分子生物學(xué)簡(jiǎn)介(存儲(chǔ)版)
【正文】 梯度凝膠電泳 3. 雙鏈構(gòu)象多態(tài)分析法 4. 變性 高壓液相色譜分析 5. 特異性等位基因擴(kuò)增 6. 化學(xué)裂解錯(cuò)配堿基法分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)介 1. PCR單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析 2. 變性梯度凝膠電泳 3. 雙鏈構(gòu)象多態(tài)分析法 4. 變性 高壓液相色譜分析 5. 特異性等位基因擴(kuò)增 6. 化學(xué)裂解錯(cuò)配堿基法分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用展開(kāi)編輯本段分子生物學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)介 隨著生命科學(xué)和化學(xué)的不斷發(fā)展，人們對(duì)生物體的認(rèn)知已經(jīng)逐漸深入到微觀水平。有時(shí)由于單個(gè)核苷酸變化所引起的構(gòu)象改變很小, 用PAGE 電泳就可能無(wú)法檢出, 在PCR 產(chǎn)物或待測(cè)DNA 小于200 bp 時(shí), PCR SSCP 分析能夠檢測(cè)出70%~ 95%的突變。 變性梯度凝膠電泳 變性梯度凝膠電泳(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE) 利用由堿基序列所決定的DNA片段溶解度或變性度的差異, 達(dá)到分離野生型與突變型DNA片段的目的, 該手段分辨率達(dá)一個(gè)堿基。但在相當(dāng)于最高Tm的變性劑濃度的位置, 相應(yīng)的DNA片段可能全部解鏈, 使試驗(yàn)無(wú)法檢出存在于高Tm DNA片段中的堿基替換。所以, 可檢雙鏈均有一樣的FLR 正鏈, 雜交雙鏈的電泳遷移率可能相同,但是由于反義單鏈的差異雙鏈變性程度的差異而最終造成電泳遷移率的不同。型基因中131 種等應(yīng)基因的檢測(cè)。 ASA技術(shù)只需一步PCR反應(yīng), 甚至無(wú)需電泳和標(biāo)記技術(shù)。近年來(lái), 有人采用碳化二亞胺作為錯(cuò)配修飾劑, 進(jìn)一步提高了該方法的敏感性。什么是奮斗？奮斗就是每天很難，可一年一年卻越來(lái)越容易。寧可累死在路上，也不能閑死在家里！寧可去碰壁，也不能面壁。該技術(shù)較其他突變檢測(cè)系統(tǒng)有更多的優(yōu)越性, 可以掃描1~ 2 kb 的大片段DNA并在隨后的順序分析中定位突變位點(diǎn), 其效率可達(dá)100%。在PCR 的引物設(shè)計(jì)中, 根據(jù)已知突變位點(diǎn)性質(zhì)在引物3 39。該技術(shù)已被成功地用于囊性纖維化基因( cystic fibrosis gene) 的4 種突變, 以及HLA amp。因?yàn)镕LR 和樣本核苷酸序列相似, 雜交反應(yīng)液中所有DNA的正鏈和反義鏈之間將形成雙鏈結(jié)構(gòu)。DGGE 方法的單堿基突變檢出率在DNA片段長(zhǎng)度600 bp 以內(nèi)可以達(dá)到95%。PCR ddF 法把PCR 產(chǎn)物轉(zhuǎn)錄, 將轉(zhuǎn)錄物用反轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行Sanger 雙脫氧終止測(cè)序反應(yīng), 通過(guò)觀察非變性膠上經(jīng)解鏈處理所產(chǎn)生的單鏈漂移、突變后終止片段的獲得與缺失來(lái)判斷突變。但是該技術(shù)不能確定突變的部位和性質(zhì)。從基因調(diào)控的角度研究細(xì)胞癌變也已經(jīng)取得不少進(jìn)展。隨著蛋白質(zhì)和核酸結(jié)構(gòu)測(cè)定方法的進(jìn)展，比較不同種屬的蛋白質(zhì)或核酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)，即可根據(jù)差異的程度，來(lái)斷定它們的親緣關(guān)系。從發(fā)展趨勢(shì)看，寡糖與蛋白質(zhì)或脂質(zhì)形成的體系將成為分子生物學(xué)研究的一個(gè)新的重要的領(lǐng)域。對(duì)生物膜能量轉(zhuǎn)換的深入了解和模擬，將會(huì)對(duì)人類更有效地利用能量作出貢獻(xiàn)。生物體內(nèi)普遍存在的膜結(jié)構(gòu)，統(tǒng)稱為生物膜。由于是雙股DNA，所以通常以堿基對(duì)計(jì)算其長(zhǎng)度。研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系是分子生物學(xué)研究的一個(gè)重要內(nèi)容。它們以不同的順序排列可以為生命世界提供天文數(shù)字的各種各樣的蛋白質(zhì)。并在此基礎(chǔ)上提出的中心法則，描述了遺傳信息從基因到蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的流動(dòng)。接著肯德魯和佩魯茨在 X射線分析中應(yīng)用重原子同晶置換技術(shù)和計(jì)算機(jī)技術(shù)，分別于1957和1959年闡明了鯨肌紅蛋白和馬血紅蛋白的立體結(jié)構(gòu)。分子生物學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史結(jié)構(gòu)分析和遺傳物質(zhì)的研究在分子生物學(xué)的發(fā)展中作出了重要的貢獻(xiàn)。50年代中期，隨著沃森和克里克揭示出DNA分子的空間結(jié)構(gòu)，生物學(xué)才真正開(kāi)始了其揭開(kāi)分子水平生命秘密的研究歷程。分子生物學(xué)是第二次世界大戰(zhàn)后，由生物化學(xué),`遺傳學(xué),微生物學(xué),病毒學(xué),結(jié)構(gòu)分析及高分子化學(xué)等不同研究領(lǐng)域結(jié)合而形成的一門(mén)交叉科學(xué)。重點(diǎn)研究下述領(lǐng)域：（1）蛋白質(zhì)（包括酶）的結(jié)構(gòu)和功能。 如果將一種生物的 DNA中的某個(gè)遺傳密碼片斷連接到另外一種生物的DNA鏈上去，將DNA重新組織一下，就可以按照人類的愿望，設(shè)計(jì)出新的遺傳物質(zhì)并創(chuàng)造出新的生物類型，這與過(guò)去培育生物繁殖后代的傳統(tǒng)做法完全不同?，F(xiàn)在基因工程所展現(xiàn)出的強(qiáng)大生命力和巨大的經(jīng)濟(jì)發(fā)展?jié)摿ν耆靡嬗诜肿由飳W(xué)的迅猛發(fā)展，而且有證據(jù)表明，基因工程的進(jìn)一步發(fā)展仍然要依賴于分子生物學(xué)研究的發(fā)展。以后布喇格的學(xué)生阿斯特伯里和貝爾納又分別對(duì)毛發(fā)、肌肉等纖維蛋
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