【正文】 成低導電區(qū)，有較高的電位梯度，促進蛋白質(zhì)和慢離子的移動，使蛋白質(zhì)樣品被壓縮為一薄層。 經(jīng)染色后，首先應仔細觀察有無異常區(qū)帶。:7% 是利用具有線性 pH梯度的兩性電解質(zhì)為載體，分離等電點不同的蛋白質(zhì)等兩性分子的一種電泳新技術。在電泳系統(tǒng)中建立一個從正極到負極， pH由低到高的連續(xù)而穩(wěn)定的 pH梯度。（ 2） 各成分的 pI彼此接近，并在 pI附近有良好的緩沖能力。 （三） Western第四節(jié) 層析技術 層析法又稱色譜法、色層分離法， 1906年由俄國植物學 Jauett首先用于植物色素的分離提取而得名。如水、某些溶劑和氣體。氣相層析液相層析氣固層析氣液層析液固層析液液層析層析法固定相是液體利用各組分化流動相和預止液相同（固定相）中的分配系數(shù)不同的分離。（ 3）離子交換層析法（ IEC） 利用各組分生物學特殊性不同而建立的一種層析方法，固定相工能和一種待分離成分類一結(jié)合，使其與其他物質(zhì)分離，如利用抗原、抗體的結(jié)合來分離相應的抗原或抗體。（ 1）柱層析法（ CC） 固定相裝于柱內(nèi)，使樣品沿一個方向移動向到分離。將顆粒狀的固定均勻地鋪在薄板上，點樣后用流動相展開。（一）薄層層析在生化檢驗中的應用常稱為活度，主要受吸附劑含水量的影響，含水量高活度低，從強到弱分為 I、 Ⅱ 、 Ⅲ 、 Ⅳ 、 Ⅴ 5級，活度強吸附作用強，一般分離水溶性物質(zhì)活度弱些，而分離脂溶性物質(zhì)活度要強些。即展開劑，展開劑的選擇是薄層層折中又一關鍵，一般極性大的化合物需用極性大的展開劑。制成的板要求涂布均勻，晾干、活化。（二）凝膠層折在生化檢驗中的應用 固定相是多孔凝膠，商品凝膠是干燥顆粒，當吸收一定量液體后溶脹成一種柔軟而富有彈性、不帶電荷、不與溶質(zhì)互作用的惰性物質(zhì)，由于凝膠有一定孔徑，對分子大小不同的組分的阻滯作用不同。穩(wěn)定性好，不溶于水，但在酸性條件下糖易水解，由于分子中會有大量羥基，因此有很大的吸水性，吸水后溶脹成透明，而且有三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的彈性顆粒，孔徑的大小與交聯(lián)度有關，交聯(lián)度大，孔徑小、吸水量小，商品膠型號多以吸水量 10倍表示，如每克干膠吸水量為 ，即為 G25型，最常用的交聯(lián)葡聚糖商品名為 Sephadex。 2B、 4B、 6B，數(shù)字表示瓊脂糖含量（ W/W ）。Vo和 Vi的比值，分離時需維持一定的靜水壓，孔徑愈大，最高靜水壓愈低，如 G10，最高靜水壓 100cm，而 G100、35cm。廣泛用于酶蛋白質(zhì)、 AA、核苷酸多糖、激至少、抗生素、生物堿等物質(zhì)的分離提純。liguid在臨床生化檢驗中 HPLC已用于類同醇激素、兒茶酚胺的測定，同工酶的分離，治療藥物的監(jiān)測和篩選。（一）按機械設計原理分類第三代前兩者屬于回順序分析，因化離心力的作用下，各樣品與試劑幾乎是同時被混合，反應并被測定。（二）按同時可測項目分類可往意編程的可根據(jù)使用者的需要進行程序的更改、變換、增減。放置待測樣品、標準品、質(zhì)控品 透析器，去蛋白本章小結(jié)1.5.4.1.3.可見分光光度法（光吸收定律、比色分析儀器、比色分析的特點及比色分析的定量方法）；原子吸收分光光度法。各種有關試劑分層鋪在一薄膜內(nèi)，膜分 4層，涂布層、去蛋白。（四）干片式分析儀離心轉(zhuǎn)頭是這類分析的特殊結(jié)構(gòu)。（三）離心式自動生化分析儀分為固定程度序和可往意編程的兩類。（四）測定按測定程序可否改變分類中型的有單通道也有多通道，單通道的可用更換程序而更換測定項目，可選幾十次，多通道的則可用時測定 2～ 10個項目，但一般只能測定臨床常規(guī)生化項目，而大型的則往往可同時測定 10個以上項目，且分析項目可自由選擇、組合。 （ 3）用于分離提純 如蛋白質(zhì)的稀溶液需要濃縮時，可加入葡聚糖 G25或 G50的干膠，蛋白質(zhì)稀溶液中的水份及小分子物質(zhì)進入凝膠顆粒內(nèi)部孔隙中，蛋白質(zhì)則在顆粒外，將溶脹后的凝膠分離除去，得到濃縮的蛋白質(zhì)濃液。大分子物質(zhì)溶液粘度隨濃度增大而增大，而影響分離效果，一般將粘度控制在 5cp（厘泊）以下，樣品體積小于凝膠總體積的 5％～ 10％。（ 1）柱直徑與長度 常用的凝膠有葡聚糖、凝膠、聚丙烯酰凝膠和瓊脂糖凝膠。等溶劑揮發(fā)后，用相應顯色劑顯色。（ 2）點樣 干法、濕法和燒結(jié)法。為吸附劑，常用的有硅膠、氯化鋁、硅薄土纖維素等，固定相選擇時應考慮的因素。（ 4）薄膜層析法（ TFC） 用高分子有機吸附劑制成薄膜，以類似紙層析的方法進行物質(zhì)的分離。固定相為多孔性凝膠，利用各組分分子大、形狀不同在凝膠中受阻滯的程度不同而分離。層析法是利用待分離物質(zhì)中不同組分的某些理化性質(zhì)（在兩相中溶解、吸附、紊和作用等）的差異而建立起來的一種分離技術。轉(zhuǎn)移電泳的優(yōu)點 :轉(zhuǎn)移電泳技術包括三個步驟1979年 Towbinbolt通常將等電聚焦電泳為第一相電泳，以 SDS聚丙烯酰胺凝膠為第二相電泳。（ 4） 對 280 ② 有一個抗對流的材料，防止已分離樣品重新混合。 γ:15%總蛋白 75蛋白質(zhì)電泳的定量分析通常以各區(qū)帶占總量的百分率表示 聚丙烯酰胺凝膠電泳大多屬于不連續(xù)電泳。 垂直式根據(jù)凝膠系統(tǒng)和緩沖液組成 核黃素 TEMED系統(tǒng)，核黃素經(jīng)光照被還原成無色核黃素，在和痕量氧的條件下，無色核黃素又被氧化成核黃素自由基，使 Acr活化，從而引發(fā)聚合。催化系統(tǒng)引發(fā)劑 1.透明度好，電泳后可直接掃描定量，也可烘干制成薄膜。優(yōu)點： 對蛋白質(zhì)吸附作用很小，分辨率高，區(qū)帶清晰，不吸附燃料，區(qū)帶周圍燃料可完全清掉，檢測靈敏度較高，樣品用量少 ~2μl，電泳時間短 20min~1小時，可透明，便于用光密度掃描儀定量。電泳過程中液體對固體支持物的相對移動稱為電滲。對支持介質(zhì)的基本要求是具有化學惰性，不與被分離的樣品或緩沖液起化學反應，并具有一定的堅韌度。 I=I=I的單位是 mol/L。22）乘積總和的 1/2。 （ 4）緩沖液的離子應該是一價的，多價離子有較厚的雙電層，移動性差。選擇緩沖液時應考慮的因素：由弱酸和弱酸鹽組成，常用的有磷酸鹽，硼酸鹽，巴比妥鹽和三羥甲基氨基甲烷（ Tris）等，其中巴比妥緩沖液用的最多，由巴比妥鈉和巴比妥組成。電泳槽的外形有水平式，垂直式，圓盤式等多種。 （ 2）恒流電泳 電泳過程中的電壓恒定不變。ddA=→（二） 1948年 Wieland 發(fā)明紙電泳，使電泳技術大為簡化。電泳的概念溶液 pH值可影響被測離子在溶液中的存在形式，從而影響相應離子的活度，如 LaF3電極測定 F－ Nernst公試中的斜率，內(nèi)參比電極的電信號，以及離子活度等都與溫度有關，因此在整個測量過程中應保持溫度恒定。四、四、 IES的分析定量方法的分析定量方法是指電極對待測離子和共存干擾離子的響應程度的差異。它由離子敏感膜和覆蓋在表面含有酶的酶涂層膠組成，敏感膜對待測物的酶促反應有選擇性響應，如尿素酶電極。流動載體電極 剛性基質(zhì)電極 膜的內(nèi)表面與具有相同離子的固定濃度溶液接觸，其中插入一內(nèi)參比電極，當膜的外表面與待測離子溶液接觸時，引起膜電位的改變。分析速度快 ，單次分析通常只 1～ 2minelectode熒光分析法在醫(yī)學檢驗中可用于測定類固醇激素（腎上腺皮質(zhì)激素）及代謝產(chǎn)物，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)（兒茶酚胺， 5HT）某些維生素（ VitA， B族）。③ 儀器價格較貴自動記錄光度計 檢流計(400～ 760nm)鎢燈 光電管 (二面透光 )鎢燈 測定池 ① 選擇性好 優(yōu)點：2.基本原理 主要是通過對待測陽離子的電離度產(chǎn)生影響，造成發(fā)射時強度的改變。 2.按單組分測定方法各組分吸收峰不相互重疊1.C3.1.三、比色分析的特點2.3.當液層厚度不變時，吸光度與溶液濃度成正比，這就是 Beer定律。層析技術第五節(jié) 第五章 常用生物化學檢驗技術第一節(jié) 用于比色分析的光源與被測溶液的顏色應為互補色。 C。光電管或光電倍增管測定快速、簡便。四、比色分析的定量方法6注意事項當待測液吸光度超過線性范圍時，應將標本稀釋后再測定。例： 已知維生素 B12的水溶液在 361nm波長處的 ε為 28056， 2ml維生素 B12的水溶液用蒸餾水稀釋到 4ml，用 1cm比色杯測得溶液的吸光度