高中生物基因重組與基因工程大學(xué)-文庫吧在線文庫
【正文】 的各種酶類 。339。 C C C3 39。指來源不同，但具有 相同的識(shí)別 序列 。 A AAAAA339。339。339。 3 39。 可變酶 可變酶 識(shí)別順序中的一個(gè)或幾個(gè)堿基是可變的， 并且識(shí)別順序往往超過 6個(gè)堿基對。 339。 539。 dATP,dCTP,dGTP [? 32 P] dTTP E. coli DNA POL I ㈡ Klenow片段（ DNA ） Klenow片段用途 ⑴ 補(bǔ)齊雙鏈 DNA的 3ˊ 末端； ⑵ 用標(biāo)記堿基補(bǔ) 齊 3ˊ 末端 ； 聚合酶Klen ow DN A [ 32P]d NT Pα雙鏈 DNA粘端539。539。339。 ⒉ 用 32P標(biāo)記 539。羥基磷酸化 末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶 催化 339。 三、常用的載體 （一） 質(zhì)粒 (plasmid)： 是存在于細(xì)菌染色體外的、能自主復(fù)制的雙鏈環(huán)狀 DNA分子。 目的基因來源 1） 制備基因組 DNA 2） 制備 cDNA 3） 聚合酶鏈反應(yīng) 4） 人工合成基因 （一）制備基因組 DNA（基因 文庫， genomic library ） 分離 、 純化基因組 DNA 在 EDTA等存在下 ， 用蛋白 ↓ RE 酶 K消化細(xì)胞 、 酚抽提； 大小不同酶切片段 常用蔗糖梯度離心或電泳 ↓ 分離酶切片斷； 分別與同樣 RE酶切的載體連接 常用噬菌體載體或質(zhì)粒載體 ↓ DNA連接酶連接； 導(dǎo)入宿主細(xì)胞 、 擴(kuò)增 導(dǎo)入宿主細(xì)胞內(nèi)培養(yǎng) 、 擴(kuò)增； ↓ 得到分子克隆混合體 用分子雜交等方法進(jìn)行鑒定、 （基因文庫） 篩選、再擴(kuò)增，分離、回收。 （四）同源多聚尾連接法 三、重組 DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞（ 轉(zhuǎn) ） 無性繁殖 體外重組后的 DNA導(dǎo)入 受體細(xì)胞 ， 然后隨受體細(xì)胞生長 、 增殖 ， 使重組 DNA發(fā)生復(fù)制 、 擴(kuò)增 ， 這一過程稱為無性繁殖 。 抗生素平板篩選 （ 插入失活 ） 2. 藍(lán) 白 篩選 利用藍(lán)色化合物的形成作為 指示劑 ， 篩選帶重組質(zhì)粒的細(xì)菌 。但要揭示人類 4萬個(gè)基因功能的任務(wù)將更為艱巨。 2. 植入去核的卵細(xì)胞中 → 胚胎細(xì)胞 3. 將胚胎細(xì)胞植入寄養(yǎng)母體內(nèi)?！? 180?！? 180。端磷酸基 D. 使核酸片段的 5180?！? 180?！? 180?！? 180。 產(chǎn)品名稱 治療功能與醫(yī)藥范圍 1. 人胰島素 治療糖尿病 2. 人生長激素 治療侏儒癥 ， 加速創(chuàng)口愈合 3. α 干擾素 治療癌癥 、 病毒感染 4. β 干擾素 治療帶狀皰疹 ， 眼結(jié) 、 角膜炎 5. γ 干擾素 治療癌癥 、 病毒感染 6. 人組織纖溶酶原激活因子 (tPA) 溶解血栓 ， 治療急性心肌梗塞 7. 紅細(xì)胞生成素 (Epo) 治療腎病性貧血 ， 增加紅細(xì)胞及血色素水平 8. 超氧化物歧化酶 清除超氧化物 ， 治療關(guān)節(jié)炎 ， 緩解心肌壞死 9. 凝血因子 Ⅷ 治療 A型血友病 10. 乙型肝炎疫苗 防治肝炎 11. 神經(jīng)生長因子 維持神經(jīng)元細(xì)胞存活 、 生長和分化 12. 腦啡膚 鎮(zhèn)痛 13. 降鈣素 治療骨質(zhì)疏松癥 二、 生產(chǎn)蛋白質(zhì)和多肽類活性物質(zhì) 基因工程生產(chǎn)胰島素的原理（示意圖） 三、制備基因工程疫苗 基因工程疫苗可以幫助解決傳統(tǒng)技術(shù)難以解決的 一些特殊的病原體疫苗。 克隆基因表達(dá)有三個(gè)條件 ⑴ 基因的編碼區(qū)不能被插入序列中斷 。 感受態(tài)細(xì)胞有原核細(xì)胞和真核細(xì)胞兩大類。 （ 四 ） 人工合成基因 應(yīng)用 DNA測序儀測出某一基因的堿基序列 ， 或根據(jù)某一蛋白質(zhì)的氨基酸組成反推核苷酸序列 ， 再用 DNA合成儀通過化學(xué)合成原理合成目的基因 。AmpR→Amp 敏感 (AmpS )、TetR→Tet 敏感 (TetS). pUC系列質(zhì)粒 由 pBR322和 M13噬菌體構(gòu)建而成的雙鏈質(zhì)粒載體； （ 1） 2674bp； （ 2） 有 ampR和與 M13噬菌體 相同的多克隆位點(diǎn) （ MCS） （ 3） 有 1個(gè)來自 LacZ基因 片斷 , 編碼半乳糖苷酶 ，便于藍(lán)白篩選 (二 )λ 噬菌體 組成特點(diǎn) ： 雙鏈線狀 DNA分子， 全長 50kb， 含 66個(gè)基因，
醫(yī)療健康相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1