產(chǎn)植酸酶黑曲霉菌株s8-的基因擴(kuò)增與鑒定(存儲版)
【正文】 14[5] 王紅寧,劉世貴, N25 植酸酶 phyA ,20(4).486493.[6] .,ElBatal and production and phytic acid reduction in rapeseed meal by Aspergillus niger during solid state fermentation. Food research international .2022,34(8). 715720.[7] Piddington C S,Paloheimo M,et clong and sequencing of the genes encoding phytase(phy) and pH acid phosphatase(aph) from Aspergillus niger var awamori. Gene, 1993, 133:5562[8] Van Hartingsveldt M, Van Zeijl C M J, Hartveld G M,et al. Clong, chatacterization and overexpression of the phytaseencoding gene(phyA) of Aspergillus niger. Gene, 1993,127:8794AMPLIFING AND IDENDIFING OF THE PHYTASE PHYA GENE OF ASPERGILLUS NIGER S8Zeng Xiu1 Guo Wanzhu2 Kong Lujun1 Wang Xiaoyou1(1. Chongqing Swine Science Academy， Chongqing， Rongchang， 402460。引物太短，可能與非靶序列雜交，得出非預(yù)期的擴(kuò)增產(chǎn)物；引物太長，降低了 PCR 反應(yīng)的速率。本試驗(yàn)中采用了兩種常規(guī)方法提取黑曲霉菌絲體的染色體 DNA，結(jié)果均不理想，后來改用小量基因組純化試劑盒（Vitagene 試劑盒） ，提取效果最佳。 取 5μL 純化回收的 DNA 稀釋液在 %瓊脂糖凝膠上電泳，80v2h，溴化乙錠染色后在凝膠成像系統(tǒng)里觀察、分析回收的質(zhì)量和數(shù)量。⒈⒉⒎ 植酸酶 phyA PCR 基因擴(kuò)增 根據(jù)優(yōu)化的 PCR 反應(yīng)條件建立 PCR 系統(tǒng)進(jìn)行黑曲霉植酸酶 phyA 基因的擴(kuò)增。收集菌絲體于 離心管中，置于液氮里保存，以備提取染色體 DNA 所用。植酸酶作為單胃動物的一種飼料添加劑，其飼喂效果已在世界范圍內(nèi)得到廣泛的確證。1產(chǎn)植酸酶黑曲霉菌株 S8 的基因擴(kuò)增與鑒定曾 秀 1，郭萬柱 2，孔路軍 1，王孝友 1（，重慶 榮昌 402460；，四川 雅安 625014） 摘要：本文主要報道了用三種不同方法從 S8 黑曲霉菌絲體中提取基因組 DNA，最適方法是經(jīng)改進(jìn)的Vitagene 試劑盒法。在飼料中添加植酸酶可降解植酸鹽釋放無機(jī)磷，提高動物對植酸磷的生物利用率，緩解植酸鹽的抗?fàn)I養(yǎng)作用。⒈⒉ 實(shí)驗(yàn)方法⒈⒉⒈ 黑曲霉菌絲體的培養(yǎng) 挑取黑曲霉孢子接種在裝有 5mL 產(chǎn)酶培養(yǎng)基的試管內(nèi)，在空氣恒溫震蕩器中 30℃振搖培養(yǎng) 48h；將 25μL 濃孢子懸液接種在裝有 50mL 產(chǎn)酶培養(yǎng)基的 100mL 三角瓶里，振搖培養(yǎng) 72h；將培養(yǎng)物過濾，然后用 10%甘油洗滌菌絲體兩次 ⑴ 。各對引物序列如表 1 所示：表 1. 擴(kuò)增 PhyA 基因的 3 對引物序列引物 1 P1(24mer)：5 ， GC GGT ACC CTT CTC ATA GGC ATC A3’P2(24mer)：5 ， GG AAG CTT CTA AGC AGA ACA CTC A3，引物 2 P
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