重組人b淋巴細(xì)胞刺激因子工程菌高密度發(fā)酵(存儲版)
【正文】 ol, 2006, 18(10): 14731485.[3] Zhang J, Roschke V, Baker K P, et al. Cutting edge: a role for B lymphocyte stimulator in systemic lupus erythematosus[J]. J Immunol, 2001, 166(1): 610.[4] Cheema G S, Roschke V, Hilbert D M, et al. Elevated serum B lymphocyte stimulator levels in patients with systemic immunebased rheumatic diseases[J]. Arthritis Rheum, 2001, 44 (6):13131319.[5] Xue X, Feng G, Li M, et al. Amelioration of experimental autoimmune encephalomyelitis by BLyS autovaccine[J]. Vaccine, 2008, 26(23): 28732881.[6] 李民,樸勤,陳常慶,等. 利用恒溶氧補(bǔ)料分批技術(shù)高密度培養(yǎng)大腸桿菌生產(chǎn)重組人骨形成蛋白2A[J]. Chinese Journal of Biotechnology (生物工程學(xué)報(bào)),1998 , 14 (3): 270276.[7] 劉文波，柴同杰. 大腸桿菌高密度發(fā)酵研究[J]. 動物科學(xué)與動物醫(yī)學(xué), 2001, 18(1):2729.[8] MacDonald H L, Neway J O. Effects of medium quality on the expression of human interleukin2 at high cell density in fefmentor cultures of Escherichia coli K12[J]. Appl Environ Microbiol, 1990, 56 (3): 640645.6 / 6。補(bǔ)料的流加方式直接影響著發(fā)酵的效果。我們采用建立的中試發(fā)酵工藝，三批重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果，最終菌體密度均超過A 600 nm25，菌體獲得量均達(dá)濕質(zhì)量濃度50 g/L 以上，目的蛋白表達(dá)量均高于40%，比試管和搖瓶的表達(dá)水平略有提高，取得了較佳的結(jié)果。溫度37℃，溶解氧35%左右，轉(zhuǎn)速于8 h左右達(dá)到800 r/min并開始利用純氧。 5: 誘導(dǎo)4小時(shí)菌體總蛋白。2 結(jié) 果2. 1 試管培養(yǎng)及條件優(yōu)化2. 1. 1 試管培養(yǎng)中誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)間的優(yōu)化 試管培養(yǎng)至對數(shù)中期(A600 =), mmol/ L IPTG誘導(dǎo)重組蛋白的表達(dá)， h取樣一次，SDSPAGE分析表達(dá)情況?？刂茀?shù)為溶氧及轉(zhuǎn)速：溶氧控制在30%～50%，達(dá)到最大轉(zhuǎn)速800 r/min后, 自動通入純氧。7H2O 。但研究結(jié)果僅局限于實(shí)驗(yàn)室規(guī)模。 高密度發(fā)酵中圖分類號: Q516。 重組大腸桿菌。BLyS已經(jīng)成為治療自身免疫性疾病的有效靶點(diǎn)，我們構(gòu)建了人BLyS疫苗表達(dá)重組載體，動物實(shí)驗(yàn)表明該重組疫苗對于多發(fā)性硬化和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型均具有良好的保護(hù)作用[5]。7H2O )；補(bǔ)料基質(zhì)中含有(g/L)：甘油適量，酵母粉5，蛋白胨10，MgSO41. 2. 3 5L自控發(fā)酵罐中分批補(bǔ)料培養(yǎng)
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