【正文】 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的結(jié)果表明，給予NP，Lf和LfNP后，各組細(xì)胞活力無(wú)顯著差異，體外證實(shí)了LfNP良好的安全性。 E striatum region after NP administration F striatum region after LfNP administration圖6小鼠尾靜脈注射60 mg/kg納米粒后血和腦中的香豆素6的藥時(shí)曲線，n=3Fig. 6 Blood and brain concentrationtime profiles of coumarin6 following . injection of coumarin6 loaded Lf–NP and NP at a dose of 60 mg/kg in mice. n=3.4. 討論粒徑大小直接影響微粒系統(tǒng)被腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)吞的能力，通常用于腦內(nèi)遞藥的納米粒和脂質(zhì)體的粒徑都在200nm以下。mA/I h；D/L h；B/J NP孵育1 h；E/M LfNP孵育1 h；C/K NP孵育2 h；F/N LfNP孵育2 hFig. 3 Fluorescent microscopy photographs of cells exposed to 15 μg/ml Lf–NP and NP at 37 186。C，給予相同濃度的LfNP和NP后， 細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度隨著時(shí)間的推移而增強(qiáng)，在30min，1h和2h， LfNP組的熒光均顯著強(qiáng)于NP組。體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明載香豆素6的LfNP和NP在pH pH %，因此，香豆素6可以作為熒光探針示蹤納米粒。分別加入樣品濃度為0－ mg/ml 的Lf、NP和LfNP的PBS溶液，37℃孵育4 h，溶液用110 μl 新鮮的培養(yǎng)液（含CCK8 10 μl）替換，37℃孵育4 h。成初乳前有機(jī)相中加入香豆素6，制備載香豆素6的 NP和LfNP，以Sepharose CL4B除去未包封的香豆素6。目前最具代表性的受體介導(dǎo)腦內(nèi)遞藥系統(tǒng)OX–26結(jié)合的免疫脂質(zhì)體成功用于小分子藥物及基因藥物的腦內(nèi)遞送，證實(shí)了受體介導(dǎo)途徑優(yōu)良的腦內(nèi)遞藥能力[6, 7]。 結(jié)果 制得的LfNP形態(tài)圓整，粒徑在110 nm左右。結(jié)論 LfNP能顯著增加藥物的腦內(nèi)遞送且具有較好的生物相容性，有望作為一種新型的腦內(nèi)遞送系統(tǒng)輸送蛋白多肽和基因等大分子藥物入腦?，F(xiàn)已證明多種生物BBB表面均存在Lf受體（LfR），能夠介導(dǎo)Lf轉(zhuǎn)運(yùn)[1214]。 LfNP腦內(nèi)遞藥特性和生物相容性的體外評(píng)價(jià) ，置于24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)1天。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)重復(fù)采集3只小鼠樣品。 E NP stained with antiLf primary antibody and 10nm colloidal gold labeled rabbit antigoat IgG sequentially. LfNP腦內(nèi)遞藥特性和生物相容性的體外評(píng)價(jià)，各時(shí)間點(diǎn)LfNP的攝取量均高于NP。C孵育1h后的攝取情況；B10 μg/ml Lf–NP和NP在37 186。這說(shuō)明LfNP通過(guò)不同于NP的機(jī)理轉(zhuǎn)運(yùn)入腦。因此。NNERDAL B. Mammalian lactoferrin receptors: structure and function [J]. Cell Mol Life Sci, 2005, (62):25602575.[14] HUANG R Q, KE W L, QU Y H, et al. Characterization of lactoferrin receptor in brain endothelial capillary cells and mouse brain [J]. J Biomed Sci, 2007, 14:121128.[15] JI B, MAEDA J, HIGUCHI M. Pharmacokinetics and brain uptake of lactoferrin in rats [J]. Life Sci, 2006, 78:851855.[16] OLIVIER J C. Drug transport to brain with targeted nanoparticles [J]. NeuroRx174。有文獻(xiàn)報(bào)道在某些病理?xiàng)l件下（如帕金森病和Alzheimer’s病）Lf受體在腦內(nèi)的表達(dá)量會(huì)增加[2325]，雖然這種現(xiàn)象的機(jī)理還沒(méi)有明確，我們卻可以借助Lf的這種性質(zhì)利用LfNP更好的治療這些疾病在進(jìn)行新型藥物傳遞系統(tǒng)開發(fā)過(guò)程中，一個(gè)非常重要的方面就評(píng)價(jià)其生物相容性和對(duì)于靶細(xì)胞的毒性，對(duì)于腦內(nèi)遞藥系統(tǒng)更是如此。mA給予NP后的第三腦室室周區(qū)；B 給予LfNP后的第三腦室室周區(qū)；C 給予NP后的大腦皮質(zhì)；D給予LfNP后的大腦皮質(zhì)；E 給予NP后的紋狀體區(qū)域；F給予LfNP后的紋狀體區(qū)域Fig. 5 Distribution of NP and Lf–NP in mouse brain after . 60 mg/kg nanoparticles in mouse caudal vein, visualized using the FITC filter 1h. The magnification bar is 50 181。C incubation for different time。4 ℃時(shí)，兩種納米粒的攝取很快達(dá)到飽和，未見有顯著差異。 ）nm和（ 177。加入10 μg/ml LfNP和過(guò)量Lf（10 mg/ml）37℃孵育30min進(jìn)行攝取抑制試驗(yàn)。1. 儀器和材料JY92II超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；R200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀和B490恒溫水?。˙uchi，德國(guó)）； NICOMPTM 380 ZLS粒度/zeta電位測(cè)定儀（NICOMP，美國(guó)）；PHI 5000C X射線光電子能譜儀（ESCA system，美國(guó)）；CM 120透射電鏡（Philip，荷蘭）；CO2培養(yǎng)箱（Heraeus，中國(guó)香港）；UFXDX倒置相差顯微鏡（Nikon，日本）；UFXII熒光顯微鏡（Nikon，日本）；LC10A RF10AXL高效液相色譜儀（Shimadzu，日本）。大約98%的小分子藥物和幾乎100%的大分子藥物，包括酶，基因和siRNAs等均不能透過(guò)BBB[2]。乳鐵蛋白結(jié)合聚乙二醇聚乳酸納米粒腦內(nèi)遞藥特性的體內(nèi)外研究胡凱莉，李靖煒，沈燁虹, 陸偉，高小玲, 蔣新國(guó)基金項(xiàng)目：國(guó)家973項(xiàng)目“導(dǎo)向性納米載藥系統(tǒng)及其腦部疾病治療與診斷中的應(yīng)用基礎(chǔ)研究”作者簡(jiǎn)介：胡凱莉，女，博士研究生 通訊作者：蔣新國(guó)，男，研究員，博士生導(dǎo)師 Tel: (021)54237381 Email: xgjiang （復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院藥劑教研室，上海 200032）摘要：目的 構(gòu)建一種新型可生物降解腦內(nèi)遞藥系統(tǒng)乳鐵蛋白結(jié)合聚乙二醇聚乳酸納米粒（LfNP），并對(duì)其腦內(nèi)遞藥特性進(jìn)行體內(nèi)外評(píng)價(jià)。 Brain delivery 血腦屏障（BBB）在保護(hù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)免受外源性毒物損傷的同時(shí)也限制了大多數(shù)神經(jīng)治療藥物入腦，成為腦部疾病治療的最大障礙[1]。為了評(píng)價(jià)其腦內(nèi)遞藥特性，以香豆素6為熒光探針定性和定量地研究了小鼠腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)LfNP和N