【正文】 有Lf，且每個LfNP表面的Lf數(shù)約為55。 Biodegradable nanoparticle。然而，脂質(zhì)體的穩(wěn)定性差及單克隆抗體效果的不穩(wěn)定限制了其進一步應用[810]。此外，聚乙二醇和聚乳酸都是FDA已批準的輔料，將使載藥系統(tǒng)具有較好的生物相容性和安全性[17，18]。采用透射電鏡技術(shù)（TEM）和動態(tài)光散射分析（DLS）對LfNP和NP的形態(tài)，粒徑進行表征。將載有香豆素6的LfNP和NP稀釋成含1－60 μg/ml的納米粒供試液，按不同濃度每孔加入1 ml（空白孔加1 ml HBSS），分別放入37℃及4℃孵育1 h，考察細胞在4℃和37℃下對LfNP和NP的攝取情況。用酶標儀在450 nm處讀數(shù)。以SPSS軟件進行統(tǒng)計學分析。圖1納米粒的透射電子顯微鏡照片，標尺均為100 nmANP；BLfNP；C加入抗Lf一抗和連接有10nm膠體金兔抗羊IgG二抗后的LfNP；D僅加入連接有10nm膠體金兔抗羊IgG二抗的LfNP；E加入抗Lf一抗和連接有10nm膠體金兔抗羊IgG二抗后的NPFig. 1 Transmission electron micrograph of different nanoparticles negatively stained with phosphotungstic acid solution. Bar on each photo was 100 nm.A NP。37 186。2h后，LfNP廣泛分布在整個細胞且進入細胞核（圖3H）而NP則主要分布于胞漿。C incubation for 1h, respectively。C. The magnification bar is 100 181。給予LfNP和NP后，血中的香豆素6濃度沒有顯著差異，說明少量Lf連接在納米粒表面并不影響PEG的長循環(huán)功能。本文采用Lf構(gòu)建的新型生物可降解腦內(nèi)遞藥系統(tǒng)LfNP粒徑在150nm以下，適宜用于腦內(nèi)遞藥。的研究表明被K562髓性白血病細胞攝取后的Lf可以進入細胞核并與DNA結(jié)合，Nuijens等人的研究也表明Lf可能具有調(diào)節(jié)基因表達的功能，這與我們觀察到LfNP在細胞核中的分布相一致。然而，其體內(nèi)毒性和長期毒性還有待進一步考察。NEIL R G. Tight junction protein expression and barrier properties of immortalized mouse brain microvessel endothelial cells [J]. Brain Res, 2007, 1130:1730.[22] DESAI M P, LABHASETWAR V, WALTER E, et al. The mechanism of uptake of biodegradable microparticles in Caco2 cells is size dependent [J]. Pharm Res, 1997, 14:15681573.[23] GRAU A J, WILLG V, FOGEL W, et al. Assessment of Plasma Lactoferrin in Parkinson’s Disease [J]. Movement Disord, 2001, 16(1):131134.[24] FAUCHEUX B A, NILLESSE N, DAMIER P, et al. Expression of lactoferrin receptors is increased in the mesencephalon of patients with Parkinson disease [J]. Proc Natl Acad Sci USA Neurobiology, 1995, 92:96039607. [25] KAWAMATA T, TOOYAMA I, YAMADA T, et al. Lactotransferrin immunocytochemistry in Alzheimer and normal human brain [J] Am J Pathol, 1993, 142(5):15741585.[26] PLARD J P, BAZILE D. Comparison of the safety profiles of PLA50 and –PLA50 nanoparticles after single dose intravenous administration to rats [J]. Colloid Surface B, 1999, 16:173183.[27] MATSUSUE Y, HANAFUSA S, YAMANURO T, et al. Tissue reaction of bioabsorbable ultra high strength poly (l–lactide) rod. A longterm study in rabbits [J]. Clin Orthop, 1995, 317:246253.[28] ZAMBAUX M F, BONNEAUX F, GREF R, et al. Protein Cloaded monomethoxypoly (ethylene oxide) –poly(lactic acid) nanoparticles [J]. Int J Pharm, 2001, 212:19.[29] THOTATHIL Z, JAMESON M B. Early experience with novel immunomodulators for cancer treatment [J]. Expert Opin Inv Drug, 2007, 16(9):13911403.[30] TOMITA M, WAKABAYASHI H, YAMAUCHI K, et al. Bovine lactoferrin and lactoferricin derived from milk: production and applications [J]. Biochem Cell Biol, 2002, 80(1) :109112.16 / 16。臨床研究證實了Lf的安全性[29, 30]。因此，我們認為測得細胞中的香豆素6主要反應了包載其的納米粒的分布情況。 D cortex after LfNP administration。通過測定香豆素6在血和腦中的濃度評價兩種納米粒在血和腦中的分布，結(jié)果表明，兩種納米粒在腦內(nèi)的藥時曲線相似，約在1h時達峰（圖6），LfNP腦內(nèi)的AUC(0–t)。m，其余標尺為100 181。C孵育30 min后的攝取情況Fig. 2 uptake quantitative results, n=3 *p＜ A 160 μg/ml Lf–NP and NP at 37 186。由熒光顯微鏡照片可看出，在37 186。C的攝取量均高于4 186。13）個Lf。將各樣品的峰面積比代入相應的標準曲線求得腦組織及血樣中的藥物濃度。104個細胞的密度接種于96孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)過夜。棄去納米粒溶液，細胞用PBS沖洗三次，取出玻片放入4%多聚甲醛中于室溫固定20 min，用PBS漂洗3次后，用熒光封片劑封片，用相差及熒光顯微鏡觀察。巰基化