20xx年醫(yī)學(xué)專題—不同類型細(xì)胞的培養(yǎng)特點(存儲版)
【正文】 的動靜脈，保留心室肌；用組織塊或消化培養(yǎng)法均可。bāo)(神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(x236。,第四十八頁，共七十頁。)生存和分裂增殖。)法做傳代處理。n)建立的細(xì)胞系中癌細(xì)胞系是最多的。取材時盡量避免用退變組織，要挑選活力較好的部位。ng)細(xì)胞低，正常(zh232。r qiě)成纖維細(xì)胞常比腫瘤細(xì)胞生長得快，最終能壓制腫瘤細(xì)胞的生長。,2．反復(fù)貼壁法： 根據(jù)腫瘤細(xì)胞(x236。必要時可反復(fù)處理多次，直至癌細(xì)胞純化為止。ng)成纖維細(xì)胞對膠原酶較為敏感的特點，通過消化進(jìn)行選擇。 選用上述任何一種方法，都需進(jìn)行試驗，取得必要經(jīng)驗，找出適合的條件，才能獲得好的效果。,第六十六頁，共七十頁。ng)總結(jié),第六章 個別細(xì)胞和組織的培養(yǎng)。,。,內(nèi)容(n232。iyǎng)： 為提高腫瘤細(xì)胞對體外培養(yǎng)環(huán)境的適應(yīng)力和增加有活力癌細(xì)胞(干細(xì)胞) 的數(shù)量，可采用動物體轉(zhuǎn)嫁接種成瘤后，再從動物體內(nèi)取出進(jìn)行培養(yǎng)，能提高體外培養(yǎng)的成功率。iyǎng)。,4．膠原酶消化法： 本法是利用(l236。iyǎng)。i)； (2) 刮除：棄掉培養(yǎng)液，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無標(biāo)記空間； (3) 用Hanks 液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細(xì)胞； (5) 注入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)仍有成纖維細(xì)胞殘留，可重復(fù)刮除至完全除掉為止。,3．成纖維細(xì)胞的排除： 成纖維細(xì)胞常與腫瘤細(xì)胞同時混雜生長，致難以純化腫瘤細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞對血清的需求比正常(zh232。 初代培養(yǎng)應(yīng)用組織塊和消化培養(yǎng)法均可。,第二節(jié) 腫瘤(zhǒnglii)：獲取腦組織后，先仔細(xì)剝除腦膜和血管等纖維成分，置入Hanks 液中漂洗1 ~ 2 次后，置于30 ~ 50倍的Hanks 液中；腦組織比較柔軟，反復(fù)吹打即可制備成細(xì)胞懸液； (2) 排除脂肪成分和其它碎塊：把懸液注入離心管中，在室溫直立5 ~ 10 分鐘后，細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)塊自然下沉，脂肪等雜物易漂浮于懸液表層，吸除上清，如此反復(fù)二三次可獲較多的細(xì)胞成分；,第五十三頁，共七十頁。,(一) 初代培養(yǎng) 神經(jīng)元能發(fā)生一定分化現(xiàn)象，如生長突起，但因無增殖能力，最后衰退死亡；但神經(jīng)膠質(zhì)尤以星形細(xì)胞能繼續(xù)(j236。ngc,第四十六頁，共七十頁。,[程序] (1) 選新鮮受精雞卵，置溫箱中孵育(fū y249。數(shù)日后融合停止，此時能觀察(guānch225。 (1) 取材：殺死動物，無菌取大腿肌組織，切成0.3 ~ 0.5 厘米小塊； (2)消化：用不含鈣鎂離子的Hanks 液配的0.25％胰蛋白酶(y237。iyǎng)細(xì)胞，去除其它白細(xì)胞，接種數(shù)小時后，去除培養(yǎng)(p233。用40μg 的PHA 注入腹腔中，能產(chǎn)生6 ~ 8106 個細(xì)胞，而且無刺激性，效果較好。)培養(yǎng)，并可進(jìn)行純化。,第三十三頁，共七十頁。 用人或動物胚體為好；動物可用小鼠或雞胚，去頭和內(nèi)臟，剪成小碎塊后，用胰蛋白酶消化法培養(yǎng)；如為人胚，可取皮膚培養(yǎng)。)3T3等飼細(xì)胞；飼細(xì)胞接種量為4000 細(xì)胞／cm2； (5) 當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞充滿所有飼細(xì)胞空間后，用胰蛋白酶消化、離心、加入腫瘤條件培養(yǎng)基； (6) 接種入明膠底物皿中繼續(xù)培養(yǎng)(飼細(xì)胞死亡被淘汰)，細(xì)胞增殖生長匯合后，按1:5 傳代。zh236。,(3) 在細(xì)胞生長接近完全匯合時，收集培養(yǎng)液制成條件(ti225。 ɡuǎn)內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng),毛細(xì)血管(m225。 t243。 其它如胚胎和幼體動物的大血管，亦可用于培養(yǎng)； (2) 先用三通注射器吸溫PBS 液注入臍帶的臍靜脈中，洗除殘血；注入口處宜用線繩結(jié)扎，以防液體返流；,第二十頁，共七十頁。)離心管中，低速離心分離，用RPMI 1640 培養(yǎng)基培養(yǎng)(較其它培養(yǎng)基為好)，能獲得較純的肝上皮細(xì)胞和獲較好的效果。肝組織易于貼壁，生長力好，一般次日即可出現(xiàn)生長暈。 細(xì)胞接種后一般在16 小時內(nèi)貼壁，細(xì)胞呈多角形，成島狀或片狀生長，以后逐漸聯(lián)接成片。,第十一頁，共七十頁。,第八頁，共七十頁。 飼細(xì)胞作用： 有同化(t243。 純化和延長上皮細(xì)胞生存期是上皮細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵之一。nyīn)是它們是分化的細(xì)胞，對體外生存條件要求嚴(yán)格. 但只要一切條件適當(dāng)仍有培養(yǎng)成功可能。第六章 個別細(xì)胞和組織(zǔzhī)的培養(yǎng),第一頁，共七十頁。 正常細(xì)胞難培養(yǎng)的原因(yu225。)細(xì)胞生長； ②需求特殊培養(yǎng)基； ③與上皮細(xì)胞相鄰的成纖維細(xì)胞常與上皮細(xì)胞同時混雜生長，并常壓過上皮細(xì)胞。,【飼細(xì)胞】飼細(xì)胞(Feeder Cells)也稱滋養(yǎng)細(xì)胞，是一層經(jīng)過射線照射或絲裂霉素傷害處理的、用作克隆細(xì)胞附著底物的細(xì)胞層。)，胰蛋白酶消化細(xì)胞制成懸液，按5104/ml接種入新培養(yǎng)基中； (4)48 小時后，即可用于細(xì)胞克隆之用。)下來的表皮膜自身也已松散，此時亦可直接置入PBS 中用吸管吹打制備細(xì)胞懸液；不再經(jīng)過第二次消化。qīng)的完全培養(yǎng)基，接種入不同孔數(shù)的培養(yǎng)板中；接種量依不同實驗?zāi)康亩?。取新鮮肝臟，先剝除被膜和血管等纖維成分，用刀或剪刀把肝剪成1mm3 左右的小塊，采用貼壁培養(yǎng)法。 r249。iyǎng)可保存于4℃中，但不宜超過12 小時；無菌剪取長10 ~ 15 厘米一段。用兔血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)較好，可傳1
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