【正文】 已批準(zhǔn)上市的 重組 細(xì)胞因子藥物 IFNα 白血病、 Kaposi肉瘤、肝炎、癌癥、 AIDS IFNγ 慢性肉芽腫、生殖器疣、過敏性皮炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 GCSF 自身骨髓移植、化療導(dǎo)致的粒細(xì)胞減少癥、 再生障礙性貧 血 GMCSF 自身骨髓移植、化療導(dǎo)致的血細(xì)胞減少癥、 再生障礙性貧血 Epo 慢性腎衰導(dǎo)致貧血、癌癥或癌癥化療導(dǎo)致的貧血 、 失血后貧血 IL2 癌癥、免疫缺陷、疫苗佐劑 IFNβ 多發(fā)性硬化癥 IL11 放化療所致血小板減少癥 SCF 與 GCSF聯(lián)合應(yīng)用與外周血干細(xì)胞移植 EGF 外用藥治療燒傷、潰瘍 bFGF 外用藥治療燒傷、外周神經(jīng)炎 FDA批準(zhǔn)上市的細(xì)胞因子 抑制劑 ? 美國 FDA2022年 11月批準(zhǔn)上市的 IL1ra（ Kineret），治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 治療： 炎癥和自身免疫??； T細(xì)胞淋巴瘤、白血病； 移植排斥等 白喉毒素片段（ 389aa） IL2 治療 T細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞因子免疫毒素 DAB389IL2結(jié)構(gòu)示意圖 我國已批準(zhǔn)進入臨床的基因治療項目： P53腺病毒治療腫瘤（批準(zhǔn)上市） IX因子基因治療血友病 缺失突變腺病毒（ H101）治療腫瘤 VEGF裸 DNA治療梗塞性外周血管病 TK基因治療惡性腦膠質(zhì)瘤 IL2基因瘤苗治療胃癌 XSCID的 IL2受體 ?鏈基因治療（ 2022年法國報道 2例，迄今 11例， 10例成功）。 ? 1 增強細(xì)胞免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子 ? IFNγ ， IL2， IL12， IL15或 IL18會降低 IgGl/IgG2的比例，顯示 Thl傾向性，同時加強遲發(fā)型超敏反應(yīng)（ delayed type hypersensitivity,DTH） 和升高 CTL反應(yīng)。 。正如傳統(tǒng)疫苗可通過添加佐劑來增加其免疫作用一樣，基因工程疫苗也可通過添加佐劑來達到增強免疫作用的目的。 細(xì)胞因子的臨床應(yīng)用舉例 重組細(xì)胞因子 ： IFNα 治療肝炎； GMCSF,GCSF治療白細(xì)胞減少。 ? Transwell ? 將 Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上室內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。 細(xì)胞因子的檢測 ? 用于判斷機體免疫功能，進行疾病輔助診斷，判斷病程，預(yù)后，評價治療效果 細(xì)胞因子檢測常用方法 ? 生物活性檢測法 (biossay)檢測細(xì)胞因子的生物學(xué)活性 ? 免疫學(xué)檢測法 (immnuossay)檢測細(xì)胞因子蛋白質(zhì)的抗原特性 ? 分子生物學(xué)檢測法 檢測細(xì)胞因子的 mRNA表達 生物 活性 檢測法 ? 增殖實驗 ： 應(yīng)用某一細(xì)胞因子能特異刺激或抑制某些指示細(xì)胞的增殖 ,通過 [3H]TdR攝入 ,MTT,反應(yīng)待測細(xì)胞因子的活性水平 。 細(xì)胞因子與臨床 ? 細(xì)胞因子及受體缺陷 ? 細(xì)胞因子過高表達 ? 可溶性受體水平升高 ? 炎癥性細(xì)胞因子 ? 近年來炎癥性細(xì)胞因子由于其在介導(dǎo)炎癥炎癥和許多疾病中的關(guān)鍵作用而備受關(guān)注，主要是 IL1 TNFα、 IFNγ、 IL6和 IL1β等。 （ 4） NK：促分化（ IL15）；促殺傷（ IL2, 12, 15, 18）。 造血干 /祖細(xì)胞： IL3， SCF。 72: 97–110 （二） 細(xì)胞因子受體的幾個特點 ? 兩個或更多細(xì)胞因子受體亞單位組成異聚或多聚體形式，包括一特異性配體結(jié)合（ a鏈，低親和力受體）和一個參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)鏈（ ?鏈，參與高親和力受體形成和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)）。 CC C C C1C3C2 C1C3C2 C1C3C2 C1C3C2 G 蛋白 I類細(xì)胞因子受體 II類細(xì)胞因子受體 TNFR 趨化因子受體 ： （ 造血因子受體家族） 2.Ⅱ 型細(xì)胞因子受體家族：（干擾素受體家族） 3.Ⅲ 型細(xì)胞因子受體家族：（腫瘤壞死因子受體家族） （ CKR）家族： （ I類） ? 結(jié)構(gòu)特征：是細(xì)胞因子受體中最大的一個家族，多數(shù)成員屬于多亞單位受體，其中一種或兩種亞單位多肽負(fù)責(zé)結(jié)合細(xì)胞因子 ? 膜外區(qū)序列結(jié)構(gòu)相似于 EpoR,即膜外 N端含 4個高度保守 Cys,近膜側(cè)含 1個TrpSerXaaTrpSer(WSXWS)的基序 D200 (II類細(xì)胞因子受體家族 ) ? 結(jié)構(gòu)特征：兩條肽鏈組成，胞外區(qū) Fn3樣結(jié)構(gòu)域由 200個氨基酸殘基組成，也稱 D200，并含有 4個不連續(xù)的半胱氨酸，包括 IFN和IL10受體 7個 aa 22個aa IL10 TNF a TNF ? CD40L Nerve growth factor (NGF) FASL 3. TNFR超家族 ? 主要包括： TNF、 Fas、 CD神經(jīng)生長因子受體 等 ? 結(jié)構(gòu)特征： 這類受體富含半胱氨酸，在與細(xì)胞因子結(jié)合后三聚體化。 細(xì)胞出現(xiàn)遷移和運動能力。 ? 分子結(jié)構(gòu)和編碼基因 ? 1985年克隆成功 ,哺乳動物有 : TGFβ1, TGF β2, TGFβ3, TGF β4 四個亞型 ,前三種為同源二聚體分子 PreproTGFβ Pre proTGFβN pro TGFβ TGFβ( 有活性 ) TGFβ 的產(chǎn)生 機體多種細(xì)胞都可分泌非活性狀態(tài)的 TGFβ 。 TNF主要有 2種： TNFα: 巨噬細(xì)胞產(chǎn)生； TNFβ: 又稱為淋巴毒素 α(lymphotoxin α ， LTα ），主要由活化 T細(xì)胞產(chǎn)生； TNFα 和 TNFβ 共用受體，功能相似。有抗病毒、抗腫瘤的活性，但免疫調(diào)節(jié)的作用比 IFNα/β 重要的多，有較嚴(yán)格的種屬特異性。 ? 根據(jù)刺激不同造血細(xì)胞系或不同分化階段的細(xì)胞有不同的命名 GCSF(粒細(xì)胞集落刺激因子 ) ? 1983年命名 ,1986年克隆成功 . ? 人 GCSF基因位于 17號染色體 , ? 人類有兩種不同的 GCSF DNA,分別編碼含 207和 204個氨基酸的前體蛋白 ,均有 30個氨基酸的先導(dǎo)序列 ,除了在 35位插入了 3個氨基酸外 ,其余序列相同 . ? 有 5個半胱氨酸 36=42,64=74,17游離 . ? 來源 ? 多種細(xì)胞可產(chǎn)生 – 內(nèi)毒素、 TNFα 、 IL IFNγ 活化單核 /巨噬細(xì)胞可產(chǎn)生， – 刺激成纖維、內(nèi)皮細(xì)胞也可產(chǎn)生， – 某些腫瘤細(xì)胞可產(chǎn)生 生物學(xué)活性 ? 主要作用于中性粒細(xì)胞譜系造血細(xì)胞的增殖、分化和活化 ? 對人粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、成纖維、平滑肌細(xì)胞等有趨化作用。 TCPA ( T colonypromoting activity )。 EDF ( eosinophil differentiation factor )。 5 26 11 1Ra 目前的新細(xì)胞因子克隆化策略主要利用反向生物學(xué)原理，從人類基因組發(fā)現(xiàn)新細(xì)胞因子或其受體編碼基因。 怎樣確定一種物質(zhì)是細(xì)胞因子？ ? 從人類基因組發(fā)現(xiàn)新細(xì)胞因子 由于體內(nèi)含量較高的細(xì)胞因子大部分已被克隆化，傳統(tǒng)的路線已經(jīng)難以發(fā)現(xiàn)新免疫分子。 白細(xì)胞介素的分類 ? IL1 家族： IL1α/β 21 (共用 γ受體鏈 ) ? IL6 家族 IL6 24 1 Costimulator 。 TCGF ( Tcell growth factor )。 促進殺傷細(xì)胞分化和效應(yīng)： CTL， NK， LAK； 誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞： IFNγ ， TNFα 產(chǎn)生，增強 CTL穿孔素表達 直接、間接作用于 B細(xì)胞 ：促進增殖分化， Ig分泌 促進巨噬細(xì)胞通過 ADCC機制殺傷腫瘤 IL2主要生物學(xué)活性 ? 白細(xì)胞介素 2超家族 : one important family of type I cytokines is the mon cytokine receptor γchain (γc) family, which consists of IL2, IL4, IL7, IL9, IL15 and IL21, and is so named because the receptors for these cytokines share γc (also known as IL2Rγand CD132) Yrina Rochman et al. Nature ： 480490 (ColonyStimulating Factor, CSF) ? 能夠刺激多能造血干細(xì)胞和不同發(fā)育階段的造血祖細(xì)胞增殖分化，并在半固體培養(yǎng)基中形成相應(yīng)細(xì)胞集落的細(xì)胞因子。 免疫調(diào)節(jié)：上調(diào)巨噬細(xì)胞 IgGFc受體促進 ADCC；活化 NK，促進殺傷； ? 誘導(dǎo) MHCI、 II類分子表達，增強免疫應(yīng)答水平。 TNF超家族 特征 ? 絕大多數(shù)成員為 II型膜蛋白；在特異性金屬蛋白酶作用下，形成可溶形式 ? 活性形式多為同源三聚體； ? TNF超家族 包括 TNFa,?, TRAIL, FASL等；此外，尚有一批與 TNFa序列同源，但缺乏誘導(dǎo)凋亡活性的 TNF家族成員。 ? VEGF (VEGFA), ? VEGFB, ? VEGF