【正文】 啟動(dòng)。：1) 適用于不同培養(yǎng)對(duì)象的新型生物反應(yīng)器的研制。⑵產(chǎn)物能較容易地被有機(jī)物吸附或溶解于有機(jī)相中。③結(jié)果：胞內(nèi)含量：。:人造胚乳的主要成分為無(wú)機(jī)鹽、碳水化合物及蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。 人工種皮：包裹在人工種子的最外層，對(duì)人工種子起到保護(hù)作用，保護(hù)人工種子內(nèi)部的水分和營(yíng)養(yǎng)不致喪失和防止外部物理沖擊，還要保證通氣。 3）在人工種子的包裹材料里加入各種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、菌肥、農(nóng)藥等，可人為地影響控制作物生長(zhǎng)發(fā)育和抗性。體細(xì)胞胚包在膠囊中的位置不宜處在中央，宜偏在一邊以利萌發(fā)。 ： 1）將4 g藻酸鈣膠囊置于20 mL甘油的氫氧化鈉溶液中攪拌1min； 2）在50 mL環(huán)乙烷中加入10%的Elvax4260。： （這個(gè)貌似我沒(méi)有聽(tīng)過(guò)他磨嘰，了解吧）經(jīng)研究認(rèn)為藻酸鹽所形成的膠囊是目前最好的凝膠包埋材料，所采用的主要方法是滴注和裝膜兩種。 七、人工種子與天然種子比較有其自身的特點(diǎn)： 1）可對(duì)一些自然條件下不結(jié)實(shí)的或種子很昂貴的植物進(jìn)行繁殖。 人工胚乳：人工胚乳為體細(xì)胞胚萌發(fā)提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。體細(xì)胞胚胎發(fā)生的同步化控制化學(xué)抑制法、低溫抑制法、機(jī)械過(guò)篩選擇法、滲透壓選擇法、應(yīng)用植物胚性細(xì)胞分級(jí)儀三、人造種皮及人造胚乳研制及包埋:對(duì)人造種皮總的要求是：能保持胚狀體的活力，利于萌發(fā)和貯藏。離心分離獲得細(xì)胞、胞外培養(yǎng)液、有機(jī)相溶液，用高效液相色譜進(jìn)行測(cè)定。兩相培養(yǎng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：減少產(chǎn)物的反饋抑制作用，提高產(chǎn)物含量（促進(jìn)儲(chǔ)存在細(xì)胞內(nèi)部的產(chǎn)物分泌）；通過(guò)有機(jī)相的不斷回收及循環(huán)使用，實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)的連續(xù)化。 4)由于細(xì)胞固定在一定的介質(zhì)中，可以不斷提取產(chǎn)物，即可以進(jìn)行連續(xù)生產(chǎn)。優(yōu)點(diǎn)：可以延長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)周期，從而延長(zhǎng)目的產(chǎn)物的積累時(shí)間，增加目的產(chǎn)物產(chǎn)量。 潮霉素濃度為5mg/L時(shí)，外植體生長(zhǎng)減慢，%；潮霉素濃度為10mg/L時(shí)，%；潮霉素濃度為15mg/L時(shí)，葉片全部死亡。次生產(chǎn)物在植物中的合成與分解過(guò)程稱為次生代謝植物次生產(chǎn)物種類繁多（據(jù)保守估計(jì)已超過(guò)2萬(wàn)種），根據(jù)分子結(jié)構(gòu)不同大致分為：酚類化合物黃酮類、單酚類、醌 類（苯醌、萘醌、蒽醌）萜類化合物三萜皂甙、甾體皂甙、單萜、倍半萜、二萜含氮化合物生物堿（真生物堿、偽生物堿、原生物堿）、食品、輕化工業(yè)等領(lǐng)域具有重要意義。四）紙橋培養(yǎng)法：是指植物莖尖分生組織培養(yǎng)常用的方法，有時(shí)也可用于單細(xì)胞培養(yǎng)。 4）回收獲得的單細(xì)胞，并用液體培養(yǎng)基洗衣凈，可用于培養(yǎng)。 3)雙生苗的篩選； 4）花藥和花粉培養(yǎng)。b 磷 植物細(xì)胞能以各種方式吸收磷，其濃度是細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)的限制因子，它與由核苷酸庫(kù)（ATP,ADP,AMP）所引起的能量水平以及RNA,DNA合成直接相關(guān)磷能抑制游離氨基酸的積累。（成功的懸浮體系）:懸浮培養(yǎng)物分散性良好，細(xì)胞團(tuán)較??；均一性好，細(xì)胞形狀和細(xì)胞團(tuán)大小大致相同；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)量一般23天增加1倍。:一)愈傷組織誘導(dǎo)。2）繼代前，培養(yǎng)容器靜置短時(shí)間，大細(xì)胞團(tuán)沉降，再吸上層懸浮液。接種時(shí)細(xì)胞要達(dá)到一定細(xì)胞濃度，通常為0. 25 x l06細(xì)胞／ml 0. 5 x 106細(xì)胞／m1。 第一節(jié) 懸浮培養(yǎng)：將單個(gè)游離單細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)按一定密度懸浮在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行懸浮培養(yǎng)增殖的技術(shù)。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、群體大等。2）人工授粉，一種是在接種好的胚珠表面授以無(wú)菌的花粉，二是先培養(yǎng)花粉，然后將胚珠接種在有花粉的培養(yǎng)基上。：（胚乳培養(yǎng)中兩種方式：帶胚培養(yǎng)和不帶胚培養(yǎng)）帶胚培養(yǎng)（早期胚乳）更容易形成愈傷組織。2） 胚乳再生植株的倍性 染色體常常發(fā)生變化；同一植株往往是不同倍性的嵌合體；倍性混亂在胚乳培養(yǎng)中相當(dāng)普遍；3） 影響倍性因素：胚乳類型、胚乳愈傷組織發(fā)生部位、培養(yǎng)基外源激素21. 影響胚乳培養(yǎng)的因素：1）植物外植體：胚乳發(fā)生類型和發(fā)育程度，胚在胚乳培養(yǎng)中的作用；2）培養(yǎng)基與激素；3）培養(yǎng)條件22. 胚乳的發(fā)育類型：（時(shí)間: 早于胚的發(fā)育，一般不經(jīng)過(guò)休眠）類型:核型胚乳、細(xì)胞型胚乳、沼生目型胚乳1） 核型胚乳:普遍的形式，先期核多次分裂（胚乳核），但不形成細(xì)胞壁，稱為游離核形成期。游離核型期材料難以培養(yǎng)，而細(xì)胞型期的材料易于成功。3）大多數(shù)被子植物的胚乳是三倍體，能否通過(guò)胚乳培養(yǎng)獲得三倍體植株而得到無(wú)籽果實(shí)；通過(guò)胚乳培養(yǎng)技術(shù)，探索改良農(nóng)、林及園藝植物三倍體育種技術(shù)的可能性。胚柄參與幼胚的發(fā)育，取材時(shí)應(yīng)帶胚柄。（在解剖鏡下觀察，摸索植物的授粉天數(shù)與胚胎發(fā)育的對(duì)應(yīng)關(guān)系）。 4)種子生活力的快速測(cè)定。3) 多胺（腐胺、尸胺、亞精胺、高亞精胺、精胺等）和乙烯與體細(xì)胞胚發(fā)生 4) 糖類和金屬離子與體細(xì)胞胚發(fā)生5) 外植體與體細(xì)胞胚發(fā)生6) 體細(xì)胞胚的產(chǎn)生要求培養(yǎng)基中含有一定濃度的還原態(tài)氮第三章 植物胚胎培養(yǎng)：胚、胚乳、子房、胚珠進(jìn)行離體培養(yǎng)，使其發(fā)育成完整植株：胚培養(yǎng)(Embryo Culture)：是將胚從胚珠或種子中取出，置于適宜的培養(yǎng)基生長(zhǎng)；包括未成熟胚和成熟胚兩種類型的離體培養(yǎng)．胚挽救(Embryo Rescue)：是由于營(yíng)養(yǎng)或生理原因造成難以播種成苗或在發(fā)育早期階段就敗育或退化的胚進(jìn)行早期離體培養(yǎng)．1）雜種幼胚在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)2）雜種幼胚的胚乳看護(hù)培養(yǎng)3）雜種幼胚的愈傷組織培養(yǎng)：植物在受精后就開(kāi)始胚發(fā)育。與相同植物比較，體細(xì)胞胚的體積明顯小于合子胚。 **直接途徑是直接從原外植體不經(jīng)愈傷組織階段發(fā)育而成 **間接方式是體胚從愈傷組織或懸浮細(xì)胞、有時(shí)也從已形成的體胚的一組細(xì)胞中發(fā)育而成，如香雪蘭（Freesia refracta）花序外植體經(jīng)直接體細(xì)胞胚胎發(fā)生途徑形成再生植株。溫度 25℃適于器官發(fā)生，應(yīng)考慮原產(chǎn)地、晝夜溫差、低溫預(yù)處理濕度 7080%：品種基因型的差異材料生理狀況 生理狀態(tài)年輕，來(lái)源于生長(zhǎng)活躍或生長(zhǎng)潛力大的組織和器官的細(xì)胞更有利于培養(yǎng) 體細(xì)胞胚胎發(fā)生1. 雙子葉植物的胚胎發(fā)育過(guò)程：(A) 伸長(zhǎng)期合子；(B) 合子經(jīng)過(guò)第一次分裂, 產(chǎn)生1 個(gè)頂細(xì)胞(綠色)和一個(gè)基細(xì)胞(粉紅色)；(C) 四分體胚: 頂細(xì)胞經(jīng)歷2 次縱向分裂，產(chǎn)生含有4 個(gè)細(xì)胞的胚體和2 個(gè)細(xì)胞的胚柄；(D) 16 細(xì)胞球形胚: 8 細(xì)胞胚的所有細(xì)胞經(jīng)過(guò)1 次平周分裂, 產(chǎn)生包含8 個(gè)細(xì)胞的表皮原和8 個(gè)細(xì)胞的內(nèi)部組織；(E) 早期心形胚；(F) 心形胚: 子葉和胚根原基已經(jīng)出現(xiàn)；(G) 成熟胚胎。：離體培養(yǎng)中培養(yǎng)基滲透壓是影響植物細(xì)胞脫分化、再分化的重要因素；培養(yǎng)基滲透壓是由培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的總濃度決定的；培養(yǎng)細(xì)胞是通過(guò)細(xì)胞滲透來(lái)吸取營(yíng)養(yǎng)的，當(dāng)培養(yǎng)材料和培養(yǎng)基之間處于等滲時(shí)，或培養(yǎng)材料的滲透壓略低于培養(yǎng)基滲透壓時(shí)，培養(yǎng)材料才可能汲取養(yǎng)分和水分。2）先細(xì)胞分裂素，后生長(zhǎng)素，細(xì)胞分裂也分化。降低培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素的含量 增加光照、控制溫度、改善通風(fēng)換氣條件。培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)防止褐變的方法：選擇適宜的外植體對(duì)外植體進(jìn)行處理，如先進(jìn)行低溫處理，再放入只含糖的瓊脂培養(yǎng)基中，使酚類物質(zhì)滲入到培養(yǎng)基中。愈傷組織狀態(tài)（優(yōu)良的愈傷組織）：；，以便建立優(yōu)良的懸浮系或原生質(zhì)體；3. 高度的胚性或再分化能力；4. 可以長(zhǎng)期繼代保存。（Cell division）：外植體中已分化的活細(xì)胞在外源激素的作用下，外植體外層細(xì)胞出現(xiàn)了分裂，由于外層細(xì)胞的迅速分裂使得這些細(xì)胞的體積縮小，逐漸回復(fù)到分生組織狀態(tài)，因此也稱為回復(fù)變化。三個(gè)時(shí)期愈傷組織的代謝狀況、結(jié)構(gòu)以及細(xì)胞的平均大小都有明顯的差別。3）不可逆地脫離了細(xì)胞周期，失去分裂能力，保持生理機(jī)能的細(xì)胞，為終端化細(xì)胞.，取決于它在自然部位上所處的位置和生理狀態(tài)脫分化能力：厚壁細(xì)胞退化細(xì)胞薄壁細(xì)胞形成層營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)中心5. 細(xì)胞全能性的表達(dá)是通過(guò)細(xì)胞脫分化和再分化實(shí)現(xiàn)二、細(xì)胞脫分化，而是植物界普遍存在的現(xiàn)象。（6）通過(guò)離體誘導(dǎo)不定芽或促進(jìn)腋芽生枝，可對(duì)很多重要的園藝植物和名貴花卉、樹(shù)種進(jìn)行快速繁殖。(2)細(xì)胞融合技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。③1955年，Miller等由鯡魚(yú)精子DNA中分離出細(xì)胞分裂素，并把它定名為激動(dòng)素（kinetin）。用3種B族維生素，即吡哆醇、硫胺素和煙酸，取代酵母浸出液獲得成功，后被稱為White培養(yǎng)基。過(guò)濾滅(除)菌（不耐熱的物質(zhì) ）：一些生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑(赤霉素、玉米素)、某些維生素是不耐熱的，常用過(guò)濾滅菌細(xì)菌過(guò)濾器方法。射線處理(紫外線、超聲波、微波)。(4)B5培養(yǎng)基:是1968年由Galmborg等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。（二）常用的培養(yǎng)基及特點(diǎn)MS培養(yǎng)基：它是1962年由Murashige和Skoog為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。水（water)：作用：是植物原生質(zhì)體的組成成分，也是一切代謝過(guò)程的介質(zhì)和溶媒。 固體培養(yǎng)基的特點(diǎn)（與液體培養(yǎng)基相比）:優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)便，通氣問(wèn)題易解決，便于觀察研究。 高 有利于根的形成和愈傷組織的形成 生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素 適中 有利于根芽的分化 低 有利于芽的形成 （3）赤霉素（GA3赤霉酸）：作用：促進(jìn)幼芽伸長(zhǎng)生長(zhǎng)，促進(jìn)不定胚發(fā)育成小植株。使用濃度：為10—200mg／L。VB1對(duì)愈傷組織的產(chǎn)生和生活力有重要作用，VB6能促進(jìn)根的生長(zhǎng)，Vpp與植物代謝和胚的發(fā)育有一定關(guān)系。從各種糖對(duì)水稻根培養(yǎng)的影響來(lái)看，以葡萄糖效果最好，果糖和蔗糖相當(dāng)，麥芽糖差一些。原生質(zhì)體培養(yǎng)的最大用處是體細(xì)胞雜交。 (3)胚培養(yǎng)：胚培養(yǎng)是器官培養(yǎng)的一種。再生：指組織、器官、懸浮細(xì)胞和原生質(zhì)體經(jīng)培養(yǎng)后獲得植株的過(guò)程。1 鉀是許多酶的活化劑。外植體(explant) ：由活植物體上切取下來(lái)以進(jìn)行培養(yǎng)的那部分組織或器官。人工控制的環(huán)境：光照(10001500lx)、溫度、濕度(7080﹪)、氣體(O2)等。 磷參與植物生命中核酸及蛋白質(zhì)全成、光合作用、呼吸作用及能量的貯存、轉(zhuǎn)化、釋放等重要的生理生化過(guò)程，提高抗逆性，促進(jìn)早熟。再分化：一個(gè)成熟的植物細(xì)胞經(jīng)歷了脫分化之后，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)還能形成完整的植株的過(guò)程。如根、莖、葉、花、果實(shí)、種子的培養(yǎng)。 原生質(zhì)體培養(yǎng)：指將植物細(xì)胞的細(xì)胞壁通過(guò)物理或化學(xué)的方法去除，然后再進(jìn)行培養(yǎng)。不同糖類對(duì)生長(zhǎng)的影響不同。有時(shí)用量較高。種類：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。種類：6—BA(6—芐基腺嘌呤)； Kt (kinetin 激動(dòng)素)； Zt (zeatin 玉米素)細(xì)胞分裂素作用強(qiáng)弱順序：Zt6—BAKt激素配比模式：生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的比例決定著發(fā)育的方向（形成愈傷組織；長(zhǎng)根；長(zhǎng)芽）。時(shí)間過(guò)久，瓊脂變褐，也會(huì)逐漸喪失凝固能力。它的顆粒大小決定著吸附能力：粒度越小，吸附能力越大；溫度低吸附力強(qiáng)，溫度高吸附力減弱，甚至不吸附。 （1） 培養(yǎng)基的種類 根據(jù)態(tài)相不同：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基 根據(jù)培養(yǎng)物培養(yǎng)過(guò)程：初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基 根據(jù)作用不同：誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基 根據(jù)營(yíng)養(yǎng)水平：基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基、改良培養(yǎng)基。在國(guó)內(nèi)已廣泛應(yīng)用于小麥、水稻及其他植物的花粉和花藥培養(yǎng)。濕熱滅菌(常壓或高壓蒸煮)。當(dāng)壓力表上升達(dá)108kPa時(shí)，鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃（在此蒸氣溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢），維持2030min。奠基階段(Gautheret，White和Nobecourt被譽(yù)為植物組織培養(yǎng)的奠基人)：，一是認(rèn)識(shí)了B族維生素對(duì)植物生長(zhǎng)的重要意義；二是發(fā)現(xiàn)了生長(zhǎng)素一種天然的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)；，White由番茄根建立了第一個(gè)活躍生長(zhǎng)的無(wú)性系，使根的離體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)首次獲得了真正的成功。實(shí)現(xiàn)Haberlandt培養(yǎng)單細(xì)胞可能性的這一設(shè)想。迅快發(fā)展階段:（l）原生質(zhì)體培養(yǎng)取得重大突破。（5）對(duì)于無(wú)藥可治的病毒病，可通過(guò)莖尖培養(yǎng)消除病毒，這對(duì)解決馬鈴薯種薯退化問(wèn)題能發(fā)揮重要的作用，在其他很多植物中也可用以建立無(wú)毒原種。屬G0期細(xì)胞。 脫分化 再分化切取形成層→無(wú)菌接種 → 誘導(dǎo)愈傷組織的形成 → 試管苗的形成→培養(yǎng)室→移栽：從外植體脫分化形成愈傷組織大致可分為三個(gè)時(shí)期：?jiǎn)?dòng)期 （誘導(dǎo)期）、分裂期和形成期。二、多聚核糖體的不斷增加，到有絲分裂前RNA的含量增加300﹪；三、蛋白質(zhì)合成加快，分裂前細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的總量增加200﹪；四、各種與分裂有關(guān)的酶活性大加強(qiáng)。愈傷組織的特征：細(xì)胞分裂快，結(jié)構(gòu)疏散；缺少有組織的結(jié)構(gòu)；顏色淺而透明。4培養(yǎng)基的成分和培養(yǎng)條件。提高糖的含量或加入滲透劑，降低培養(yǎng)基中滲透勢(shì)，減少植物材料可獲得的水分。容易產(chǎn)生多倍體細(xì)胞。②細(xì)胞分裂素在離體培養(yǎng)條件下，既可誘導(dǎo)細(xì)胞分裂，又可調(diào)節(jié)細(xì)胞分化。光強(qiáng) 10001500lx，光周期1216h，近紫外和藍(lán)紫光促進(jìn)芽的發(fā)生，紅光促進(jìn)生根。 卵形態(tài)發(fā)生的特性 : **植物組織培養(yǎng)過(guò)程中植物體細(xì)胞胚胎途徑可歸納為兩類：直接途徑和間接途徑。合子胚的子葉是相當(dāng)規(guī)范的，可以作為分類的依據(jù)，而體細(xì)胞胚的子葉常不規(guī)范，有時(shí)具有兩片以上的子葉。 除2,4D外，ABA對(duì)植物體細(xì)胞胚的發(fā)生也起到重要的調(diào)控作用。3) 誘導(dǎo)胚狀體及胚性愈傷組織。10. 成熟胚的培養(yǎng)1）材料的消毒與接種附加成分2）培養(yǎng)基 大量元素和微量的無(wú)機(jī)鹽為基本成分 谷氨酰胺作為氮源，可以促進(jìn)胚生長(zhǎng) 植物天然浸提物（YE）促進(jìn)胚生長(zhǎng) 　　　　　　　　硫氨素促進(jìn)胚根的伸長(zhǎng) 生長(zhǎng)素低濃度促進(jìn)胚的發(fā)育（胚根） 赤霉素促進(jìn)有后熟作用的種子萌發(fā) 3） 培養(yǎng)條件：、加熱滅菌后PH通常會(huì)