L甲萘酚乙醇溶液；乙液：400g/L氫氧化鉀溶液。將上述成分混合溶解后，調(diào)pH至，分裝小試管， 121℃滅菌15min.置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩? [質(zhì)量控制] 銅綠假單胞菌ATCC 27853生長；福氏志賀菌不生長。[用法] 將待檢菌接種培養(yǎng)基，置35℃培養(yǎng)18~24h。 [配法] O/129 50mg溶于50ml無水乙醇中，取1ml加入100片直徑6mm的無菌濾紙片中，吸收后于37℃烘干備用。每片含Optochin 5μg或?qū)?mm的濾紙條浸于1﹕4 000的Optochin水溶液中，取出烘干備用。 ⑵ 硫酸亞鐵瓊脂 [配法]牛肉膏3g,酵母浸膏3g,蛋白胨10g,氯化鈉5g,瓊脂12g,蒸餾水lL。溶血素濾液做成紙條進行試驗效果亦較佳。群鏈球菌與上述劃線作垂直劃線接種,兩者不能相交，~ cm，于35℃培養(yǎng)18~24h。取新鮮豬(牛)膽若干只，取膽汁用沙布過濾，裝于瓶中115℃滅菌20min，冷卻后置4℃冰箱內(nèi)，次日取出吸取上清液備用。反之為陰性，說明培養(yǎng)基中尚有亞硝酸鹽存在。可以排除假陰性。 [質(zhì)量控制]大腸埃希茵ATCC25922 陽性；硝酸鹽陰性不動桿菌ATCC15038 陰性。⑵ 不能用一支培養(yǎng)管做多項試驗。 [配法] ，,硝酸鈉1g，待測物質(zhì)2~10g，蒸餾水1L。Simmons(西蒙)枸櫞酸鹽培養(yǎng)基斜面上有細菌生長，培養(yǎng)基由綠變成藍色為陽性，無細菌生長，顏色不變藍色為陰性；Christinsen(柯氏)枸櫞酸鹽培養(yǎng)基斜面呈紅色為陽性，顏色不變?yōu)殛幮浴? 將上述成分加熱溶解，然后分裝試管，每管2m1， 115℃滅菌15min，冷卻備用。[用法] 將試驗菌接種到斜面上，35℃培養(yǎng)7d，每天觀察1次。 取純培養(yǎng)物接種培養(yǎng)基中，35℃孵育24~48h。分裝試管，每管約3~4m1，經(jīng)121℃滅菌15min，4℃冷存?zhèn)溆?。建議將培養(yǎng)基置螺旋帽的試管中保存，臨用時加熱溶解傾注平板，冷卻后使用。 [用法] 取18~24h純培養(yǎng)物接種瓊脂平板，一般可接種幾個培養(yǎng)物。 [用途] 用于鏈球菌和白喉棒狀桿菌的分型鑒定。 [配法]DL苯丙氨酸2g，氯化鈉5g，酵母浸膏3g，磷酸氫二鈉1g，瓊脂12g,蒸餾水1L。 [配法] 氫二鈉緩沖液100m1； 試劑乙為 蛋白胨3g，蒸餾水300m1。：甘氨酸在茚三酮的作用下，經(jīng)氧化脫氨基反應，生成氨、二氧化碳和相應的醛。 三氯化鐵試劑：三氯化鐵12g溶于2 %鹽酸100ml中。注：⑴ 亦可用液體法進行試驗：經(jīng)培養(yǎng)后在培養(yǎng)基內(nèi)滴加氫氧化鈉溶液，觀察結(jié)果，顯紅色為陽性。 [用途]測定細菌產(chǎn)生磷酸酶的能力。 [配法]蛋白胨1g,葡萄糖1g,氯化鈉5g,磷酸二氫鉀2g,4g/L酚紅溶液3ml,瓊脂18~20g,200/L尿素溶液100ml,蒸餾水1L。[用途]區(qū)別假單胞菌與氧化酶陰性的腸桿菌科細菌。 [用途] 供細菌DNA酶測定用。精氨酸脫羧酶:鼠傷寒沙門菌陽性，普通變形桿菌陰性。 [配法] 蛋白胨5g,牛肉浸膏5g,吡多醛(VB6),蒸餾水1L。 [配法] 蛋白胨5g，牛肉浸膏3g，牛膽汁40g，七葉苷1g，瓊脂15g，蒸餾水1L。 [配法] 血清(兔血清或牛血清)25ml，1g/L酚紅溶液2ml，菊糖1g，蒸餾水75ml。 [配法] 蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉 5g，安德烈(Andrade)指示劑10ml，蒸餾水1L，各種糖(醇)類 5~10g。因此標本采集后，應盡快接種培養(yǎng)，或置運送培養(yǎng)基中運送。除血和抗生素外，其余成分混合于水中，加熱溶解，121℃滅菌15min。 上述成分除半胱氨酸及焦磷酸鐵外，其余成分混合加熱溶解，經(jīng)121℃15min 滅菌，放水浴中冷卻到50℃。[用法] 從斜面上挑取少許培養(yǎng)物，同時穿刺接種兩支培養(yǎng)基，其中一支接種后，滴加液體石蠟于培養(yǎng)基表面，高度約1cm。 [配法] 蛋白胨20g，無水硫酸鉀10g，瓊脂15g，甘油10ml，蒸餾水1L。經(jīng)121℃15min滅菌備用。產(chǎn)生硫化氫的菌株可使底層或整個培養(yǎng)基呈黑色。注:該培養(yǎng)基pH值尤為重要。 [配法] 蛋白胨20g,牛肉膏3g,酵母膏3g,乳糖10g,葡萄糖1g,氯化鈉50g,%酚紅溶液5ml,瓊脂12ml,蒸餾水1L。 [配法] 蛋白胨10g，乳糖10g，磷酸氫二鉀2g，20g/L伊紅Y溶液20ml，瓊脂17g，蒸餾水1L。 [配法] 蛋白胨20g，氯化鈉5g，膽鹽(豬、牛、羊)5g，乳糖10g，瓊脂15~20g，1%中性紅溶液5ml，蒸餾水1L。 [配法] 月示胨 5g，牛肉膏5g，乳糖10g，瓊脂15~20g，膽鹽()，枸櫞酸鐵1g，1% ，% ，蒸餾水1L。 [配法] 酵母浸膏3g,L賴氨酸5g,氯化鈉5g,1%酚紅溶液8ml,蒸餾水1L。 [質(zhì)量控制]大腸埃希菌ATCC 25922菌落呈藍色；痢疾志賀菌Ⅰ型ATCC 13313和鼠傷寒沙門菌ATCC 13311菌落呈淡紅色。⑵ 雷佛奴爾應避光保存，而且每批均應預試后方可使用。 [用途]用于霍亂弧菌分離培養(yǎng)。[用法] 將糞便標本或增菌培養(yǎng)物劃線接種到該平板上，置35℃培養(yǎng)16~18h。在16~18h后，霍亂弧菌的菌落，直徑可達2mm左右，呈扁平，青灰色，半透明，光滑濕潤，易挑起。[質(zhì)量控制] 各實驗室凡自配培養(yǎng)基或商品培養(yǎng)基,在使用前可用標準菌株生長對照，臨床實驗室可送防疫部門所設立的專門檢驗機構進行目的菌監(jiān)測,質(zhì)量可靠者方可使用。白喉桿菌能使亞碲酸鉀還原成金屬碲而形成黑色和灰黑色的菌落。 ⑵ 該