雜交中稻廣兩優(yōu)476品種與純度的鑒定(存儲(chǔ)版)
【正文】 ５農(nóng)作物種子檢測(cè)規(guī)程對(duì)聚丙烯酰胺電泳法測(cè)定大麥、小麥種子純度的規(guī)定，一般每個(gè)樣品測(cè)定１００粒種子，但在兩系雜交稻種子純度的分子檢測(cè)方面還沒(méi)有相關(guān)規(guī)定。同時(shí)商業(yè)制種基地大多集中分布，在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中可能會(huì)有含相同優(yōu)良基因的不同親本串粉，這樣通過(guò)檢測(cè)單一優(yōu)良基因的基因型就無(wú)法辨別串粉所造成的偽雜交種。２．４ 廣兩優(yōu)４７６及含有相同抗病基因株系抗病基因的ｐｃｒ結(jié)果從圖4與圖5可以看出，含有抗白葉枯病基因ｘａ２１的兩個(gè)親本ｉｒｂｂ２１和ｒ４７６帶型相同，含有抗褐飛虱基因ｂｐｈ１４的兩個(gè)親本ｂ５和ｒ４７６帶型相同。２ 結(jié)果與分析２．１ dna指紋圖譜的構(gòu)建對(duì)當(dāng)前育種工作中常用的７個(gè)親本材料使用２４對(duì)引物進(jìn)行ｐｃｒ擴(kuò)增，均可以擴(kuò)增出穩(wěn)定的條帶（表1）。１．２．２ ｐｃｒ反應(yīng)體系 ｐｃｒ反應(yīng)體系為１５ μｌ，含有１０ ｍｍｏｌ／ｌ ｔｒｉｓ－ｈｃｌ（ｐｈ ８．３），５０ ｍｍｏｌ／ｌ ｋｃｌ，１．５ ｍｍｏｌ／ｌ ｍｇｃｌ２，ｄｎｔｐｓ各０．２ ｍｍｏｌ／ｌ，１０ ｎｇ左右的ｄｎａ模板，引物各０．２ μｍｏｌ／ｌ，ｔａｑ酶１ ｕ。當(dāng)前鑒定種子純度的方法主要是田間形態(tài)鑒定法，此外還有種子形態(tài)鑒定法、幼苗鑒定法、葉色標(biāo)記鑒定法、同工酶電泳法、蛋白質(zhì)電泳法以及近年來(lái)逐漸開(kāi)始應(yīng)用的水稻ｄｎａ指紋圖譜鑒定技術(shù)等［２］。結(jié)果表明，這２４對(duì)引物在幾個(gè)常用親本及廣兩優(yōu)４７６間具有良好的多態(tài)性，可用于構(gòu)建廣兩優(yōu)４７６的ｄｎａ指紋圖譜。廣兩優(yōu)４７６是湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所以廣占６３ｓ為母本，以自主選育的抗白葉枯病和褐飛虱雙抗恢復(fù)系ｒ４７６為父本選育的高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、多抗兩系雜交中稻品種，于２０１０年通過(guò)湖北省農(nóng)作物品種審定委員會(huì)審定，審定編號(hào)２０１０００４。所有試劑均購(gòu)自寶生物工程（大連）有限公司。２．２ ｓｓｒ標(biāo)記的篩選結(jié)果使用農(nóng)業(yè)部ｎｙ／ｔ １４３３—２００７推薦的２４對(duì)引物對(duì)ｒ４７６、廣占６３ｓ、廣兩優(yōu)４７６和其他育種常用親本進(jìn)行了ｐｃｒ擴(kuò)增。３ 小結(jié)與討論當(dāng)前分子標(biāo)記技術(shù)在雜交種子純度鑒定上的應(yīng)用越來(lái)越多。本研究通過(guò)構(gòu)建廣兩優(yōu)４７６的dna指紋圖譜，并篩選出了適合進(jìn)行純度分析的標(biāo)記，既為今后廣兩優(yōu)４７６雜交種子純度的鑒定奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)也為其他雜交稻品種的鑒定提供了借鑒。說(shuō)明對(duì)雜交種子進(jìn)行純度鑒定，每份樣品抽樣２００粒已具有一定的代表性，每份樣品檢測(cè)２００粒種子，結(jié)果已比較可靠。上述快速ｄｎａ提取法結(jié)合本研究中采用的分子標(biāo)記檢測(cè)方法可以大大降低試驗(yàn)成本，提高試驗(yàn)效率。但隨著各種抗性或其他優(yōu)良基因在育種實(shí)踐中的廣泛應(yīng)用，越來(lái)越多的不同親本含有相同的優(yōu)良基因。圖3中第７泳道帶型表示雜交種中混雜了父本種子。對(duì)于篩選得到的在雙親之間差異較大的pcr產(chǎn)物，改用２％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。１．２ 方法
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