分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題(存儲版)
【正文】 1真核生物的初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物必須經(jīng)過哪些加工才能成為成熟mRNA，以用作蛋白質(zhì)的合成模板。簡述實(shí)時(shí)定量PCR的原理和過程。真核細(xì)胞mRNA的哪一結(jié)構(gòu)特征可用來分離純化mRNA？請?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)分離純化真核細(xì)胞mRNA。 SNP ：指單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)，指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的一種DNA序列多態(tài)性。 代謝物激活蛋白（CAP）/環(huán)腺苷酸受體蛋白（CRP）由Crp基因編碼，能與cAMP形成復(fù)合物。正轉(zhuǎn)錄調(diào)控：如果在沒有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)存在時(shí)基因是關(guān)閉的，加入這種調(diào)節(jié)蛋白質(zhì) 后基因活性就被開啟，這樣的調(diào)控稱正轉(zhuǎn)錄調(diào)控。 操縱子（operon)是基因表達(dá)的協(xié)調(diào)單位，由啟動子、操縱基因及其所控制的一組功能上相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因所組成。(3)色氨酸操縱子通過前導(dǎo)肽的翻譯來控制轉(zhuǎn)錄的進(jìn)行，在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)這兩種作用相輔相成，體現(xiàn)著生物體內(nèi)周密的調(diào)控作用。 (5) 在真核生物中，基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)區(qū)相對較大，它們可能遠(yuǎn)離啟動子達(dá)幾百個(gè)甚至上千個(gè)堿基對，這些調(diào)節(jié)區(qū)一般通過改變整個(gè)所控制基因5’上游區(qū)DNA構(gòu)型來影響它與RNA聚合酶的結(jié)合能力。其內(nèi)部常含有一個(gè)核心序列：（G）TGGA/TA/TA/T（G），該序列是產(chǎn)生增強(qiáng)效應(yīng)時(shí)所必需的；(4) 增強(qiáng)效應(yīng)有嚴(yán)密的組織和細(xì)胞特異性，說明增強(qiáng)子只有與特定的蛋白質(zhì)（轉(zhuǎn)錄因子）相互作用才能發(fā)揮其功能；(5) 沒有基因?qū)Ｒ恍?，可以在不同的基因組合上表現(xiàn)增強(qiáng)效應(yīng)；(6) 許多增強(qiáng)子還受外部信號的調(diào)控。增強(qiáng)子：指能使與它連鎖的基因轉(zhuǎn)錄頻率明顯增加的DNA序列。真核生物基因調(diào)控可分為兩大類： （1）瞬時(shí)調(diào)控或可逆性調(diào)控：相當(dāng)于原核細(xì)胞對環(huán)境條件變化所做出的反應(yīng)，包括某種底物或激素水平升降時(shí)，或細(xì)胞周期不同階段中酶活性的調(diào)節(jié)。（3）真核生物的DNA還常與蛋白質(zhì)（包括組蛋白和非組蛋白）結(jié)合，形成十分復(fù)雜的染色體結(jié)構(gòu)，染色體構(gòu)象變化、染色體中蛋白質(zhì)的變化及染色質(zhì)對DNA酶敏感程度的變化等都會對基因表達(dá)產(chǎn)生重要影響。順式作用元件：影響自身基因表達(dá)活性的非編碼DNA序列。(1) 增強(qiáng)效應(yīng)十分明顯，一般能使基因轉(zhuǎn)錄頻率增加10200倍有的可以增加上千倍。(3) 高等真核細(xì)胞DNA中很大部分是不轉(zhuǎn)錄的，大部分真核細(xì)胞的基因中間還存在不被翻譯的內(nèi)含子。重要作用：(1) 細(xì)菌通過弱化作用彌補(bǔ)阻遏作用的不足，因?yàn)樽瓒糇饔弥荒苁罐D(zhuǎn)錄不起始，對于已經(jīng)起始的轉(zhuǎn)錄，只能通過弱化作用使之中途停下來。弱化子：DNA中可導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄過早終止的一段核甘酸序列（123150區(qū)）。 名詞解釋：組成(永久)型表達(dá)：指不受環(huán)境變化或代謝狀態(tài)影響的一類基因表達(dá)。 當(dāng)lacI基因由弱啟動子突變成強(qiáng)啟動子，細(xì)胞內(nèi)就不可能產(chǎn)生足夠的誘導(dǎo)物來克服阻遏狀態(tài)，整個(gè)lac操縱子在這些突變體中就不可誘導(dǎo)。 分子水平：將外源DNA插入具有復(fù)制能力的載體DNA中，使之得以永久保存和復(fù)制的過程。 技術(shù)和方法：Western印跡法、蛋白質(zhì)的質(zhì)譜分析技術(shù)、雙向電泳技術(shù)、熒光差異顯示雙向電泳技術(shù)。 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)首先將雙鏈DNA分子加熱分離成兩條單鏈，DNA聚合酶以單鏈DNA為模板并利用反應(yīng)混合物中的四種dNTP合成新生的DNA互補(bǔ)鏈。多順反子mRNA：編碼多個(gè)蛋白質(zhì)的mRNA。亞基 —— 共同形成RNA合成的活性中心 σ亞基 —— 存在多種σ因子，用于識別不同的啟動子 ω亞基 —— 未知簡述σ因子的作用。(1) 起始位點(diǎn)的識別：RNA聚合酶與啟動子DNA雙鏈相互作用并與之相結(jié)合的過程。(4) 催化作用。–10位的（TATAAT）區(qū)和–35位的（TTGACA）區(qū)是RNA聚合酶與啟動子的結(jié)合位點(diǎn)，能與σ因子相互識別而具有很高的親和力。一、名詞解釋：Transcription ：DNA分子中的遺傳信息轉(zhuǎn)移到RNA分子中的過程稱為轉(zhuǎn)錄。 首先由DNA切割酶在已損傷的核苷酸5’和3’位分別切開磷酸糖苷鍵，產(chǎn)生一個(gè)由1213個(gè)核苷酸(原核生物)或2729個(gè)核苷酸(真核生物)的小片段，移去小片段后由DNA聚合酶Ⅰ(原核)或ε(真核)合成新的片段，并由DNA連接酶將切口補(bǔ)平。semiconservative replication ：由親代DNA生成子代DNA時(shí)，每個(gè)新形成的子代DNA中，一條鏈來自親代DNA，而另一條鏈則是新合成的，這種復(fù)制方式稱半保留復(fù)制。(1)原核生物基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn) ，大多只有一條染色體 (trnascriptional operon) (polycistron) （Sanger發(fā)現(xiàn)）(2)真核生物基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn) ,一般遠(yuǎn)大于原核的 ,多于編碼序列 斷裂基因（interrupted gene）、內(nèi)含子(intron)、 外顯子(exon) 。(1) C值是一種生物的單倍體基因組DNA的總量。 磷酸與核糖在外側(cè)，彼此通過磷酸二酯鍵相連接，形成DNA分子的骨架。(2)分子生物學(xué)是目前自然學(xué)科中進(jìn)展最迅速、最具活力和生氣的領(lǐng)域，也是新世紀(jì)的帶頭學(xué)科。 簡述分子生物學(xué)的主要研究內(nèi)容。（3）可被用來進(jìn)行基礎(chǔ)研究 在個(gè)體生長發(fā)育過程中生物遺傳信息的表達(dá)按一定時(shí)序發(fā)生變化（時(shí)序調(diào)節(jié)），并隨著內(nèi)外環(huán)境的變化而不斷加以修正（環(huán)境調(diào)控）。DNA雙螺旋模型是哪年、由誰提出的?簡述其基本內(nèi)容。(5) 堿基在一條鏈上的排列順序不受任何限制，但根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則，當(dāng)一條多核苷酸的序列被確定后，即可決定另一條互補(bǔ)鏈的序列。真核生物染色體上組蛋白的種類：HH2A、H2B、HH4。將大腸桿菌長期在以15N作氮源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，,再將其轉(zhuǎn)移到含14N的普通培養(yǎng)液中培養(yǎng)，然后在不同時(shí)刻收集大腸桿菌并提取DNA，再將DNA在氯化銫密度梯度離心，記錄其位置，若離心后有三條帶(自上而下為15N,15N/14N,14N),則證明DNA復(fù)制是以半保留方式進(jìn)行
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