16基因工程和蛋白質(zhì)工程(存儲(chǔ)版)
【正文】 二節(jié) 基因工程 DNA重組 的 技術(shù)路線 Foreign DNA to be inserted Plansmid vector Joining Rebinant DNA molecule Introduction into host cells by transformation Host chromateme Slection for cells coteining a rebinant DNA molecule Cloning + 目的基因的制備 載體 的構(gòu)建 目的基因與載體的重組 重組 體 導(dǎo)入 宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增 克隆基因的鑒定 一、目的基因的獲得 二、基因載體 三、重組 DNA的篩選及表達(dá) 一、目的基因的獲得 ——特異性切割 DNA的手術(shù)刀 ——分離法及合成法 1. 限制性內(nèi)切酶 DNA重組 即是將兩種 DNA分子經(jīng)過切割，選擇適合的片段連接起來的過程 實(shí)現(xiàn)這一步，是在限制性內(nèi)切酶發(fā)現(xiàn)以后才實(shí)現(xiàn)的 限制性內(nèi)切酶：一類核酸內(nèi)切酶，可以將外源 DNA在特定位點(diǎn)切割降解 。 研究比較深入的質(zhì)粒有大腸桿菌的性因子（ F因子）、大腸桿菌素因子和抗藥因子等 抗藥因子（質(zhì)粒）在其 DNA上編碼有某些酶的基因，表達(dá)產(chǎn)生的酶對(duì)鏈霉素、氯霉素、磺胺、青霉素、四環(huán)素、卡那霉素等藥物能產(chǎn)生生物化學(xué)修飾，使之鈍化而失效 ——染色體以外的遺傳單元 質(zhì)粒的作用 質(zhì)粒 DNA能從細(xì)菌中提出來，又能再轉(zhuǎn)入細(xì)菌。 我們常常采用 ?噬菌體作為基因工程的載體，其一它的遺傳結(jié)構(gòu)與功能知道得比較清楚；其二是易于使細(xì)胞感染，易于使外源 DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞。 （ 3） R環(huán)檢測(cè)法 在有利于形成 R環(huán)的條件下，使待檢測(cè)的純化的質(zhì)粒 DNA，在含有 mRNA的緩沖液中局部變性。然后由 DNA聚合酶延伸引物，由 DNA連接酶將雙鏈再連接成環(huán)，轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞復(fù)制，即產(chǎn)生兩種子代質(zhì)粒。 于是用人工合成一段寡聚核苷酸引物，引物里含有 TGT外，其余均與基因部分互補(bǔ)。 ?噬菌體感染大腸桿菌的途徑 +要插入的外來 DNA質(zhì)粒載體連接重組 DNA 分子經(jīng)轉(zhuǎn)化或病毒感染導(dǎo)入宿主細(xì)胞對(duì)含有重組 DNA分子的選擇無性繁殖（克?。┲亟M DNA 分子合成和克隆過程宿主染色體 ——從大量受體細(xì)胞選出帶有重組體 的細(xì)胞 （ 1）插入失活法 （ 2）放射性探針檢測(cè)法 （ 3） R環(huán)檢測(cè)法 （ 4）免疫測(cè)定法 （ 1）插入失活法
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