北京大學(xué)單分子與納米生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室(存儲(chǔ)版)
【正文】 量狀態(tài)在光學(xué)分析中涉及的分子能量有： Eo=Ee+ Ev + Er Ee：價(jià)電子運(yùn)動(dòng)能 , electron Ev：原子在平衡位置附近的振動(dòng) ,vibration Er：分子繞其重心的轉(zhuǎn)動(dòng)能 , rotation 其中， ?Ee ?Ev ?Er（一） 熒光的產(chǎn)生2 分子的能級(jí) Energy Levels與躍遷 Transition（ 二）熒光光譜與吸收光譜熒光分光光度術(shù)： 又稱(chēng)熒光光譜術(shù)，屬于光譜技術(shù)中的一種 發(fā)射光譜術(shù) 。（ 3） 燈有壽命，要節(jié)約使用。 F=Ia? Ia=I0I， I=I010εcL F = ? I0(110εcL ) {當(dāng) C很低時(shí) F= ? I0εcL ， {當(dāng) C較大時(shí) F=I0? B ?=發(fā)射光子數(shù) /吸收光子數(shù) 2 熒光強(qiáng)度（ fluorescence intensity, F, I ）與 量子產(chǎn)率（ quantum yield, ? ）（二）熒光分光光度術(shù)中的參量熒光強(qiáng)度與濃度的關(guān)系3 熒光偏振 ( fluorescence polarization)（二）熒光分光光度術(shù)中的參量自然光 部分偏振光 偏振光I//I?I//+I?P=I//I?I//+2I?A=熒光偏振度 Fluorescence polarization p 熒光各向異性 Fluorescence anisotropy A(1) 熒光偏振度的物理意義：A ： I//=I? ， P=0，自然光，熒光分子運(yùn)動(dòng)很快，取 向隨機(jī)。 在 20300C的范圍內(nèi)，溫度系數(shù)大約為 。用殺鼠靈滴定 HSA Scatchard圖r = [L] Ka (n r) [L] = [L0] – [LP] = [L0] – r[P0]λex=320nm λem=400nm2 用熒光強(qiáng)度變化檢測(cè)結(jié)合程度（五） 大分子內(nèi)基團(tuán)間或分子間距離的測(cè)定熒光共振能量轉(zhuǎn)移( Fluorescence Resonance Energy Transfer, FRET)熒光共振能量轉(zhuǎn)移的三個(gè)條件：供體和受體都能發(fā)光供體的發(fā)射譜和受體的激發(fā)譜必須有部分重疊供體和受體的距離必須小于 100197?！ A性介質(zhì)中，鳥(niǎo)嘌呤有熒光２嘧啶及衍生物游離的胸腺嘧啶有自發(fā)熒光，但量子產(chǎn)率極低 Φ＝ 3 核酸的熒光標(biāo)記Probes ?ex ?em NoteEthidium Bromide 545 610非透膜，RNA,DNAPropidium Iodine 530 615POPRO1 iodine 435 455Acridine Orange 490 590透膜，RNA,DNAPyronin Y 545 580Bisbenzimide 345 460 透膜， DNA（四） 利用熒光技術(shù)檢測(cè)分子間結(jié)合程度1 用熒光偏振 變化 檢測(cè)結(jié)合程度當(dāng)一些小分子，如輔酶、輔基、半抗原等與特異蛋白質(zhì)反應(yīng)時(shí)，改變其熒光特性（強(qiáng)度與偏振）
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