微生物學實驗[最終定稿](存儲版)
【正文】 求操作方法、步驟正確，能準確判斷結(jié)果。細菌在培養(yǎng)基中生長情況及細菌特殊結(jié)構(gòu)觀察（1）、正確描述固體培養(yǎng)基的菌落、菌苔。要求把題目和答案寫在實驗報告紙上，統(tǒng)一收齊后和第一次實驗報告一起送到我辦公室生科樓104。鏡檢：低倍鏡——定位；高倍鏡——觀察；油鏡——觀察鏡檢完畢后的工作：擦拭鏡頭（標本）等，還原顯微鏡，登記，洗手，離開。四、方法和步驟 取菌（要求無菌操作）——涂片——干燥——固定——染色（1min）——水洗——干燥——鏡檢（形狀、大小、排列方式）（1）表面形狀大小、顏色、邊緣、緊密程度等。（水浸片法）無菌水滴加于載玻片上——取菌——涂片——蓋上蓋玻片——鏡檢（10倍定位，40倍觀察芽殖）。掌握觀察曲霉、青霉的主要形態(tài)特征的制片方法。由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型，對營養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同。其他：牛皮紙、紗布、棉花、棉線繩。培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。平板分離法普遍適用于微生物的分離與純化，其基本原理是選擇適合于待分離微生物的生長條件，如營養(yǎng)成分、酸堿度、溫度和氧等要求，或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長，而抑制其它微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。器皿：移液管（1ml）、培養(yǎng)皿、試管、三角瓶、搪瓷缸、量筒等。比較青霉和曲霉屬霉菌的個體形態(tài)特點。比較酵母菌、放線菌和細菌的菌落特征。二、實驗材料菌種啤酒酵母，黑根霉，高大毛霉器材顯微鏡，載玻片，蓋玻片，接種鉤，酒精燈，無菌水，乳酸苯酚，吸水紙等。細菌常用堿性染料來進行簡單染色，這是因為在中性，堿性或弱酸性溶液中，細菌細胞通常帶負電荷，而堿性染料在電離時，其分子的染色部分帶正電荷，很容易使細菌結(jié)合使菌體著色，經(jīng)染色后的細菌細胞與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易于識別。α為鏡口角。補考成績通過后只計及格。液體和半固體培養(yǎng)基的細菌接種方法（無菌操作）（1）、將菌種接種到液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基內(nèi)。（2）、掌握血清對倍稀釋的原理及方法，能正確使用刻度吸管。帶菌材料的處理：含菌培養(yǎng)基應(yīng)滅菌后再作為垃圾處理。每次實驗前預習實驗的目的、原理和方法，做到心中有數(shù)。測定完畢后，取出試管置37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。圖15—5 帶側(cè)臂試管的三角燒瓶(三)器材1．菌種 大腸桿菌2．培養(yǎng)基 LB液體培養(yǎng)基70ml，分裝2支大試管(5ml/支)，剩余60ml裝入250ml的三角瓶。以培養(yǎng)時間為橫坐標，以細菌數(shù)目的對數(shù)或生長速率為縱坐標作圖所繪制的曲線稱為該細菌的生長曲線。2．樣品測定將待測樣品用無菌生理鹽水適當稀釋，搖均勻后，用560nm波長、lcm比色皿測定光密度。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經(jīng)過最大吸收波長以及穩(wěn)定性試驗來確定。在一定的范圍內(nèi)，微生物細胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光密度或透光度可以由光電池精確測出(圖154)。一般以三個連續(xù)稀釋度中的第二個稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個左右為好，否則要適當增加或減少稀釋度加以調(diào)整。圖15—3平板菌落計數(shù)操作步驟4．倒平板．盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基約15毫升/平皿，置水平位置迅速旋動平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻，而又不使培養(yǎng)基蕩出平皿或濺到平皿蓋上。另取一支lml吸管插入10?1試管中來回吹吸菌懸液三次，進一步將菌體分散、混勻。2．培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基。二平板菌落計數(shù)法（一）目的要求學習習近平板菌落計數(shù)的基本原理和方法。如遇酵母出芽，芽體大小達到母細胞的一半時，即作為兩個菌體計數(shù)。3．加樣品將清潔干燥的血細胞計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自動進入計數(shù)室，一般計數(shù)室均能充滿菌液。每一個大方格邊長為lmm，則每一個大方格的面積為lmm2，蓋上蓋玻片后，(萬分之一毫升)。但此法的缺點是所測得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和。本實驗主要介紹生產(chǎn)、科研工作中比較常用的顯微鏡直接計數(shù)法、平板菌落計數(shù)法和光電比濁計數(shù)法?？傊?，測定微生物生長量的方法很多，各有優(yōu)缺點，工作中應(yīng)根據(jù)具體情況要求加以選擇。顯微鏡直接計數(shù)法的優(yōu)點是直觀、快速、操作簡單。計數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格(圖15—2)；另一種是一個大方格分成16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格，但無論是哪一種規(guī)格的計數(shù)板，每一個大方格中的小方格都是400個。若有污物，則需清洗，吹干后才能進行計數(shù)。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。各中格中菌數(shù)AB二室平均值菌數(shù)/ml12345第一室第二室2．思考題(1)根據(jù)你的體會，說明用血細胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面?應(yīng)如何盡量減少誤差．力求準確?(2)某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請設(shè)計1～2種可行的檢測方法。（三）器材1．菌種 大腸桿菌菌懸液。OptionsEmail Replies將101試管置試管振蕩器上振蕩，使菌液充分混勻。，這樣容易加大同一稀釋度幾個重復平板間的操作誤差。平板菌落計數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。二、基本原理當光線通過微生物菌懸液時，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過量降低。因此，對于不同微生物的菌懸液進行光電比濁計數(shù)應(yīng)采用相同的菌株和培養(yǎng)條件制作標準曲線。比色測定時，用無菌生理鹽水作空白對照，并將OD值填入下表管號12345678細胞數(shù)106/ml光密度（OD）每管菌懸液在測定OD值時均必須先搖勻后再倒入比色皿中測定(4)以光密度(OD)值為縱坐標，以每毫升細胞數(shù)為橫坐標，繪制
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