本規(guī)范規(guī)定了化妝品微生物學檢驗總則(存儲版)
【正文】 色；陰性反應(yīng)液面呈試劑本色。3 儀器 恒溫培養(yǎng)箱：37℃、42℃。 電爐。 硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基 成分： 蛋白胨 10g 酵母浸膏 3g 硝酸鉀 2g 亞硝酸鈉 蒸餾水 1000mL 制法：將蛋白胨和酵母浸膏加到蒸餾水中，加熱使之溶解，煮沸過濾后補足液量，加入硝酸鉀和亞硝酸鈉，溶解混勻，分裝到加有小倒管的試管中，(10 lb)20min滅菌后備用。 氧化酶試驗：取一小塊潔凈的白色濾紙片放在滅菌平皿內(nèi)，用無菌玻璃棒挑取綠膿桿菌可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基對苯二胺試液，在15s～30s之內(nèi)，出現(xiàn)粉紅色或紫紅色時，為氧化酶試驗陽性；若培養(yǎng)物不變色，為氧化酶試驗陰性。 五、金黃色葡萄球菌Staphylococcus Aureus1 范圍 本規(guī)范規(guī)定了化妝品中金黃金色葡萄球菌的檢驗方法。 試管。分裝每瓶95mL。 無菌液體石蠟。 染色鏡檢：挑取分純菌落，涂片，進行革蘭氏染色，鏡檢?！ ”疽?guī)范適用于各種化妝品中霉菌和酵母菌的總數(shù)測定。 試管。 虎紅(孟加拉紅)培養(yǎng)基 成分： 蛋白胨 5g 葡萄糖 10g 磷酸二氫鉀 1g 硫酸鎂(含7H2O) 瓊脂 20g 1/3000虎紅溶液 100mL (四氯四碘熒光素) 蒸餾水 1000mL 氯霉素 100mg 制法： 將上述前5種成分加入蒸餾水中溶解后，再加入虎紅溶液。判定結(jié)果時，應(yīng)選取菌落數(shù)在5～50個范圍之內(nèi)的平皿計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后，即為每g(或每mL)檢樣中所含的霉菌和酵母菌數(shù)。若有霉菌蔓延生長，為避免影響其它霉菌和酵母菌的計數(shù)時，于48h應(yīng)及時將此平板取出計數(shù)。 高壓滅菌器。 天平。6 檢驗結(jié)果報告 經(jīng)增菌培養(yǎng)后，在分離平板上有典型或可疑菌落生長，經(jīng)染色鏡檢，證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶試驗陽性者，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落，但無混濁帶及透明帶。 兔(人)血漿制備 取 % 檸檬酸鈉溶液，(15 lb) 30min高壓滅菌，1份加兔(人)全血4份，混勻靜置；2000rpm～3000 rpm離心3min～5min。 增菌劑的配制：30%卵黃鹽水50mL與除菌過濾的1%亞碲酸鉀溶液10mL混合，保存于冰箱內(nèi)。 離心機。 42℃生長試驗：挑取可疑的綠膿桿菌純培養(yǎng)物，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上，放在41～42℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h～48h，綠膿桿菌能生長，為陽性，而近似的熒光假單胞菌則不能生長。 在缺乏十六烷基三甲基溴化銨培養(yǎng)基時也可用乙酰胺培養(yǎng)基進行分離，將菌液劃線接種于平板上，放37℃培養(yǎng)24h，綠膿桿菌在此培養(yǎng)基上生長良好，菌落扁平，邊緣不整，菌落周圍培養(yǎng)基略帶粉紅色，其它菌不生長。 綠膿菌素測定用培養(yǎng)基 成分： 蛋白胨 20g 氯化鎂 硫酸鉀 10g 瓊脂 18g 甘油(化學純) 10g 蒸餾水 1000mL 制法：將蛋白胨、氯化鎂和硫酸鉀加到蒸餾水中，加溫使其溶解，加入瓊脂和甘油，加熱溶解，分裝于試管內(nèi)，(10 lb)20min高壓滅菌后，制成斜面?zhèn)溆谩? 載玻片。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42℃條件下能生長。 挑取上述可疑菌落，涂片作革蘭氏染色鏡檢。5 操作步驟 取10mL 1:10稀釋的檢液，加到10mL雙倍濃度的乳糖膽鹽培養(yǎng)基中，置44℃177。取該液10mL，加5%石碳酸水溶液90mL混合，即為石碳酸復(fù)紅液。 ～，輕搖試管?！?，分裝于三角瓶內(nèi)，(15 lb)15min高壓滅菌備用。 pH計或pH試紙。 溫度計。在報告菌落數(shù)為“不可計”時，應(yīng)注明樣品的稀釋度。當只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時，即以該平皿菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)(見表1中例1)。 將融化并冷至45℃～50℃的卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾注到平皿內(nèi)，每皿約15mL，隨即轉(zhuǎn)動平皿，使樣品與培養(yǎng)基充分混合均勻，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h。4 培養(yǎng)基和試劑 生理鹽水：。 pH計或精密pH試紙。如有均質(zhì)器，上述水溶性膏、霜、粉劑等，可稱10g樣品加入90mL滅菌生理鹽水，均質(zhì)1min～2min；疏水性膏、霜及眉筆、口紅等，稱10g樣品，加10mL滅菌液體石蠟，10mL滅菌吐溫80，70mL滅菌生理鹽水，均質(zhì)3min～5min。 若只有一份樣品而同時需做多種分析，如微生物、毒理、化學等，應(yīng)先做微生物檢驗，再將剩余樣品做其它分析。 滅菌吐溫80。 均質(zhì)器。2 儀器和設(shè)備 天平。 三角瓶。3 培養(yǎng)基和試劑 生理鹽水 成分：氯化鈉 蒸餾水加至 1000 mL 溶解后，分裝到加玻璃珠的三角瓶內(nèi)，每瓶90mL，(15 lb)20min高壓滅菌。包裝量小于
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