【正文】 統(tǒng)計學分析的結果表明，給予NP，Lf和LfNP后，各組細胞活力無顯著差異，體外證實了LfNP良好的安全性。 E striatum region after NP administration F striatum region after LfNP administration圖6小鼠尾靜脈注射60 mg/kg納米粒后血和腦中的香豆素6的藥時曲線，n=3Fig. 6 Blood and brain concentrationtime profiles of coumarin6 following . injection of coumarin6 loaded Lf–NP and NP at a dose of 60 mg/kg in mice. n=3.4. 討論粒徑大小直接影響微粒系統(tǒng)被腦毛細血管內皮細胞內吞的能力，通常用于腦內遞藥的納米粒和脂質體的粒徑都在200nm以下。mA/I h；D/L h；B/J NP孵育1 h；E/M LfNP孵育1 h；C/K NP孵育2 h；F/N LfNP孵育2 hFig. 3 Fluorescent microscopy photographs of cells exposed to 15 μg/ml Lf–NP and NP at 37 186。C，給予相同濃度的LfNP和NP后， 細胞內的熒光強度隨著時間的推移而增強，在30min，1h和2h， LfNP組的熒光均顯著強于NP組。體外釋放實驗結果表明載香豆素6的LfNP和NP在pH pH %，因此，香豆素6可以作為熒光探針示蹤納米粒。分別加入樣品濃度為0－ mg/ml 的Lf、NP和LfNP的PBS溶液，37℃孵育4 h，溶液用110 μl 新鮮的培養(yǎng)液（含CCK8 10 μl）替換，37℃孵育4 h。成初乳前有機相中加入香豆素6，制備載香豆素6的 NP和LfNP，以Sepharose CL4B除去未包封的香豆素6。目前最具代表性的受體介導腦內遞藥系統(tǒng)OX–26結合的免疫脂質體成功用于小分子藥物及基因藥物的腦內遞送，證實了受體介導途徑優(yōu)良的腦內遞藥能力[6, 7]。 結果 制得的LfNP形態(tài)圓整，粒徑在110 nm左右。結論 LfNP能顯著增加藥物的腦內遞送且具有較好的生物相容性，有望作為一種新型的腦內遞送系統(tǒng)輸送蛋白多肽和基因等大分子藥物入腦?，F(xiàn)已證明多種生物BBB表面均存在Lf受體（LfR），能夠介導Lf轉運[1214]。 LfNP腦內遞藥特性和生物相容性的體外評價 ，置于24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)1天。每個時間點重復采集3只小鼠樣品。 E NP stained with antiLf primary antibody and 10nm colloidal gold labeled rabbit antigoat IgG sequentially. LfNP腦內遞藥特性和生物相容性的體外評價，各時間點LfNP的攝取量均高于NP。C孵育1h后的攝取情況；B10 μg/ml Lf–NP和NP在37 186。這說明LfNP通過不同于NP的機理轉運入腦。因此。NNERDAL B. Mammalian lactoferrin receptors: structure and function [J]. Cell Mol Life Sci, 2005, (62):25602575.[14] HUANG R Q, KE W L, QU Y H, et al. Characterization of lactoferrin receptor in brain endothelial capillary cells and mouse brain [J]. J Biomed Sci, 2007, 14:121128.[15] JI B, MAEDA J, HIGUCHI M. Pharmacokinetics and brain uptake of lactoferrin in rats [J]. Life Sci, 2006, 78:851855.[16] OLIVIER J C. Drug transport to brain with targeted nanoparticles [J]. NeuroRx174。有文獻報道在某些病理條件下（如帕金森病和Alzheimer’s病）Lf受體在腦內的表達量會增加[2325]，雖然這種現(xiàn)象的機理還沒有明確，我們卻可以借助Lf的這種性質利用LfNP更好的治療這些疾病在進行新型藥物傳遞系統(tǒng)開發(fā)過程中，一個非常重要的方面就評價其生物相容性和對于靶細胞的毒性，對于腦內遞藥系統(tǒng)更是如此。mA給予NP后的第三腦室室周區(qū)；B 給予LfNP后的第三腦室室周區(qū)；C 給予NP后的大腦皮質；D給予LfNP后的大腦皮質；E 給予NP后的紋狀體區(qū)域；F給予LfNP后的紋狀體區(qū)域Fig. 5 Distribution of NP and Lf–NP in mouse brain after . 60 mg/kg nanoparticles in mouse caudal vein, visualized using the FITC filter 1h. The magnification bar is 50 181。C incubation for different time。4 ℃時，兩種納米粒的攝取很快達到飽和，未見有顯著差異。 ）nm和（ 177。加入10 μg/ml LfNP和過量Lf（10 mg/ml）37℃孵育30min進行攝取抑制試驗。1. 儀器和材料JY92II超聲波細胞粉碎機（寧波新芝生物科技股份有限公司）；R200旋轉蒸發(fā)儀和B490恒溫水浴（Buchi，德國）； NICOMPTM 380 ZLS粒度/zeta電位測定儀（NICOMP，美國）；PHI 5000C X射線光電子能譜儀（ESCA system，美國）；CM 120透射電鏡（Philip，荷蘭）；CO2培養(yǎng)箱（Heraeus，中國香港）；UFXDX倒置相差顯微鏡（Nikon，日本）；UFXII熒光顯微鏡（Nikon，日本）；LC10A RF10AXL高效液相色譜儀（Shimadzu，日本）。大約98%的小分子藥物和幾乎100%的大分子藥物，包括酶，基因和siRNAs等均不能透過BBB[2]。乳鐵蛋白結合聚乙二醇聚乳酸納米粒腦內遞藥特性的體內外研究胡凱莉，李靖煒，沈燁虹, 陸偉，高小玲, 蔣新國基金項目：國家973項目“導向性納米載藥系統(tǒng)及其腦部疾病治療與診斷中的應用基礎研究”作者簡介：胡凱莉，女，博士研究生 通訊作者：蔣新國，男，研究員，博士生導師 Tel: (021)54237381 Email: xgjiang （復旦大學藥學院藥劑教研室，上海 200032）摘要：目的 構建一種新型可生物降解腦內遞藥系統(tǒng)乳鐵蛋白結合聚乙二醇聚乳酸納米粒（LfNP），并對其腦內遞藥特性進行體內外評價。 Brain delivery 血腦屏障（BBB）在保護中樞神經(jīng)系統(tǒng)免受外源性毒物損傷的同時也限制了大多數(shù)神經(jīng)治療藥物入腦，成為腦部疾病治療的最大障礙[1]。為了評價其腦內遞藥特性，以香豆素6為熒光探針定性和定量地研究了小鼠腦毛細血管內皮細胞對LfNP和N