乳酸菌實(shí)驗(yàn)報(bào)告(存儲(chǔ)版)
【正文】 15280439339組員：王小英 鄭春玲 闕小琴 柳潔實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?；、染色的基本技術(shù)，掌握乳酸菌的簡(jiǎn)單染色法及無(wú)菌操作接種技術(shù)；，了解配制培養(yǎng)基的一般步驟和方法，掌握微生物實(shí)驗(yàn)常用的器皿的清洗與包扎、培養(yǎng)基的制備、消毒滅菌。通過(guò)革蘭氏染色以及形態(tài)學(xué)觀察，乳酸菌呈紫色，為革蘭氏陽(yáng)性菌；乳酸菌應(yīng)為乳桿菌和乳球菌的混合體。藥品配制結(jié)晶紫：結(jié)晶紫乙醇飽和液（結(jié)晶紫2g溶于20ml 95%乙醇中）20ml，1g草酸銨于蒸餾水100ml。生理鹽水：，溶解在少量蒸餾水中，稀釋到100毫升。4．過(guò)濾 要趁熱用四層紗布過(guò)濾5．培養(yǎng)基的分裝 將培養(yǎng)基趁熱分裝到2個(gè)三角瓶里(一半為宜)。（注意：滅菌桶內(nèi)的物品不能放得太擠，否則會(huì)影響滅菌效果）。用一支1ml無(wú)菌吸管從中吸取1ml酸奶懸液注入9ml無(wú)菌水的試管中，吹息三次，使充分混勻。劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置于放在40℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。2) 上升聚光器，使之與載物臺(tái)表面相距1毫米左右。 1) 先用粗調(diào)節(jié)旋鈕將鏡筒提升（或?qū)⑤d物臺(tái)下降）約2cm，轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器將油鏡轉(zhuǎn)至鏡筒正下方。、復(fù)原 觀察完畢，上旋鏡筒，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后再用擦鏡紙沾取少許二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去鏡頭上的殘留油跡，最后再用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。 (3) 脫色 將載玻片上面的水甩凈，并襯以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現(xiàn)紫色時(shí)為止，約20—30秒鐘，立即用水沖凈酒精，以終止脫色。先用低倍鏡觀察，對(duì)準(zhǔn)焦距，視野中看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，使目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度平行，移動(dòng)推動(dòng)器，使兩尺重疊，再使兩尺的“0”刻度完全重合，定位后，仔細(xì)尋找兩尺第二個(gè)完全重合的刻度，計(jì)數(shù)兩重合刻度之間目鏡測(cè)微尺的格數(shù)和鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)。用最大和最小的數(shù)值來(lái)表示菌體大小的范圍。另一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格，即2516。稀釋度選擇以小方格中的分布的菌體清晰可數(shù)為宜。如果是25個(gè)大方格組成的計(jì)數(shù)區(qū)，除數(shù)上述四個(gè)格外，還需數(shù)中央l個(gè)中格的保加利亞乳桿菌菌數(shù)（即80個(gè)小格）。數(shù)小時(shí)后，培養(yǎng)基表面的下層出現(xiàn)紅色者，為陽(yáng)性(2)糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)將表下表所示培養(yǎng)基成分(指示劑除外)稱取、溶解、搖勻，—，添加1．6％溴甲酚紫指示劑，按l％的濃度添加試驗(yàn)糖類并溶解，分裝試管，每管5mL，121℃蒸汽滅菌20min。1. 若不給自己設(shè)限，則人生中就沒(méi)有限制你發(fā)揮的藩籬。歲月是有情的，假如你奉獻(xiàn)給她的是一些色彩，它奉獻(xiàn)給你的也是一些色彩。努力過(guò)后，才知道許多事情，堅(jiān)持堅(jiān)持，就過(guò)來(lái)了。（3）用滅菌吸管吸取滅菌的液體石蠟，注入已長(zhǎng)好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1cm為準(zhǔn)，使菌種與空氣隔絕。洗凈后，并用吸水紙吸水，最后用擦鏡紙擦干凈，并放回盒內(nèi)。尋找時(shí)光圈要縮小，光線要偏暗些，并將計(jì)數(shù)室移至視野中央。然后再換算成1mL菌液中的總菌數(shù)。常用的血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室有兩種規(guī)格的刻度網(wǎng)格。如果測(cè)量菌體的長(zhǎng)度相當(dāng)于目鏡測(cè)微尺的兩格， μm2 = μm。其中保加利亞乳桿菌呈桿狀，成單桿、或雙桿菌或長(zhǎng)絲狀；嗜熱鏈球菌，呈球狀，成對(duì)、或短鏈、或長(zhǎng)鏈狀。 (1) 初染 加草酸銨結(jié)晶紫染色液一滴，約1一2分鐘，傾去染色液，用自來(lái)水小心地沖洗。（如果是自然采光顯微鏡，降下聚光器，反光鏡與聚光器垂直）。3) 移動(dòng)推動(dòng)器，換高倍鏡觀察。八、乳酸菌的形態(tài)觀察及保加利亞乳桿菌的形態(tài)觀察（一）普通光學(xué)顯微鏡的使用 從顯微鏡箱中取出顯微鏡時(shí)，用一手握鏡臂，一手托鏡座，直立移動(dòng)，輕放在平穩(wěn)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，使用前首先要熟悉顯微鏡的結(jié)構(gòu)和性能，檢查各部零件是否齊全，鏡頭是否清潔，做好必要地清潔和調(diào)整工作。(a)用接種環(huán)以無(wú)菌操作挑取菌液一環(huán)，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線34條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約70176。三、無(wú)菌檢查 將取出的滅菌培養(yǎng)基放入37℃ 溫箱保溫培養(yǎng)24小時(shí)，經(jīng)檢查若無(wú)雜菌生長(zhǎng)，即可待用。在每捆試管外掛上標(biāo)簽，注明培養(yǎng)基名稱、配制日期和制作者姓名 二、滅菌1．打開(kāi)高壓蒸汽滅菌鍋，將里面的滅菌桶取出，向鍋內(nèi)加水(最好用開(kāi)水)
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