【正文】 Fertility Restorer Locus for Ogura Cytoplasmic Male Sterility. The Plant Cell 20，2022：33313345[28]Gray MW. Evolution of anellar genomes. Curr Opin Ge Dev 1999, 283:14761481.[29]Rhoads, , Levings, ., III, and Siedow, . URF13,a ligandgated, poreforming receptor for Ttoxin in the inner membrane of cmsT mitochondria. J. Bioenerg. Biomembr. 1995，27：437–445[30]Hong Zhang, haoqing Li, Ping Yi, Cuixiang Wan, Zuyu Chen , Yingguo Zhu. A Honglian CMS line of rice displays aberrant F0 of F0F1ATPase. Plant Cell Rep (2022) 26：1065 –1071[31]Dewey RE, Timothy DH, Levings CS. A mitochondrial protein associatied with Cytoplasmic male sterility in the T cytoplasm of maize. Proc Natl Acad Sci USA. 1987, 84:53745378[32]Balk J, Leaver CJ. The PET12 CMS mitochondrial mutation in sunflower is associated with premature programmed cell death and cytochrome release. Plant Cell 2022，13, 18031818[33]袁隆平，陳洪新．雜交水稻育種栽培學[M]．長沙：湖南科學技術出版社，1988：7785[34]Sabar M, Gagliardi D, Balk J, Leaver CJ. ORFB is a subunit of F1F0ATP synthase: Insight into the basis of cytoplasmic male sterility in sunflower. EMBO Rep 2022，4：16[35]（第二版）[M] 武漢：湖北科學技術出版社，2022[36]胡瓊,李云昌 ,梅德圣．屬間體細胞雜交創(chuàng)建甘藍型油菜細胞質(zhì)雄性不育系及其鑒定[J].中國農(nóng)業(yè)科學，2022，37：333338[37] [M]．北京：高等教育出版社，1999：228236 致謝19致謝本文在我的導師悉心指導下完成的。 orfH79 基因抑制大腸桿菌生長機理花藥與花粉的發(fā)育是非常復雜的過程，如果主要代謝途徑出現(xiàn)功能障礙如糖代謝，就可能影響花粉發(fā)育 [25]。測定管 對照管試劑一（ml）試劑二（ml）試劑三（ml）試劑四（ml）試劑五（ml）11表Ⅱ?qū)⒏鞴苌鲜鲈噭┗靹蚝螅?7 度預熱 10min，然后按表Ⅲ進行操作測定管 對照管蒸餾水（ml）樣本（ml）00表Ⅲ加樣本的同時開始計時，快速混勻后，波長 340nm， 光徑的石英比色皿，蒸餾水調(diào)零，測定 30 秒時初始吸光度 A1 值，然后將比色皿中的反應液倒入預先編號的原試管中，放入水浴箱中準確水浴 15 分鐘，然后取出試管測定第二章 材料與方法1015 分 30 秒時的吸光度 A2 值。3）一個錐形瓶中的 pET28aorfH79 BL21 表達菌株培養(yǎng)六小時即 Na6 菌種，第二個錐形瓶中的 pET28aorfH79 BL21 表達菌株即 Na12 菌種，第三個錐形瓶中pET28a BL21 表達菌株培養(yǎng) 12 小時即 28a 菌種，將菌體轉移至離心管中，以 6000rpm 冰凍離心 10min，收集菌體。試劑四：粉劑4 支，20℃保存，用時每支加蒸餾水 320ul，用不完的試劑放20℃以下保存。2）培養(yǎng)基。線粒體又是細胞能量過程重要場所，丙酮酸激酶對于線粒體中反應過程中具有重要的作用?；|(zhì)內(nèi)含 有與三羧酸循環(huán)所需的全部酶類，內(nèi)膜上具有呼吸鏈酶系及 ATP 酶復合體。研究發(fā)現(xiàn)，它們內(nèi)、外膜的化學成分是不同的。（2）葉綠體和線粒體都有其獨特的 DNA，可以自行復制，不完全受核DNA 的控制。根據(jù)這個學說，它們起源于內(nèi)共生于真核生物細胞中的原核生物。 利用大腸桿菌研究植物細胞質(zhì)雄性不育 利用大腸桿菌研究過的 CMS 基因已有的研究表明一些經(jīng)過轉基因鑒定的引起植物細胞質(zhì)雄性不育的基因，在原核生物中表達對其生長具有抑制作用。以上 4 種方法獲得的差異片段可直接作為探針從線粒體 DNA 文庫或 eDNA 文庫中篩選陽性克隆，進而確定與細胞質(zhì)雄性不育有關的閱讀框。趙榮敏等學者將 orf224 部分編碼序列及全長序列導入大腸桿菌，結果發(fā)現(xiàn)具有 orf224 特異表達產(chǎn)物特征的大腸桿菌生長減緩，推測 orf224 可能編碼一個毒蛋白。 植物細胞質(zhì)雄性不育可能的形成機理盡管在一些植物中已經(jīng)鑒定出與 CMS 有關的線粒體 DNA 片段，但是對植物細胞質(zhì)雄性不育的機理仍然知之甚少。線粒體對呼吸作用的能量代謝起重要作用，而丙酮酸激酶是能量代謝的關鍵酶。（請在以上相應方框內(nèi)打“√” ）作者簽名： 日期：導師簽名： 日期：摘要IorfH79 基因轉化大腸桿菌丙酮酸激酶酶活的測定專 業(yè)：生物工程 學 號：XXX學生姓名： XX 指導教師： XXX摘要細胞質(zhì)雄性不育（CMS）現(xiàn)象在植物中普遍存在，表現(xiàn)為雄性敗育，但雌配子和營養(yǎng)生長正常。NANCHANG UNIVERSITY 學 士 學 位 論 文 THESIS OF BACHELOR（20XX—20XX 年）題 目: orfH79 基因 轉化大腸桿菌丙酮酸激酶酶活的測定 學 院： 生命科學院 系 生物技術系 專業(yè)班級： 生物工程 學生姓名： XX 學號： XXXXXXXX 指導教師： XXX 職稱： XXXX 起訖日期： XXXXXX 南 昌 大 學學士學位論文原創(chuàng)性申明本人鄭重申明：所呈交的論文是本人在導師的指導下獨立進行研究所取得的研究成果。本學位論文屬于 不保密□。 線粒體中央是基質(zhì)，基質(zhì)內(nèi)含有與三羧酸循環(huán)所需的全部酶類，內(nèi)膜上具有呼吸鏈酶系及 ATP 酶復合體。本文則是利用水稻雄性不育來研究核質(zhì)互作。免疫細胞學分析表明，在轉基因植株中異常發(fā)育的小孢子細胞壁表達出不育相關蛋白 orf239，認為 orf239 序列的表達可能與轉基因煙草的花粉敗育直接相關?？梢圆捎萌缦路椒ǎ?)用已知線粒體基因作探針對上述材料線粒體 DNA 進行 RFLP 分析或 Northern 分析，尋找二者間存在差異的基因；2)用限制性內(nèi)切酶消化不育和正常胞質(zhì)線粒體 DNA，直接從分離膠上回收并克隆不育或正常 mtDNA 特異片段；3)用 APPCR、RAID 或 AFLP 等方法比較正常和不育胞質(zhì)線粒體 DNA 差異，克隆不育系特異的擴增片段；4)用差異展示的方法，尋找不育與正常胞質(zhì)線粒體差異 RNA。而黑麥不育和正常胞質(zhì)的 atp6 和 coxl 位點有差異。是關于真核生物細胞中的細胞器，線粒體和葉綠體起源的學說。灰孢藻的發(fā)現(xiàn)是對“內(nèi)共生假說”的有力支持。 （4）線粒體、葉綠體的內(nèi)、外膜有顯著差異，內(nèi)、外膜之間充滿了液體。 丙酮酸激酶與線粒體的關系線粒體由兩層膜包被，外膜平滑，內(nèi)膜向內(nèi)折疊形成嵴，兩層膜之間有腔，線粒體